Способ определения состояния микрофлоры кишечника

(9) (12 0 1/О ЕНИ ИЗО ИС ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Евапз 03., Евапз О. ОРц Роп Н, 1.Негпадд цт 1 пабоп рацегпз о 1 епсеготохдеп 1 сапб еп 1 егоратЬодеп 1 с ЕзсЬегсна со 11детеггппед впФ 1)цп)ап, Ьоч 1 пе, сЫКеп, апбдц 1 пеа р 1 д егуйгосу 1 ез 1 и йе Ргезепсе апбаЬзсепсе о 1 таппозе. - 1 п 1 естоп апс1 Т) тцпЮ, 1979, 23, М 2, р. 336 - 346,Брилис В,И., Брилене Т.А., Лецнер А.А,Методика изучения адгезивного процессамикроорганизмов. - Лабораторное дело,1986, М 4, с. 210 - 212,Изобретение относится к медицине, в частности в медицинской микробиологии, и может быть использовано для характеристики патогенности микроорганизмов и уточнения патогенеза заболевания,Целью изобретения является сокращение сроков, повышение точности и упрощение способа.Выделения человека сеют на плотную питательную среду, обеспечивающую рост ожидаемых микроорганизмов в концентрации, обеспечивающей рост изолированных колоний, инкубируют при 37 С 18 - 20 ч, на поверхность агаризованной среды с выросшими колониями наносят 3%-ную взвесь эритроцитов, отмытых фосфатным буфером рН 7,2. Через 2 - 5 мин чашки просматрива(54) СПОСОб ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ МИКРОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА(57) Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской микробиологии, и может быть использовано для характеристики патогенности микроорганизмов, уточнения патогеноза заболевания, Целью изобретения является сокращение сроков, повышение точности и упрощение способа. Для определения количества адгезин-активных бактерий на первичные колонии микро- флоры фекалий наносят взвесь эритроцитов морской свинки. Проводят агглютинацию аритроцитов, Для установления типа адгезинов проводят репликацию первичных посевов и полученные колонии обрабатывают эритроцитами разных видов животных с последующим" учетом результатов. Способ может найти применение для оценки патогенности микроорганизмов и ее роли в возникновении заболеваний,ют под бинокулярной лупой и учитывают наличие и степень агглютинации и эритроцитов на колониях. Реакцию оценивают как положительную в том случае, если вокруг колонии образуется плотный ореол прикрепленных к ее краю эритроцитов. Резко положительной считают реакцию, в которой наблюдают быстрое прикрепление к колонии большого числа эритроцитов, покрывающих всю ее поверхность с образованием на поверхности скоплений агглютината и яркого ореола вокруг нее, Отсутствие ореола из прикрепленных к колонии эритроцитов говорит об отрицательной реакции. При необходимости определения типа адгезинов с первичного посева с помощью репликатора делают отпечатки на чашки с той жепитательной средой. Количество чашек должно соответствовать количеству видов эритроцитов, взятых в опыт, Полученные реплики инкубируют 18 - 20 ч при 37 С, затем в каждую чашку еносяти 3(,-ную взвесьотмытых фосфатным буфером рН 7,2 эритроцитов определенной видовой принадлежности, Через 2-5 мин учитывают результаты,По классификации Ечэпэ определяют тип адгезина, экспрессируемый микообами, образовавшими данную колонию, Таким образом на основе полученных результатов определяют количество адгезин-активных бактерий и тип адгезинов,П р и м е р 1, Определение адгезивности бактерий микрофлоры кишечника детей, больных диареей.1 г фекалий суспензируют е 9,0 мл стерильного иэотонического раствора хлористого натрия, из этой суспензии делаютсерийные десятикратные разведения, изразведения 10 проводят высев 0,1 мл на5чашку Петри с 2 ф-ным мясопептонным ага ром, рассев осуществляют стериальными 25бусами для получения изолированных коло, ний, чашки инкубируют при 37 С в течение18 - 20 ч, На выросшие колонии наносят, Зо-ную суспензию эритроцитов морскойсвинки, так как известно, что с помощью 30этих эритроцитов можно обнаружить фимб риитипа, чаще всего встречающиеся у, энтеробактерий. Через 2 - 5 мин просматривают под бинокулярной лупой, подсчитывают общее число колоний с положительной 35реакцией,В посеве фекалий 159 детей, больныхдиэреей, в 138 случаях (86,8 ,) отмечено на личие - адгеэин активных колоний энтеробактерий, Причем среди этих 138 детей у 40130 в первичном посеве фекалий все 100 оьвыросших колоний были адгезивно активны, что составляет 81,8 О/. от всего количества детей, взятых в опыт. Необходимоотметить высокую степень интенсивности 45реакции между микробами колоний и эритроцитами в этих посевах.