Способ получения монослоя эритроцитов для проведения иммунологических реакций
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Текст
1182 Составитель В.ДроздовРедактор А.Лежнина Техред А.Кикемезей Корректор М,Самборская Заказ 6098/42 Тираж 896 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент",г. Ужгород, ул, 11 роектная, 4 1Изобретение относится к иммунологии и может найти применение при экспериментальных и клинических ис.следованиях.Целью изобретения является упрощение способа.Способ осуществляют следующим образом.Чашки Петри (5 С 10 мм) тщатель. но обезжиривают в смеси Никифорова О в течение 24-48 чПеред постановкой опыта бинтом насухо протирают внутреннюю поверхность и наливают в каждую по 4 мл 0,2%-ного раствора поли-,Я,И-диметил-И,И-диаллиламмо нийхлорида (ПДМЦААХ), инкубируют при комнатной температуре в течение 60 мин, после чего раствор поликатиона сливают, чашки трижды промывают забуференным физиологическим 20ь раствором хлористого натрия с рН 7,2, Из трижды отмытых эритроцитов барабана готовят 47-ную взвесь, в каждую чашку вносят по 4 мло взвеси и инкубируют при 37 С в тече ние 30 мин. Затем чашки тщательно отмывают большим объемом забуференного физраствора для удаления неприклеевшихся к стеклу эритроцитов. Равномерность созданного моно- слоя проверяют при помощи светового микроскопа.Исследуют лимфоциты периферичес.- кой крови здоровых доноров. В тщательно обезжиренные чашки Петри наливают по 4 мл 0,27-ного раствора35 ПДМДААХ, инкубируют 2 ч, после чего раствор сливают, чашки трижды промывают забуференным физиологическим раствором хлористого натрия. Из отмытых эритроцитов готовят 47-ную взвесь, в каждую чашку вносят по 4 мл взвеси и инкубируют при 37 С ва 397 гтечение 30 мин. Затем чашки тщательно отмываютбольшим объемом забуференного физраствора для удаления неприкрепившихся эритроцитов. Моно- слой используют для определения количества клеток, обуславливающих антителозависимую цитотоксичность(К) и естественную (ЕК).Для определения К-клеток монослой. в течение 30 мин обрабатывают кроличьей антисывороткой против эритроцитов барана с преимущественным содержанием 186. По истечении срока инкубации чашки трижды промываютзабуференным физраствором и наливают по 4 мл культуральной среды(199, мономицин 1000 мкг/мл, 17 сыворотка 1 У (АВ) группы человека,0,5 Т НЕРЕЯ), содержащей 0,5-1,0 дх 10 кл./мл. Мононуклеарные клетки вы 6деляют на одноступенчатом градиенте фиколл-верографина с удельным весомэ1 077 г/см . Чашки с клетками инФокубируют 18 ч при 37 С и атмосфереСО. Затем монослой клеток фиксируют0,6 -ным раствором глутаровогоальдегида, окрашивают азурэоэиноми изучают под световым микроскопом.Подсчитывают 500 лимфоцитов, выделяясреди них клетки, образующие вокругсебя зону гемолиза-бляшку, соответствующую не менее 10 эритроцитам. Результаты выражают в процентах иабсолютных числах на 1 мкл крови.Чашки с монослоем эритроцитов,не покрытых антителами, служат дляподсчета ЕК-клеток. При изученииколичества К- и ЕК в клет у 10 здоровых доноров в возрасте 19-31 годаустановлено, что количество К-клетокравно 1,59+0, 13 (30,8+ 1,5 в мкл),ЕК-клеток к эритроцитам барана -0,8+0,15% (16,5+3,1 в мкл).
СмотретьЗаявка
3578085, 13.01.1983
АНДИЖАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ ИМ. М. И. КАЛИНИНА
БРЫСИН ВЕНИАМИН ГЕОРГИЕВИЧ, ОМЕРОВ МИДДАТ МАМЕДОВИЧ, ЗАУРОВ ДЖУРА ДОНИЕВИЧ, ТОПЧИЕВ ДМИТРИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ
МПК / Метки
МПК: G01N 33/48
Метки: иммунологических, монослоя, проведения, реакций, эритроцитов
Опубликовано: 30.09.1985
Код ссылки
<a href="https://patents.su/2-1182397-sposob-polucheniya-monosloya-ehritrocitov-dlya-provedeniya-immunologicheskikh-reakcijj.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения монослоя эритроцитов для проведения иммунологических реакций</a>
Предыдущий патент: Способ определения винной кислоты в отходах виноделия
Следующий патент: Способ определения -глюканов
Случайный патент: Устройство для счета штучныхизделий