Способ получения убихинона q 9

союз советснихСОЦИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИН ПИС ОБРЕТЕН ЬСT госудАРстненный комитет ссс ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ ВТОРСНОМУ СВИ(71) Институт почвоведения и фсинтеза АН СССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УБИХИНОНА Я(57) Изобретение относится к микробиологии и касается получения убихинона Я 9, используемого в медицине.Цель изобретения - повышение выходацелевого продукта. Сущность способасводится к тому, что фототрофныебактерии выращивают в питательнойсреде Пфеннига, полученную биомассулиофильно высушивают, затем омыляютПосле омыления целевой продукт экстрагируют органическим растворителемпромывают и высушивают. Выход убихинона1,8-2,6 мг/г сухих клеток1 1353808 ВНИИПИ Заказ 5670/24 Тираж 500 Подписное Произв,-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицине при терапии сердечно-сосудистых заболеваний, заболеваний, связанных с энергетикой клетки, и в научных исследованиях при изучении процессов дыхания и Фотосинтеза, Фотохимических реакций при Фотосинтезе.Целью изобретения является ловышение выхода целевого продукта.П р и м е р 1, Убихинон ( получают из клеток бактерий Кйос 1 оряецс 1 ошопав чегЫея ВЬ 1. Культуру выращива"ют на среде Пфеннига следующего состава, г/л: ИНС 1 0,33, КНРО 0,33;М 8 С 1 0,33 КС 1 0,33 МаНСО 1,50,СаС 1 0,33, Ма-яблочнокислый 2,0;дрожжевой экстракт 0,01 микроэлементы 1 мл, 20Состав микроэлементов, г/л: ЭДТА5,0; Ре 80 7 НО 2,0, МпС 1 4 НО 0,03,СаС 1 2 НО 0,2, ИеС 1 6 Н 0 0,02;КпЯО 7 Н 0 0,1; Н ЬО, 0,3, СцС 1,х"2 НО 0,01; Иа МОО 2 Н 0 0,03; рН 25среды 6,0. Выращивание проводят насвету (20 х 10 эрг/см с) при 30 С.Полученную биомассу отделяют откультуральной жидкости с помощью сепаратора и лиофильно высушивают. За- З 0тем проводят омыление - 1 г сухихклеток помещают в колбу с мешалкой,приливают 10 мл воды, 0,5 г пирогаллола в 15 мл этанола и 5 мл 25%-ного1.раствора КОН (при использовании сырых З 5клеток берут навеску 5 г и добавляют5 мл воды), Смесь кипятят с обратнымшариковым холодильником в течение25 мин при перемешивании в токе аргона, затем охлаждают на бане со льдом.Добавляют 15 мл воды и экстрагируютпетролейным эфиром, гептаном или гексаном три раза по 50 мл, Водную фазуотделяют с помощью делительной воронки, Объединенный экстракт желтого цвета промывают два раза водой донейтральной реакции и высушивают надсульфатом аммония.Далее экстракт отфильтровывают,количественно переносят в колбу длявыпаривания и упаривают под вакуумомпри 45 С,Сухой красно-оранжевый осадокрастворяют в 2 мл смеси для элюциии наносят на колонку (1,6 х 15 см) с55водяной рубашкой. ХроматограФию убихинона проводят на окиси алюминиядля тонкослойной хроматографии илиокиси алюминия 11 степени по Брокману. Элюцию проводят смесью петролейный эфир (т.кип. 40-70 С) - хлороФорм - диэтиловый эфир (85: 10:5),объем 100 мл. Францию в виде япкооранжевой полосы с К 0,55, содержащую убихинон (, отделяют и упаривают,Рехроматографию проводят либо напластинах силуфол, либо с помощьювторой колонки с Окисью алюминия Всистеме петролейньп эфир - диэтиловый эфир - ледяная уксусная кислота (90:30: 1). Элюат упаривают и определяют количество убихинона весовым методом или спектрофотометрически по поглощению спиртового растворапри 275 нм, используя малярный коэфФициент экстинкции Е = 14,600 длякюветы с длиной оптического пути 1 см.Выход убихинона Ц, 2,6 мг/1 гсухих клеток.П р и м е р 2, Убихинон Ц 9 получают при выращивании пурпурной бактерии КЬосоряецйошопая яц 1 ЕочегЫевР 1 на среде Ормерода с добавлением0,01% дрожжевого экстракта, 0,05%тиосульфата и 0,2% лактата натрия.Убихинон вьделяют из полученныхклеток КЬ. яц 1 Гоч 1 гЫея Р 1 аналогично примеруВыход 0 1,8 мг/1 г сухих микробных клеток.Использование предлагаемого способа выделения убихинона обеспечивает по сравнению с известным в 1020 раз (О, Ъ,2 мг/г сухих клеток),а по сравнению с другими известными -в 100 раз увеличение выхода убихинона 09 Формула изобретенияСпособ получения убихинона О, включающий культивирование штаммапродуцента, отделение биомассь, ее омыление с последующим вьделением убихинона из неомыленной фракции, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве продуцента используют штамм Куосоряецдошопая чегЫея В 1.1 или штамм КЬос 1 оряецс 1 ошои аз яц 1 Госет Ы 1 я Р 1.