Способ получения полипептидов в бесклеточной системе трансляции
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Текст
, СОЮЗ СОЦИАЛ ГО СУДА ВЕДОМ ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН К АВТОР с ОВЕТСКИХИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИКРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР)(71) Институт белка Ан СССР(72) Баранов ВИ Рябова ПА; Ярчук ОБ Спирин АС.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДОВ В БЕСКЛЕТОЧВОЙ СИСТЕМЕ ТРАНСЛЯЦИИ (67) Изобретение относится к молекулярной биологии и биотехнологии и может быть использовано дпя препаративного синтеза полипептидов как в научны) так и в прикладных целях Преимущественной областью использования является препаративный синтез биологически активных пептидов и белков. Цепью изобретения является унификация способа препаративного получения полипептидов в бескпеточных системах и повышение выхода и чистоты целевого продукта. Способ осуществляется в бескпеточных системах трансляции непрерывного действия, в которых используются бескпеточные системы трансляции, полученные из клеток любых) С 1 гРИ Ог СОТК 1 К организмов; в систему добавлены экзогенные РНК- полимеразы; генетический материал подается в виде молекул ДНК содержащих соответствующий добавленной РНК-полимеразе промотор; из реакционной смеси непрерывно удаляются продукты реакции и непрерывно восстанавливаются исходные концентрации низкомолекулярных веществ Положительный эффект обусловлен возможностью препаративной экспрессии практически любых генов в виде молекул ДНК в любых бескпеточных системах трансляции. Способ может служить важным дополнением, а в некоторых случаях и альтернативной генно-инженерным методам и методу препаративной экспрессии генов в бескпеточной системе. Способ не требует специальной наработки матричных РНК что значительно ут 1 рощает и удешевляет его в сравнении с известным способом препаративного синтеза полипептидов и белков в бескпеточных системах трансляции непрерывного действия 13 зл.ф-лы, 5 ил.Изобретение относится к молекулярнойбиологии и биотехнологии, а именно к способам получения полипептидов в бесклеточных системах. Преимущественной областьюиспользования является препаративный 5синтез биологически активных пептидов ибелков,Известен способ препаративного синтеза полипептидов методом генной инженерии, основанным на внедрении в живую 10клетку чужеродной ДН К, генетический материал которой экспрессируется аппаратомклетки-хозяина 1-3).К недостаткам этого известного способа относятся ограничения, накладываемыеклеткой на продукты экспрессии гена, Этосвязано со сложностью выделения продуктаэкспрессии трансформированными клетками, летальностью некоторых целевых продуктов для клетки-продуцента, 20элиминированием трансформированныхплазмид из клетки, протеолитической деградацией или агрегацией продукта чужеродного гена, В результате только весьмаограниченный набор белков может быть эффективно синтезирован известным спосо бом,Известен способ препаративной экспрессии генов, основанный на использовании непрерывной бесклеточной системы З 0сопряженной транскрипции/трансляции(4, Непрерывные бесклеточные системы сопряженной транскрипции/трансляции свободны от ограничений, накладываемыхклеткой, и обеспечивают препаративную З 5экспрессию практически любых генов в виде молекулы ДНК, сконструированной нужным образом,К недостаткам этого известного способа относятся ограничения на использование бесклеточных систем эукариот. Дело втом, что при экспрессии генов указаннымспособом используются эндогенные РНКполимеразы того обьекта, из которого приготовлена бесклеточная система 45сопряженной транскрипции/трансляции.