Способ получения средства, селективно тормозящего размножение нормальных и лейкемических клеток

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУбЛИН А 4 А 61 К 35/28 НИЯ ОБ ИСАНИ АТЕНТУ/28-14 /28-14 6. Бюл. Р 16 Гедеон Ведье ти Дьяр Балаж, Михайуди, Тибор Кл арабаш (НП) 664;38:543.5 Венгрии 1624 3/00, 1967. аиго,пп 4 (0887,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ(72) АндрашЛайош Кишфали Миклошне Б(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА СЕЛЕКТИВНО .ТОРМОЗЯЩЕГО РАЗМНОЖЕНИЕ НОРМАЛЬНЫХ И ЛЕЙКЕМИЧЕСКИХ КЛЕТОК, путем экстрагирования сырья животного происхождения органическим растворителем, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чи стоты и активности целевого продук та, в качестве сырья используют селезенку теленка, которую гомогенизируют в органическом растворителе,смешивающемся с водой, отделяюттвердую фазу и проводят ее экстрагирование вначале жирорастворяющиморганическим растворителем, затемводой, отделяют жидкую фазу и изнее вьделяют фракцию с молекулярноймассой менее 10000, после чего вьделенную фракцию подвергают гель-хроматографии и вьделяют фракцию, осаждающуюся между объемными значениями( /1 1,3 и 2,5, лиофилизируют ее,хроматографируют и/или проводят бумажный электрофорез, выделяя белок,положительно реагирующий на хлор"толидин с относительной подвижностью0,55 и 0,65 в пересчете на аспарагиновую кислоту и показывающий отри-.цательный заряд при рН 6,5 или отсутствие заряда при рН 1,9 с относительной подвижностью 0,26 в пересчете на Е-ДНП-лизин с последующей лиофилизацией.1228776 Т а б л и ц а 1 ТЬушцз - торможение, 7 контроля В костный мозг - торможение, 7. контроля Количествоопытов 14,6 0,001 0,2 12 7,3 14 Изобретение относится к медицине,а именно к производству средств,которые могут быть использованы каклекарственные, и касается получениясредства, обладающего Фармакологической активностью из сырья животного происхожденияЦелью изобретения является повышение частоты и активности целевого продукта, 1 ОСпособ осуществляется следующимобразом.П р и м е р 1, Получение фракции61-3 из селезенки теленка.1000 г очищенной и измельченнойселезенки теленка смешивают с охлажоденным до 4 С ацетоном до полученияобщего объема 4 л, смесь гомогенизируют при этой температуре, в течение 60 мин инкубируют и затем центрифугируют. Отделенное твердое вещество промывают ацетоном и высушивают в вакууме при 20 С,Сухое твердое вещество экстрагируют 2 л хлороформа в течение 30 мин,затем твердое вещество отделяют, высушивают при комнатной температуре16 ч, перемешивают 3 л дважды дистиллированной воды и затем центрифугируют с 20000 г. Отделенную жидкость ЗОлиофилизируют, лиофилиэат растворяют в 0,05 М буферном растворе кислого карбоната аммония (рН,9) и подвергают гель-хроматографии на колонкеСефадекс 0-15. Фракцию, осажденнуюмежду Уе/У 1,3 и 2,5, отделяют и лиофилизируют, Таким образом, получают3,54 г концентрата эффективного вещества 01-3 в виде белого порошка,П р и м е р 2, 11 олучение чистого 4 Оэффективного вещества ОР,300 мг концентрата эффективного вещества 61-3, полученного по примеру 1, наносят на хроматографическую бумагу ватман ЗММ, исходный пункт расположен в середине листа, и общее количество нанесенного образца распределяется по длине 30 см, ЭлектроФорез проводят в буферной смеси из пиридина, уксусной кислоты и воды в объемном соотношении 90:4:900 (рН,5) в аппарате для электрофореза с горизонтальным расположением, градиентом напряжения 50 В/см и продолжительностью 2 ч. Положение кислого положительно реагирующего на хлори отрицательно на нингидрин компонента определяют по окраске хлоргидрином. Полученный таким образом активный компонент элюируют с бумаги буферной смесью из уксусной, муравьиной кислот и воды в объемном соотношении 8;2:90 (рН 1,9) и в такой жебуферной смеси подвергают дополнительному электрофорезу с градиентомнапряжения 80 В/см и продолжительностью 90 мин. Положение активного компонента, не показывающего при этом значения рН заряда, определяют с помощью реакции хлортолидина, Этот активный компонент элюируют такой же буферной смесью (рН,91) и элюат лиофилизируют, Таким образом, получают 8 мг чистого эффективного вещества ОР в виде белого порошка.Селективное действие 100 мг/мл 6 Р на введение Н-тимидина в кислодтонерастворнмую дезоксирибонуклеиновую кислоту в культурах костного мозга и ТЬушцз показано в табл, 1, действие Ии ОР-в табл, 2,1228776 Т а блица 2 мг/мг 61-3 Тип действия ь Е 50 МЭК МЭК 7,8 2,5 430 110 1,6 0,2 90 концентрация. Полученное в соответствии с изобретением вещество 6 Р можно применять в качестве биологически активного вещества для торможения размноСоставитель Л, ШилинаРедактор И, Рыбченко Техред И.Верес Корректор С Черни Заказ 2301/62 Тираж 660 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 МФ 3Введение Н-тими- дина в суспензионную культуру костного мозга (3-4 ч) ФМОбразование колоний в капиллярах геля агара (7 дн.) фМЭК - минимальная эффективнаяВсе значения измерены,Все значения подсчитаны,%УФ жения нормальных и лейкемических кровяных клеток или клеток костного мозга .дп чегго в концентрациях 0,210,0 пмоль/мл.1