Способ определения холинсодержащих фосфолипидов

Номер патента: 1168862

Авторы: Гордезиани, Куциава, Ломсадзе, Царцидзе

ZIP архив

Текст

(5 ц 4 С 01 И 33/48, 33/ Т ССС УДАРСТВЕНН ДЕЛАМ ИЗО ЙИ ЗОБРЕТЕНИЯ Ь тем, что, с целью повышениявительности и точности опредфосфолипиды растворяют в чехлористом углероде, а в качагента используют реактив дфа при объемном соотношениитвора фосфолипидов не ч вст еления(71) Тбилисский ордена ТрудовогКрасного Знамени государственныиуниверситет(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХОЛИНСОДЕР)КАЩИХ ФОСФОЛИПИДОВ путем обработки раствора фосфолипидов реагентом, образующим с фосфолипидами, мерением интенси окрашенного комп кой фазе, о т л крошенный компле с последующим изности поглощения екса в органичесч а ю щ и й с я1168862 Составитель Г, БелоусовТехред О.Ващишина Редактор А.11 андор Корректор Е, Сирохман Подписное Заказ 4609/38 Тираж 897ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4. Изобретение относится к биохимии, химии и физико-химической биологии и может быть использовано при биохимическом анализе фосфолипидов в растворах крови, органах и органел лах.животных. Целью изобретение является повыше ние чувствительности и точности определения.0П р и м е р. К 5 мг лизосом печени крыс прибавляют 10 мл смеси хлороформметанол 2:1, два раза смесью 1: по 5 мл и затем осадок заливают этой же смесью 1: 1 (5 мл) и оставля.ют на ночь. На следующий день экстракция липидов проводится еще дважды по 5 мл смесью хлороформ-метанола 2;1.Объединенные липидные экстракты 20 отмывают от водорастворимых примесей охлажденным раствором 15 мл О,ЗМ ИаС 1 (раствор добавляется с таким расчетом, чтобы верхний водный слой содержал не более 50 спирта, чтобы 25 он не извлекал фосфолипиды). После центрифугирования верхний водорастворимый слой отсасывается. Пленка, образующаяся на поверхности раздела двух фаз (хлороформенный и водно-спирто вой) растворяется добавлением небольшого количества этилового спирта. Хлороформенный экстракт, содержащий фосфолипиды, упаривают досуха, под вакуумом,при комнатной температуре, Общее количество липида определяют весовым методом: определено 2,75 мг общей фракции липидов, Липиды растворяют в 50 мл СС, (55 мкг/мл).Процесс выделения липидов и опре деления в них количества холинсодержащих фосфолипидов (фосфатидилхолин,сфингомиелин) проводят при стандартных условиях (комнатная температура 18 - 20 С, давление 760 мм рт.ст.),К 5 мл липидов (55 мкг/мл) прибавляют 5 мл реактива ДрагендорфаДля его приготовления 1,7 г нитрата висмута растворяют в 100 мл 20 . Уксусной кислоты (раствор), а 10 г иодида калия в 25 мл дистиллированной воды (1 раствор) и перед опытом 20 мл растворасмешивают с 5 мл раствором 11 и разбавляют 70 мл воды.После смешивания и встряхивания липидного раствора с реактивом Драгендорфа водную и органическую фазы разделяют и измеряют интенсивность поглощения, перешедшего в органическую фазу (СС 14) реактива при длине волны 500 нм и определяют количество холинсодержащих фосфолипидов по стандартной кривой, которая построена по известным концентрациям фосфотидилхолина. Количество холинсодержащих фосфолипидов в 1 мл СС 74 составляет 22 мкг. На выделенные из лизосом 2,75 мг липидов приходится (22 мкг х 50 мл)=1, 1 мг холинсодержащих фосфолипи;. дов, На 1 мг общей фракции липида лизосом приходится 400 мкг, а на 1 мг лизосом (1, 1 мг; 5 мг) =220 мкг холинсодержащих фосфолипидов.Предлагаемый способ более точно определяет заданное количество фосфолипида. Ошибка опыта в известном способе составляет 4,9 , а в предлагаемом - 3,3 . С помощью известного способа невозможно определить количество холинсодержащих фосфолипидов ниже 30 мкг, а предлагаемым способом можно определить 8 мкг холинсодержащего фосфолипида.

Смотреть

Заявка

3632574, 04.08.1983

ТБИЛИССКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

ГОРДЕЗИАНИ МАНАНА ВЛАДИМИРОВНА, ЦАРЦИДЗЕ МУРАД АЛЕКСАНДРОВИЧ, ЛОМСАДЗЕ БОРИС АРЧИЛОВИЧ, КУЦИАВА НАЗИБРОЛА АЛЕКСАНДРОВНА

МПК / Метки

МПК: G01N 33/48, G01N 33/52

Метки: фосфолипидов, холинсодержащих

Опубликовано: 23.07.1985

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-1168862-sposob-opredeleniya-kholinsoderzhashhikh-fosfolipidov.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ определения холинсодержащих фосфолипидов</a>

Похожие патенты