Это приводит к необходимости использования специальных методик выделения клеточного экстракта, обеспечивающихсохранность активности эндогенных РНКполимераз. Более того, в клетках эукариотпроцессы транскрипции и трансляции, какправило, разнесены в пространстве и вовремени: процесс транскрипции осуществляется в клеточном ядре, а процесс трансляции происходит в цитоплазме клетки послесоответствующих модификаций мРНК, Всвязи с этим получить надежную системусопряженной системы транскрипции/трансляции на основе экстрактов зукариотических клеток до настоящего времени не удалось, Единственный метод, обеспечивающий надежное получение таких экстрактов, основан на получении экстракта ЯЗО из бактериальных клеток ЕзЬегспа со. Однако данный способ также имеет существенный недостаток; всякая плазмида, содержащая интересующий нас клонированный ген, имеет в своем составе ген селекции (ген устойчивости к какому-либо антибиотику), который также находится под промотором РНК-полимеразы Е. со и экспрессируется столь же эффективно, как и интересующий нас ген. В результате в процессе функционирования дополнительно к нужному продукту в системе экспрессируется побочный продукт,В качестве прототипа выбран способ препаративного синтеза полипептидов в бесклеточных системах трансляции непрерывного действия с использованием матричных РНК, состоящий в том, что в бесклеточных системах трансляции осуществляют непрерывное удаление из реакционной смеси продуктов реакции, включая синтезированный полипептид, и непрерывное восстановление концентрации низко- молекулярных субстратов (5), Указанный способ позволяет осуществлять препаративный синтез практически любых полипептидов в бесклеточных системах трансляции, полученных из клеток любых организмов,Так, например, известен способ синтеза кальцитонина в бесклеточной системе трансляции непрерывного действия на основе лизата из зародышей пшеницы, В 1 мл бесклеточной системы содержится 0,5 мл лизата зародышей пшеницы, 0,1 нмоль мРНК кальцитонина, 64 мкг креатинфосфокиназы, 10 мкг ингибитора рибонуклеаз из плаценты человека, по 0,1 мкг ингибиторов протеаз (апротинин, пепстатин, лейпептин в буфере: 40 мМ НЕРЕЯ, рН 7,6, 75 мМ К ацетата, 1,9 мМ М 9 ацетата, 0,25 мМ спермидина, 6 мМ дитиотреита, 1,5 глицерина, 2 мМ АТР, 50 мкМ ОТР, 8 мМ креатинфосфата, 25 мкМ ( Н) лейцина (активность 50зКи/ммоль) и по 25 мкМ остальных 19 аминокислот.Бесклеточную систему помещают в ячейку для ультрафильтрации фирмы "Авсоп" и проводят синтез полипептидов при температуре 25 С, Отбор продуктов трансляции, включающих целевой продукт и продукты распада, (АМР, ООР, пирофосфат и неорганический фосфат) осуществляют через полупроницаемую мембрану с одновременной подачей субстратов в виде АТР, ОТР и аминокислот в течение 20 ч, В результате за время работы бесклеточнойистемы трансляции получают 10 нмоль альцитонина, что составляет 100 пмоль олипептида на 1 пмоль мРНК,К недостаткам этого способа относится евозможность экспрессии генетического атериала в виде ДНК. Основанный на беслеточных системах трансляции, данный пособ использует матричные РНК. Это озачает, что для реализации способа необхоима дополнительная работа по синтезу атричных РНК тем или иным способом. В о же время основная масса полипептидовбелков в живых клетках закодирована в иде молекул ДНК. Различными генно-иненерными манипуляциями в настоящее ремя выделено огромное число генов в вие молекул ДНК, Кроме того, синтез и разножение искусственных генов в виде олекул ДНК представляет собой несравенно более простую задачу, чем наработка атричных РНК.Целью изобретения является унификаия способа препаративного получения полипептидов в бесклеточных системах иЬвышение выхода и чистоты целевого прод кта.