У 8 (5 О) детей адгезивность колоний впервичном посеве не превышала 50% уровня, т.в. не более половины выросших колоний были адгезивны.Таким образом у детей больных диареей е высоком проценте случаев (81,8 оь)все колонии первичного посева обладалиадгезив ными свойствами, и ричем я рко выражен ными,П р и м е р 2. По той же методикеобследовано 60 клинически здоровых детей. В 48 случаях (80) в первичном посевефекалий не обнаружено адгезин-активных колоний. У 9 детей (15;4) количество адгеэин-активных колоний было на уровне 40 - 50;(, и лишь в 5 случаев (3 ребенка) все колонии первичного посева фекалий были адгезивно активны, Таким образом у практически здоровых детей адгезивные колонии в первичном посеве встречали редко(не выше 5 оь) и интенсивность адгезии была невысока,П р и м е р 3, Однокоментное определение адгезивности бактерий микрофлоры кишечника и типа адгезиное.Г чашки с первичным посевом после инкубации при 37 С е течение 18 ч реплицируют выросший материал на 5 чашек с той же средой и инкубируют 18 ч при 37 С. На чашки наносят 37-ную суспензию эритроцитов. На каждую чашку наносят эритроциты одного вида (человека, морской свинки, барабана, быка, цыпленка), Через 2-5 мин просматривают под бинокулярной лупой и учитывают результаты, Система оценки та же.Всего исследовано 900 колоний (е среднем по 30 колоний в каждом посеве). Из них 290 колоний реагировали с теми или иными эритроцитами, Выделенные адгезин-активные бактерии различались по типам адгезинов, В соответствии с классификацией Ечапв их можно было отнести к адгезинамтипа СФА/1, Р-фимбриям и фимбриям, описанным у штамма Е 8775, реагирующим только с эритроцитами человека, При этом от одного больного можно было выделить микробные клетки с разными типами адгезинов, Из 40 колоний, выделенных от больного Н, 30 реагировали только с эритроцитами человека, 7 обладали фимбриями, реагирующими с эритроцитами человека, эритроцитами морской свинки, эритроцитами барана и эритроцитами цыпленка, т.е. имелитип адгезинов, 3 колонии с эритроцитами человека, эритроцитами барана (Р-фимбрии), Из 20 культур, выделенных от больного К, 15 реагировали только.с эритроцитами человека, 5 колоний - с эритроцитами человека, быка, цыпленка(СФА/ тип), Использование способа позволило уже на вторые сутки получить характеристику высееаемой популяции как по наличию адгезинактивных бактерий (в процентах), так и по типам их адгезинов, Эти данные дают возможность подтверждения или установления этиологического диагноза заболевания, особенно вызванного условно-патогенными микробами,Таким образом предлагаемый способ позволяет анализировать по признаку адгезии все колонии, выросшие на чашке, исключает ошибку случайной выборки1611932 Формула изобретения Способ определения состояния микро- флоры кишечника, включающий посев исследуемого образца фекалий на плотную питательную среду, получение колоний, постановку реакции гемагглютинации с тестСоставитель А.федоровТехред М,Моргентал Корректор А.Обручар, Редактор Н.Бобкова Заказ 3813 Тираж 487 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 колоний, позволяетотобрать на чашке колони заведомо обладающие и не обладающие адгеэинами, сокращает срок анализа и по. зволяет установить тип адгезинов уже на вторые сутки, Кроме того, способ прост в исполнении и не требует специального оборудования. эритроцитами с последующей оценкой количества адгезин-активных бактерий по степени взаимодействия с эритроцитами, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с. целью 5 сокращения сроков, повышения точности иупрощения способа, реакцию гемагглютинации и оценку количества адгезин-активных бактерий проводят непосредственно на поверхности колоний, при этом в качестве 10 тест-зритроцитов используют эритроцитыморской свинки, затем дополнительно реплицируют колонии и наносят на реплики эритроциты животных разных видов с последующим определением типа адгезинов 15 по взаимодействию их с эритроцитами.