Способ получения моноспецифической антисыворотки к орозомукоиду человека

(51)5 А 61 К 39 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ К(71) Московский научно.ионкологический институт ими Московский научно-исслеститут эпидемиологии иим, Н Г. Габричевского 3 следовательский . П. А. Герцена овательский ин- микробиологии ого адъюванта Фрейворотка в иммунном одной полосе преци. жей орозомукоиду, т.е.еской,с равным объемом полда. Полученная антисэлектрофорезе дает попитацни, соответствуюявляется моноспецифи УДАРСТВЕККЫК КОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКОИ АНТИСЦВОРОТКИ КОРОЗОМУКОИДУ ЧЕЛОВЕКА(57) Изобретение относится к иммунологии,точнее к иммуноднагностике. Цель изобретения - упрожение способа. Для этого к100 мл донорской сыворотки добавляют сухой полиэтиленгликоль до 22% концентрации, рН 5, 6 доводят с поможью 0,100-ного р-ра ацетата натрия, тжательно перемешивают иа магнитной мешалке 24 ч, центрифугнруют 3000 д в течение 30 мин, Супернатант сифонизируют: фракция супернатанта,дает с антисывороткой к сывороточным белкам крови человека в иммунофорезе 5 дуг преципитацни, соответствуюжих альбумину, оро зом ухо иду, а 1 - антитр и псину, гаптоглобину и трансферину. Для идентификации линии преципитации, соответствуюжей орозомукоидозу, в лунку диаметром 1,5 мм заливают 5 мкл 1,500-ного раствора лектина нз проростков пшеницы. При электрофоретическом разделении над лункой происходит торможение линии преципитации, соответст,. вуюжей орозомукоиду. Для получения моноспецнфической антисыворотки к орозому. коиду вырезают полосу геля, содержажую соответствующий прецнпитат, многократно отмывают забуференным физиологическим раствором (0,15 М 1 ЧаС 1, растворенный в 0,01 М фосфатном буфере 7,2). Отмытую полоску агарозы солюбизируют в 0,5 мл 6 М р-ра йодистого калия. После растворения 0,25 мл полученной суспензии смешивают13817 Формула иэобрегения 1Изобретение относится к нммунологнн, вчастности к нммуноднвгностике.Целью нзобретення является упрощениеспосооа. К 00 мл доибрской сыворотки добав.5 ляют сукой полнэтнленглнколь до 22 Я кон.центрацнн, рН доводят до 5,6 с помощью 0,1 Я-ного раствора ацетата натрия, тщательно перемешивают на магнитной мешалке в течение 1 ч прн комнатной темпе. 10 ратуре, центрнфугнруют прн 3000 д в течение 30 мня. Супернатант снфоннзнруют н используют дальше. Фракция супернатанта дает с антнсывороткой к сывороточным белкам крови человека в нммунофореэе 5 дуг прецнпнтацнн, соответствуюшнх альбу- мину, орозомуконду, а,-антнтрнпснну, гап. тоглобнну и трансфернну. В дальнейшем фракцию, содержащую перечисленные выше белки, используют в линейном нммуноэлехт. рофореэе (который проводят в веронал-меди- ро наловом буфере с молярностью 0,06 н рН 8,6 прн напряжении 2 В/см), где белки указанной фракции с антнсывороткой ко всем сывороточным белкам человека образуют 5 линейных полос прецнпнтацня, расположенных на разном удалении от. базисной линии. Для идентификации линии прецнпнтацни, соответствующей орозомуконду, в лунку диа. метром 1,5 мм, находящуюся на удалении 5 мм от полоски геля, содержащего антнген, заливают 5 мкл 1,5 Я-ного раствора лектина нэ проростков пшеницы (любого вида). Прн электрофоретнческом разде 732ленни над лункой с лектнном происходит торможение линии преанпнтвцян, соответст. вующей орозомуконду. Для получения мо. носпецнфнческой антисывороткн к орозомуконду вырезают полосу геля, содержащую соответствующий прецнпитат, многократно отмывают эабуференным физиологическим раствором (представляющим собой 0,15 М хлорнстый натрий; растворенный в 0,01 М фосфатном буфере рН 7,2), отмытую полос. ку агарозы солюбнлнзнруют в 0,5 мл б М раствора йодистого калия. После полного растворения 0,25 мл полученной суспензия смешивают с равным объемом полного адьюванта Фрейда. Цикл иммунизации кроля. ков состоит нз трех подкожных ннъек. цнй по 0,5 мл суспензия с интервалом в 10 дней. Забор крови производят на 1 О-й день после последней иммунизации.Полученная таким образом антнсыворот ка в нммунном электрофореэе дает по одной полосе преципнтации, соответствующей ороэомуконду, т.е. является моноспецнфнф ческой. Способ получения моноспецнфнческой антнсывороткн к ороэомуконду человека путем иммунизации животного нммунным комплексом, содержащим орозомуконд, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, используют нммунный комплекс, реагирующий с лектнном, полученным нэ проОост ков и шен и цы.Составитель Г. Крюковагедактор В. Трубченко Техред И. Верес Корректор М 1 ЬарошиЗаказ 3088, Т 1 рал 543., Поди ис ноеВИИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж 35, Гаушская наб., д. 4/5Производственно.поли рафиче кое предприятие, г. Ужгород, ул Проектная, 4