В бесклеточных системах трансляции н прерывного действия, в процессе работы к торых осуществляется непрерывное выв дение продуктов трансляции, в том числе и ипептидов, АМР, АОР, СОР, СОР, ООР, и ч фосфатов и неорганических фосфатов, с дновременным введением в систему субс ратов в виде аминокислотАТР, ОТР, СТР, О Р для поддержания их исходной концент ации, используются гены белков в виде м лекулДНК, имеющих промоторныеучастк, специфичные к чужеродным экзогенным Р К-полимеразам, а в систему трансляции д бавляются экзогенные РНК-полимеразы, с ответствующие выбранным промоторам,Сущность предложенного способа зак ючается в следующем. Экстракты прокар отических или эукариотических клеток, с,держащие рибосомы и все компоненты а парата трансляции, но свободные от энд генных мРНК и ДНК, готовят известными м тодами. К экстракту добавляют низкомол кулярные компоненты транскрипции и тр, нсляции (аминокислоты, АТР, 6 ТР, СТР, 0 Р), ген в виде молекулы ДНК, имеющие ли ерный участок, являющийся промоторо для экзогенной РНК-полимеразы, причем такая конструкция может быть ис ользована как в виде фрагмента ДНК, та и в виде плазмиды, экэогенную РНК- по имеразу, специфичную для выбранного пр мотора, а также в случае необходимости ин ибиторы эндогенных РНК-полимераз орга изма, иэ которого получен экстракт. Реакционную смесь вносят в резервуар, ограниченный от окружающего пространстваполупроницаемой перегородкой, где и протекает процесс сопряженной транскрипции/трансляции. Полупроницэемаяперегородка может быть как органического,так и неорганического происхождения, Вкачестве полупроницаемой перегородкимогут быть использованы ультрафильтраци 10 онные мембраны, полые волокна, микр апсулы или пленки, оболочка которыхпредставляет собой полиэлектролитныекомплексы. Для предотвращения остановкипроцесса иэ резервуара через полупрони 15 цаемую перегородку непрерывно отводятпродукты транскрипции (неорганическиефосфаты, АОР, СОР, СОР, ООР) и трансляции (синтезированный полипептид, АМР,СОР, неорганические фосфаты и пирофосфаты).Одновременно в резервуар подают аминокислоты, АТР, 6 ТР, СТР, ОТР для восстановления их исходной концентрации,Синтезированный полипептид собирают на25 колонке с сорбентом, а продукты транскрипции и трансляции собирают в специальном резервуаре для их последуощейрегенерации, Соотношения компонентов вреакционной смеси, ионные и температур 30 ные условия синтеза определяются свойствами организмов, из которых приготовленыбесклеточные системы и экзогенные РНКполимеразы, Диапазон этих условий достаточно широк. Способ позволяет35 осуществлять сопряженную транскрипцию/трансляцию в экстрактах из таких организмов, для которых сопряжениепроцессов трансляции и транскрипции ияро невозможно, Предлагаемый способ40 обеспечивает препаративный синтез полипептидов с постоянно высокой скоростьюв течение десятков часов с выходом функционально активного продукта (полипептида)1-10 нмоль с 1 мл реакционной смеси.45 На фиг.1,2,3,4,5 изображены графикизависимости количества синтезируемогополипептида (нмоль) от времени синтеза ч).Для катализа реакции из бесклеточнойсистемы транскрипции/трансляции из ре 50 тикулоцитов кролика взято 10 мл реакционной смеси до и через 0,5 ч после началаработы,Для катализа реакции из непрерывнойбесклеточной системы транскрипции/трансляции из ретикулоцитов кроликавзято также 10 мкл раствора А, содержащего продукты экспрессии, через 5,7,9 и 12 чпосле начала работы непрерывной системы,П р и м е р 1, Сопряженная транскрипция/трансляция фермента дигидрофолатредуктазы с плазмиды, содержащей ген дигидрофолат редуктазы под промотором ЯР 6полимеразы, в бесклеточной прокариотической системе трансляции из Е, со.Получают плазмиду, содержащую ген 5дигидрофолат редуктазы под промоторомЯРб полимеразы,Сопряженную систему транскрипции/трансляции готовят следующим образом. 101 мл реакционной смеси содержит 350мкл ЯЗО экстракта иэ Е. со 1, 0,2 мг тРНК, 0,1мг плазмиды, 20000 О ЯРб полимеразы, 0,1мг пируват киназы, 50 О рибонуклеазногоингибитора иэ плаценты человека, по 5 мкг 15ингибиторов протеаз (леупептина, химостина) и а 2-макроглобулина в буфере А: 50 мМТрисАс, рН 7,5, 14 мМ М 9 Сг, 100 мМ КАс,2 мМ СаАсг, 1 мМ АТР, 0 4 мМ ОТР, 04 мМСТР, 0,4.