Способ получения афинного сорбента

,) ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН био зобретение от о ситсялучени аффинныхчестве ли- графической югии и касается сорбентов ганда геп очистки ф содерж ин, дл их ромат ментов бретен шение б орбента. Цель и селектиннп ги нно основан н йствие ка том, что осуще- оксилсодержащеом в водной сре пос ствляют Го носи ля с гепа тствии в орастворимого4,5-6,0. При взс сорбентом уч де в присукарбодиимида при римодействии гепари ГОСУДАРСТВЕННЫИ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЬПИПРИ ГННТ СССР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Институт элементоорганическихсоединений им. А.Н.Несмеянова, Научно-прочзнодственное объединение "Биолар" и Институт химической и биологической физики АН ЭССР(56) Арр 1 гсагоп оГ 1 пппоЬ 1 ггей Нераг 1 пз Гог 1 зо 1.асгоп оЕ Нцшап. Ап 1 гЬгощЬп 111. - БгоесЬпо 1 ояу апйВгоещпеег 1 щ. 1986, у. 28, И 8,р. 217-222.Патент С 1 ЧА Р 4576928,кл, В 01 1 20/22, 1986. ствуют аминогруппы частично десульфированного гепарина или аминогруппыследовых количеств белка, прочно связанного с гепарином. Нельзя исключить 1 4 С 12 1)1 9/00, Б 01 1 20/22(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АФФИННОГО СОРБЕНТА(57) Изобретение относится к препаративной биохимии и биотехнологиии касается получения аффинных сорбентов для очистки ферментов, Изобретение может быть также использовано нмедицине для гемосорбции, Цель изобретения - повышение биоселективностиаффинного сорбента. Для этого гепарин присоединяют к карбоксилсодержащим матрицам с помощью )водорастноримого карбодиимида при массоном соотношении матрицы и гепарина от 300:1до 30:1 и рн 495-био. 1 табл. и взаимодействие за счет первичных гидроксильных групп, Таким образом, данный способ не связан с модификацией карбоксильных групп гепарина, получаемые сорбенты обладают большим отрицательным зарядом, что оказывает влияние на силу электрического взаимодействияП р и м е р 1, 3 г СН-агарозы оставляют набухать в дистиллированной воде на 2 ч, трижды меняя воду. Суспензируют отмытую и набухшую агарозу в 20 мл водь., в которой растворено 100 мг гепарина и добавляют 100 мг И-этил-И -(3-диметиламинопропил)-карбодиимида. В течение 30 мин поддерживают на рН-метре рН 4,5, а затем1479511 Удельная УдельнаяСтепеньактивность активностьочисткисырья продуктаед.акт./мг ед.акт./мг Опыт Сорбент Выход конц, гепарина мг/гсорбента 74 74 74 74 74 74 74 32 80 25 77 25 72 26 76 23 74 2,8 641,8 75 2350 1880 1850 2100 1730 211118 1 СН-агар-геп2 сил.СООН-геп3 сил.СООН-геп4 сил,СООН-геп5 сил.акрил-гепб . АН-агар-геп7 ВгСГ 1.-агар-геп 2 10 20 15 реакционную массу перемешивают 1 б ч,Полученный сорбент промывают на пористом Фильтре 1 Г 1 Г 1 аС 1. (200 мл),О, 1 М Г 1 аНСОэ (200 мл) и водой (300 мл).Концентрация гепарина в полученномсорбенте 8 мг/мп.П р и м е р 2. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но в качестве карбоксилсодержашего сорбентаиспользуют карбоксилированный силохром С. Концентрация гепарина вполученном сорбенте 50 мг/г.П р и м е р 3. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но гепаринберут в количестве 10 мг, а в качестве конденсирующего агента используют Г 1-циклогексил-Г 1 -2-(4-метилморфолин)-этилкарбодиимид в количестве10 мг. 20Концентрация гепарина в полученномсорбенте 1 мг/мл,П р и м е р 4, Способ осуществляютаналогично примеру 1, но берут 50 мггепарина, 50 мг Г 1-этил-Г 1-(3-диметиламинопропил)-карбодиимида и конденсацию ведут при рН 6,0. Концентрация гепарина в полученном сорбенте5 мг/мл.П р и м е р 5. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но реакциюведут в О, 1 Г 13 С буфере при рН 5,0.Концентрация гепарина в полученномсорбенте 6 мг/мл.П р и м е р 6. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но в качестве карбоксилсодержящего сорбентаиспользуют полиакриловую кислоту, радиационно привитую к силохрому. Концентрация гепарина в полученном сорбенте 25 мг/мл.Полученные сорбенты обладают биоселективностью, отличной от биоселективности сорбентов, получаемых присо" единением гепарина к АН-агарозе и ВгСГ 1-агароэе, что подтверждается данными хроматографической очистки фермента (плацентарной фосфатазы) на синтезированных сорбентах (см. табл.)Изобретение позволяет получать гепаринсодержащие сорбенты на карбоксилсодержащих носителях различного типа (агароза, силохром, полиакрилсилохром). Концентрацию стационарного лиганда можно варьировать от 1 до 50 мг на 1 г сорбента, что позволяет синтезировать сорбенты с требуемой концентрацией в зависимости от решаемой задачи. Методика синтеза исключает использование токсичных соединений и проводится в водной среде. Формула и з о б р е т е н и я Способ получения аффинного сорбента путем взаимодействия гепарина с водонерастворимым носителем в присутствии водорастворимого карбодиимида при рН 4,5-6,0, о т л и ч а ю щ и й - с я тем, что, с целью повышения биоселективности сорбента, используют носитель, содержащий карбоксильные группы, и процесс ведут при массовом соотношении носитель - гепарин 30021-3031.