Способ идентификации

(51) 4 С 12 Ф фЩМЬ, я зр .,ВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ГОСУДАРСПО ДЕЛ ОПИСАНИЕ ИЭОБРЕТЕНИ ЛЬСТВ К АВТОРСКОМУ С гическом растворе конц млн клеток /мл.К 1 мл ч зио ей траци еловеч 1(10 ф бавляю ойиол ыворотки, разведен гическим раствором осударственныи вования врачей П.Николае Методы экспегии. Киев: Нау. И САИДИ)А сти ится к о рной мик ости опр логииделеСапг 1 дбов р дрожж вырапг взвес ых н фи(21) 3614960/28-14(57) Изобретение отно медицинской и ветерин С целью повышения точ ния дрожжеподобных гр гга из суточных культу дрожжеподобных грибов среде Сабуро, готовят 0,1 мл приготовленнои взвеси гриба,инкубируют 3 ч при 37 + 0,5 С и готовят микроскопические препараты,которые погружают на 1 мин в0,1%-ный раствор метиленового синего, промывают водой в течение 45 мини высушивают. Наносят на мазки специфический конъюгат иммуноглобулинапротив Сапй 1 г 1 а а 1 Ъсапз, меченныйфлюорохромизотиоцианатом, в рабочемразведении, выдерживают во влажнойкамере при 37 С в течение 15 мин иоподвергают люминесцентному микроскопированию в сине-фиолетовых лучах.Сапг 1 Ыа а 1 Ь 1 сапз идентифицируют приналичии свечения клетки и его отсутствии у ростковой трубки,130361 Составитель Е,ЯрныхТехред Л.Олейник Корректор С. Пекмар Редактор М.Циткина Заказ 1278/29 Тираж 500 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д,4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г,ужгород, ул,Проектная, 4 Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микологии и можетбыть использовано в лабораториях,осуществляющих видовое определениедрожжеподобных грибов рода Сапйкс 1 а.Цель изобретения - повышение точности определения.Способ осуществляется следующимобразом,Иэ суточных культур дрожжей идрожжеподобных грибов, выращенных насреде Сабуро, готовят взвеси в физиологическом растворе концентрацией1 млн клеток/мл. К 1 мл человеческойсыворотки, разведенной 1/10 физиологическим раствором, добавляют 0,1 млприготовленной взвеси гриба и инкубируют 3 ч при 37+0,5 Спосле чегооклетки отделяют центрифугированиемв течение 15 мин при 2000 е, Осадокклеток затем однократно отмывают дистиллированной водой при том же режиме Осадок взвешивают в минимальномобъеме дистиллированной воды, взвесь25наносят на предметные стекла и фиксируют метанолом,Для гашения ауто 4 цтюоресценции препараты погружают на 1 мин в 0,1 Я-ныйраствор метиленового синего, послечего промывают проточной водопровод"ной водой в течение 45 мин, На высушенные мазки наносят специфическийконъюгат иммуноглобулина против СапйЫа а 1 Ь 1 сапв, меченный флюорохромизотиоцианатом, в рабочем разведении 35и выдерживают во влажной камере при37 С в течение 15 мин, Затем мазкипромывают в проточной водопроводнойводер высушивают и микроскопируют всине-фиолетовых лучах при помощи люминесцентного микроскопа,5 2При иммунолюминесцентном исследовании дрожжевая клетка окрашивается(светится) специфически при отсутствии такого свечения ростковой трубки,При окраске тем же специфическимконъюгатом иммуноглобулина противСапс 1 кс 1 а а 1 Ьсапя других дрожжеподобных грибов рода СапйЫа выявляетсяспецифическое окрашивание (свечение)как тела клетки, так и образования,морфологицески сходного с ростковойтрубкой,Аналогичное исследование 24 видовдрожжечодобных грибов и 4 видов истинных дрожжей не выявило специфического окрашивания,Способ позволяет исключить ложноположительные результаты идентификации СапйЫа а 1 Ьсапя, а также позволяет определить вид другого гриба,например, СапйЫа 1 корЬ 1 са 1 ц на стадии чистой культуры,Ф о р м у л а изобретения Способ идентификации СапдЫа а 1- Ьсапя путем проращивания чистой культуры в сыворотке крови при температуоре 37+ 0,5 С в течение 3 ч с последующим приготовлением микроскопического препарата и его исследованием, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности, микроскопический препарат дополнительно окрашивают специфическим конъюгатом иммуноглобулина против СапйЫа а 1 Ъдсапя, меченного фпюорохромизотиоцианатом и идентифицируют СапдЫа а 1 Ьксапя при наличии свечения клетки и ф отсутствии свечения ростковой трубки,