мМ ОТР, 10 мМ фосфоенолпирувата, 4,0 мМ дитиотреита, 50 мкМ спермидина,10 мкг лейковорина, 40 мкМ рифампицина,ингибитора РН К-полимеразы Е, со 1, 30 мкМЯ Мет с удельной радиоактивностью 800МКи/ммоль и по 30 мкМ каждой из остэльных 19 аминокислот,Синтез проводят при температуре 37 Св реакционной ячейке. Питательную смесьпропускают со скоростью 1,5 мл в 1 ч. Отборцелевого продукта и продуктов распада осуществляют путем отбора питательной смеси, прошедшей черезультрафильтрационную мембрану, с одновременной подачей в ячейку буфера А в течение 24 ч. 35В течение всего времени синтез продукта проходит с постоянной скоростью (фиг.1),В результате синтезируют 680 пмоль фермента дигидрофолат редуктаэы за 24 ч работы. Синтезированный фермент 40функционально активен. Удельная активность полученного фермента составляет0,13104 ед. активности на 1 пмоль синтезированного фермента,В данном случае плазмида содержит 45ген дигидрофолат редуктаэы под промотором ЯР 6 полимеразы и генф-лактамазы подпромотором РНК-полимераэы Е, со. Поскольку в систему вводят ингибитор РНКполимераэы Е, со рифампицин, в системе 50синтезировался только целевой продукт дигидрофолат редуктаэа высокой чистоты, несодержащий каких-либо примесей Р-лактамазы.П р и и е р 2. Сопряженная транскрипция/трансляция Р -лактамазы с фрагментаДНК, содержащего ген Р -лактамазы и короткий участок промотора Т 7 полимераэы, в бесклеточной прокариотической системе трансляции из Е, со.Получают плазмиду, содержащую ген предшественника 3-лактамаэы и промотор для Т 7 полимеразы,Сопряженную систему транскрипции/трансляции готовят следующим образом,1 мл реакционной смеси содержит 350 мкл ЯЗО экстракта из Е. со 1, 0,1 мг тРНК, 0,04 мг фрагмента ДНК, 30000 О Т 7 полимерээы, 0,1 мг пируват киназы, 50 О рибонуклеаэного ингибитора из плэценты человека, по 5 мкг ингибиторов протеаз (леупептина, химостина) иа 2-макроглобулина в буфере А: 50 мМ ТрисАс, рН 7,5, 14 мМ М 9 Сг, 100 мМ КАс, 2 мМ СаАсг, 1 мМ АТР, 0,4 мМ ОТР, 0,4 мМ СТР, 0,4 мМ ОТР, 10 мМ фосфоенолпирувата, 4,0 мМ дитиотреита, 50 мкМ спермидина, 10 мкг лейковорина, 40 мкМ рифампицинэ, 30 мкМ ( Нец с удельной радиоактивностью 1,7 Ки/ммоль и по 30 мкм каждой из остальных 19 аминокислот.Синтез проводят при температуре 37 С в реакционной ячейке. Питательную смесь пропускают со скоростью 2 мл в 1 ч. Отбор целевого продукта и продуктов распада осуществляют путем отбора питательной смеси, прошедшей через ультрафильтрационную мембрану, с одновременной подачей в ячейку буфера А в течение 20 ч.В течение всего времени синтез продукта проходит с постоянной скоростью (фиг.2). В результате синтезируют 250 пмоль 1 В -лактамаэы эа 20 ч работы системы.П р и м е р 3, Сопряженная транскрипция/трансляция дигидрофолэт редуктаэы с плаэмиды, содержащей ген дигидрофолат редуктазы под промотором ЯРб полимераэы в бесклеточной эукариотической системе трансляции из зародышей пшеницы.Получают плазмиду, содержащую ген дигидрофолат редуктазы под промотором ЯРб полимеразы.Сопряженную систему транскрипции/трансляции готовят следующим образом.1 мл инкубационной смеси содержит 320 мкл экстракта иэ зародышей пшеницы, 0,1 мг плаэмиды, содержащей ген дигидрофолат редуктаэы, 20000 О ЯРб полимеразы, 0,1 мг пируват кинаэы, 50 О рибонуклеазного ингибитора из плаценты человека, по 5 мкг ингибиторов протеээ(леупептина, химостатина) и а 2-макроглобулина в буфере А: 40 мМ НЕРЕЯ, рН 7,6, 2,5 мМ М 9 Асг, 70 мМ КАс, 1 мМ АТР,0,4 мМ ОТР,0,4 мМ СТР,0,4 мМ ОТР, 0,25 мМ спермидина, 4,0 мМ дити 1839191 10отреита, 6 мМ креатинфосфата, 20 мкМ 14 СЕеи с удельной радиоактивностью 21 мКи/ммоль, 20 мкМ каждой иэ 19 остальныхаминокислот, Синтез проводят при температуре 24 Св реакционной ячейке, Питательную смесь пропускают со скоростью 2 мл в 1 ч. Отборцелевого продукта и продуктов распада осуществляют путем отбора питательной смеси, прошедшей черезультрафильтрационную мембрану, с одновременной подачей в ячейку буфера А в течение 24 ч.