@ -нитроанилид @ -пироглутамил@ -фенилаланил@ -аланина хромогенный субстрат тиоловых протеиназ

ZIP архив

Текст

1198082 2 могенному производному пептида формулы СН 2 - СН-СО-ЮН-СИ - СО-Ъ 1 Н - СН - СО - ИН Б 021Нг,С- МН СНЯССЭО.которое может найман применение в ка 1честве субстрата для определенияактивности протеолитических ферментов, относящихся к класс тиоловыхпротеиназ, в энзимологии, медицине,биохимии, микробиологйй.Цель изобретения - поиск новыххромогенных субстратов тиоловых протеиназ пептидного строения, .обладающих более высокой специфичностьюк этому классу ферментов,П р и м е р. 154 мг (0,53 ммаль)бромгидрата п-нитроанилида Ь-аланина растворяют в 2,0 мл 0,2 М карбонат-бикарбонатного буфера рН 9,9,добавляют 0,53 мл 1 М раствора триэтиламина в диметилформамиде и 154 г(0,53 ммоль) метилового эфира Ь"пнроглутамил-Ь-фенилаланин и 1 мг химотрипсина. Через 2 мин выпадает обильный осадок, который оставляют на 1 чпри 20 С и на 10 ч при 4 С, Затемпромывают на Фильтре 1 н. солянойкислотой и водой. Сушат в вакуумэксикаторе над щелочью. Выход 173 мг,(с=1, диметилформамид). Чистота препарата определялась методом ТСХ напластинках марки Б 1 ийо 1, К=0,61(бутанол-уксусная кислота-вада200:35:70), Ну=0,91 (этилацетатпиридин-вода-уксусная кислота 40300;18:68:32), К=О,81 (бутанолуксусная кислота-пиридин 15: 3: 12110).Аминокислотный анализ. Определено:С 1 и 11,2 нмоль (1,08), А 1 а 10,3нмоль (1,00) РЬ е 10,4 нмоль (1,01) фВычислено: 61 ц 1; А 1 а 1; РЬ е 1.Синтезированный и-нитроанилидЬ-пироглутамил-Ь"фенилаланил-Ь-аланина используется для определенияпротеолитической активности тиоловых протеиназ, При гидролизе субстрата тиоловыми,протеиназами прогь 50 ИИПИ Заказ 7686/26 Тираж 353 Подписно Филиал ППП "Патент", г.Ужгород, ул.Проектна Изобретение относится к новомухроисходит выделение п-нитроаннлина и наблюдается линейная зависимость изменения оптической плотности при 410 нм от количества фермента. Определение активности Ферментов проводится по следующей методике.К 1,8 мл 0,1 М Фосфатного буфера рН 7,0, содержащего 0,3 М КС 1, 0,1 мМ ЭДТА, 0,3 мМ дитиоэритрита добавляют 50 мкл раствора субстрата в диметилсульфоксиде (концентрация 10 мг/мп), термостатируют 5 минопри 25 С и добавляют О, 1 мл раствора фермента в том же буфере. Через 10 мин реакцию останавливают добавлением 0,2 мл 1 н. НС 1 и измеряют оптическую плотность при 410 нм.Значения удельной активности ферментов в мкмоль субстрата на оптическую единицу фермента в минуту составили для папаина 910, для Фицина 380, для бромелаина 200. Удельная активность того же препарата папаина, определеннаяпо Ю-бензоил-Ь-ар-. гинин п-нитроанилиду, составила 4. Препараты фицина и бромелаина не расщепляли стандартный субстрат даже в течение суток.Таким образом, удельная активность папаина по предлагаемому субстрату в 227 раз выше, чем по стандартному субстрату М-бензоил- Ь-аргинин п-нитроанилнду.Константы Михаэлиса (К), рассчитанные по методу Эди-Хофсти, составляют 0,72 для паданка, 0,53 для фицина, 0,57 для бромелаина. Для субстрата Я-бенэоил Ь-аргинин и-нитроанилида К =3 для папаина. Такимнобразом, папаин имеет в 5 раз лучшее значение Кя по и-нитроанилиду Ь-пироглутамил-Ь-фенилаланил-Ь-апанину, чемпо и-нитроанилиду В-бензоил-Ь"аргинина.

Смотреть

Заявка

3762288, 02.07.1984

МГУ ИМ. М. В. ЛОМОНОСОВА

СТЕПАНОВ ВАЛЕНТИН МИХАЙЛОВИЧ, ЛЫСОГОРСКАЯ ЕЛЕНА НИКОЛАЕВНА, ФИЛИППОВА ИРИНА ЮРЬЕВНА, ОКСЕНОЙТ ЕЛЕНА СЕМЕНОВНА, ЛЮБЛИНСКАЯ ЛЮДМИЛА АРОНОВНА

МПК / Метки

МПК: C07K 5/097

Метки: аланина, нитроанилид, пироглутамил, протеиназ, субстрат, тиоловых, фенилаланил, хромогенный

Опубликовано: 15.12.1985

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-1198082-nitroanilid-piroglutamil-fenilalanil-alanina-khromogennyjj-substrat-tiolovykh-proteinaz.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">@ -нитроанилид @ -пироглутамил@ -фенилаланил@ -аланина хромогенный субстрат тиоловых протеиназ</a>

Похожие патенты