В течение всего времени синтез продукта проходит с постоянной скоростью(фиг.3). В результате синтезируют 5 нмоль фермента дигидрофолат редуктазы за 24 ч работы. Синтезированный фермент функционально 10 15 активен. Удельная активность полученногофермента составляет 0,2510 ед. активно-4сти на 1 пикомоль синтезированного фермента,П р и м е р 4. Сопряженная транскрипция/трансляция хлорамфеникол ацетилтрансферазы с плазмиды, содержащей ген 25хлорамфеникол ацетилтрансферазы подпромотором ЯР 6 полимераэы, в бесклеточной эукариотической системе трансляциииз ретикулоцитов кролика.Получают плазмиду, содержащую ген 30хлрамфеникол ацетилтрансферазы подпр мотором ЯРб полимеразы,Сопряженную систему транскрипции/трансляции готовят следующим образом. 351 мл инкубационной смеси содержит600 мкл лизата из ретикулоцитов кролика,0,1 мг плазмиды, содержащей ген хлорамфеникол ацетилтрансферазы под промотором ЯР 6 РНК-полимераэы, 30000 О ЯРб 40полимеразы., 0,1 мг пируват киназы, 50 Орибонуклеаэного ингибитора из плацентычеловека, по 5 мкг ингибиторов протеаэ (леупептина, химостатина) и а 2-макроглобулина в буфере А: 25 мМ НЕРЕЯ, рН 7,6, 1,5 мМ 45М 9 Ас 2, 100 мМ КАс, 1 мМ АТР, 0,4 мМ 6 ТР,0,4 мМ СТР, 0,4 мМ ОТР, 0,25 мМ спермидина, 4,0 мМ дитиотреита, 6 мМ креатинфосфата, 20 мкМЯ Мес с удельнойрадиоактивностью 800 мКи/ммоль, 20 мкМ 50каждой из 19 остальных аминокислот,Синтез проводят при температуре 34 С1 в реакционной ячейке. Питательную смесьпропускают со скоростью 1,5 мл в 1 ч. Отборцелевого продукта и продуктов распада осуществляют путем отбора питательной сме,си, прошедшей черезультрафильтрационную мембрану, с одно временной подачей в ячейку буфера А в те чение 34 ч,В течение всего времени синтез продукта проходил с постоянной скоростью(фиг.4).В результате синтезируют 2,5 нмоль фермента хлорамфеникол ацетилтрансфераэыза 34 ч работы. Синтезированный ферментфункционально активен,П р и м е р 5, Сопряженная транскрипция/трансляция фермента дигидрофолатредуктазы с плазмиды, содержащей ген дигидрофолат редуктазы под промотором ЯРбполимеразы, в бесклеточной эукариотической системе трансляции из ретикулоцитовкролика.Получают плазмиду, содержащую гендигидрофолат редуктазы под промоторомЯР 6 полимеразы.Сопряженную систему транскрипции/трансляции готовят следующим образом.1 мл инкубационной смеси содержит600 мкл лизата из ретикулоцитов кролика,0,1 мг плазмиды, содержащей ген дигидрофолат редуктазы, 30000 О ЯРб полимераэы,0,1 мг пируват киназы, 50 О рибонуклеаэного ингибитора из плаценты человека. по 5мкг ингибиторов протеаз (леупептина, химостатина) и 2-макроглобулина в буфере А: .25 мМ НЕРЕЯ, рН 7,6, 1,5 мМ М 9 Ас 2, 100 мМКАс, 1 мМ АТР, О 4 мМ ОТР, О 4 мМ СТР,О 4мМ ОТР, 0,25 мМ спермидина, 4,0 мМ дитиотреита, б мМ креатинфосфата, 20 мкМСео с удельной радиоактивностью 21мКи/ммоль, 20 мкМ каждой иэ 19 остальныхаминокислот.Синтез проводят при температуре 34 Св реакционной ячейке. Питательную смесьпропускают со скоростью 2 мл в 1 ч. Отборцелевого продукта и продуктов распада осуществляют путем отбора питательной смеси, прошедшей черезультрафильтрационную мембрану. с одновременной подачей в ячейку буфера А в течение 20 ч.В течение всего времени синтез продукта проходит с постоянной скоростью (фиг,5),В результате синтезируют 7,0 нмоль фермента дигидрофолат редуктазы эа 20 ч работы, Синтезированный ферментфункционально активен. Удельная активность полученного фермента составляет-40,310 ед. активности на 1 пмоль синтезированного фермента.Использование изобретения дает возможность препаративной экспрессии практически любых генов в виде молекул ДНК влюбых бесклеточных системах трансляции.Способ может служить важным дополнением, а в некоторых случаях и альтернативойгенно-инженерным методам и методу препаративной экспрессии генов в бесклеточ1839191 12 2, Вгапваг Ю.3. - п: ОеоесЕп 9 пеегп 9. 1982, чЗ, р,53, (еб, ЧЧаезопй.), Асабеп 1 с Ргезз пс опбоп.3. Ргатег А,ССцпзз В. - Сцгг. Тор,5 МсгоЬо. тщцпо 1975, ч.69, р.1,4, Вагапоч ЧЛМогооч .Уц., Огт/еррЯ,А., Зргп А.Я. - Оепе, 1989, ч.84, р,463.5, Ярги А.Я., ВагапочЧ., ВуаЬоча .АОчобоч Я,Уц., АаЮоч Уц.В. - Ясепсе, 1988,10 ч.242, р.1162. Фо р мула изобретения1, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДОВ В БЕСКЛЕТОЧ НОЙ СИСТЕМЕ ТРАНСЛЯЦИИ, включающий экспрессию генов в бесклеточной системе сопряженной транскрипции/трансляции, непрерывное выведение продуктов экспрессии генов, в том числе полипептидов, АМР, АОР, ООР, СОР, ООР, пирофосфатов и неорганических фосфатов, с одновременным введением в систему субстратов в виде аминокислот, АТР, ОТР, СТР, ОТР для поддержания их исходной концентрации, отличающийся тем, что, с целью унификации способа и повышения выхода и чистоты целевого продукта, экспрессируют гены белков в виде молекул ДНК, имеющих промоторные участки, специфичные к чуже родным экзогенным РНК-полимеразам, а в систему трансляции добавляются экзогенные РНК-полимеразы, соответствующие выбранным промоторам.2, Способ по п.1, отличающийся тем,35 что ген в виде молекулы ДНК имеет промо-. тор, специфичный к фаговой РНК-полимеразе, а в систему добавлена соответствующая фаговая РНК-полимераза, 403, Способ по п.2, отличающийся тем, что в системе используется РНК-полимераза фага Т 7.4. Способ по п.2, отличающийся .тем,45 что в системе используется РНК-полимераза фага ЗР 6. ной системе, Способ не требует специальной наработки матричных РНК, что значительно упрощает и удешевляет его в сравнении с известным способом препаративного синтеза полипептидов и белков в бесклеточных системах трансляции.(56) 1. ОгаЬав РЛ.чап бег ЕЬ А.,3. - чгооцу,1973, ч.52, р.456. 5. Способ по п.1, отличающийся тем,что в бесклеточной системе трансляции используется ген в виде амплифицированного фрагмента ДНК,6. Способ по п.1, отличающийся тем,что в бесклеточной системе трансляции используется ген, находящийся в плазмиде,7. Способ по п.1, отличающийся тем,что используется прокариотическая бесклеточная система,8. Способ по п,7, отличающийся тем,что прокариотическая бесклеточная система основана на экстрактах из Е,со.9. Способ по п.8, отличающийся тем,что в систему добавлены ингибиторы эндогенных РНК-полимераэ.10, Способ по п,1, отличающийся тем,что используется эукариотическая бесклеточная система.11. Способ по п.10, отличающийся тем,что эукариотическая бесклеточная системаоснована на экстрактах иэ клеток растений,12. Способ по п.11, отличающийся тем,что используются экстракты из зародышейпшеницы.13. Способ по п.10, отличающийся тем,что эукариотическая бесклеточная системаоснована на лизатах клеток животных,14, Способ по п,13, отличающийся тем,что используются лизаты ретикулоцитовкролика,1839191 5 г б ч ктор С. Юс Тираж Подписно НПО "Поиск" Роспатента13035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 водственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарин П Р актоЗаказ 3 оставитель ех ед М.Мо
СмотретьЗаявка
04823743, 29.05.1990
Институт белка Ан СССР
Баранов Владимир Иванович, Рябова Любовь Анатольевна, Ярчук Олег Брониславович, Спирин Александр Сергеевич
МПК / Метки
МПК: C07K 1/02, C12P 21/02
Метки: бесклеточной, полипептидов, системе, трансляции
Опубликовано: 30.12.1993
Код ссылки
<a href="https://patents.su/9-1839191-sposob-polucheniya-polipeptidov-v-beskletochnojj-sisteme-translyacii.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения полипептидов в бесклеточной системе трансляции</a>
Предыдущий патент: Способ очистки микробной эстеразы
Следующий патент: Способ выработки кож из шкур рыб
Случайный патент: Устройство для чистовой обработкиферромагнитных деталейцилиндрической формы