Способ получения антрациклингликозидов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 70 07 Н 15/252 А 61 ОБРЕТЕ ПИСАН ИПАТЕНТУ 113 где Е - Н (а);,ОС ладают противоопу стью. Цель изобре нового способа пол ных веществ указан тез соединений 1 и соединений формул 11 и 1 Ч О со)сн ОН ОН(57) Изобретенгликозидов, вантрациклингли1 и 11О Он ЧЕНИЯ АНТРАЦИ- С - О1О е касается замещчастности получозидов общих фор ния мул С(0)ОН О О О(,о) сн О- -О ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ 21) 3590801/23-0422) 17,05.8331) 821508332) 24.05.82ЗЗ) СВ46) 29,02.88. Бюл. Ьф 871) Фармиталиа Карло Эрба С.п72) Альберто Барджиотти, Серджио и Мисс Анна Мария Казацца (53) 547.455.566,07(088,8)56)Патент СССР Ь 728719,л, С 07 Н 15/252, 1980,Патент СССР М 826956,л. С 07 Н 15/252, 1981,Патент СССР Р 867315,л, С 07 Н 15/252, 1981,Н б), которые оболевой активно- ения - разработка учения более актив ного класса, Син 11 ведут реакцией Процесс ведут в хлористом метиленев присутствии трифторметансульфоната серебра и молекулярных сит с последующим разделением и очисткойхроматографией на колонке, Последняязаполнена силикагелем и процесс ведут с использованием смеси этилацетата и циклогексана (равные объемы)вкачестве элюента, Защитные 0-ацетильные группы удаляют обработкой 0,2 н,раствором БаОН при комнатной температуре. Новые вещества обладают лучшим противоопухолевым действием, чемизвестные - доксорубицин и даунорубицин, Активная доза 3-4,4 мг/кг,7 табл.Изобретение относится к способуполучения новых антрациклингликозидовобщих формул 1 и 11 О11С -О ОН где Н - Н (а) и Н - ОСНз (б),обладающих противоопухолевой активностью, 3Цель изобретения - разработкаспособа получения гликозидных производных антрациклина, обладающих улучшенными свойствами по сравнению спротивоопухолевыми препаратами-структурными аналогами: даунорубицином идоксорубицином.П р и м е р 1, Получениедидеокси-Ь-арабиногексопирандауномицинона 11 а 1 и 7-0- 2,3,деокси- 1.эритрогекс-енопир"Мерк"). Смесь обрабатывают 1,28 гтрифторметансульфоната серебра, растворенными в 30 мл безводного дизтилового эфира. Через 5 мин смесь нейтрализуют прибавлением 0,65 мл безводного коллидина. После выдержки втечение 30 мин при комнатной температуре органический раствор промываютнасыщенным водным раствором кислогоуглекислого натрия, водой, 0;1 н,0-(2,6-озил)6-три"ановодным раствором хлористоводороднойкислоты и, наконец, водой. Органическую Фазу отделяют и упаривают ввакууме до получения сухого остатка.Полученный остаток подвергают очистке с помощью хроматографии ча колонке, наполненной кремневой кислотой,при применении в качестве элюирующегосредства смеси этилового эфира уксусной.кислоты и циклогексана (1:1по объему), В результате порозньполучают 0,9 г соединения формулыЧа, т.пл, 117-118 С, ПМР (С 13 СХ ):пСег аИа около 1,23 8(6, СН -С);1,95 3 (Б, СН ГООГ); 2,07 В (Б,СН СООС), 2,43 3(Б, СНзСО); 5,203(СН 7); 5 53 Е(СН 1 ) и 0 9 г соединения Формулы Ча, т.пл, 83-84 С.Соединение Формулы .Ча (0,7 г) растворяли в ацетоне (45 мл) и производили обработку 50 мл 0,2 н, водного раствора гидроокиси натрия прикомнатной температуре, Через 1 чзначение рН раствора доводили до 7,после чего производили экстрагирование хлороформом, После отгонки органического растворителя в вакуумеполучали чистое соединение 1 а с количественным выходом, т,пл, 161162 С, УР-МС: гп/к 528 (М ). Послеобработки соединения формулы Чала восновных условиях получали в чистомвиде соединение Формулы 11 а, т,пл.181-182 С, РБ-МС; и/к 510 (М ) ПМР(СН)", 5,58 Ь (СН) и 5,5-6,0 8/г;СН( СН) .П р и м е р 2. Получение 4-деметокси-0-(2,6-дидеоксиЬ-арабиногексопиранозил)-дауномицинона (1 в)и 4-деметокси-0-(2,3,6-тридеоксиЖ-Ь-эритрогекс-енопиранозил)-дауномицинона (11 в),К раствору 0,74 г 4-деметоксидауномицинона (111 в) в безводном хлористом метилена (70 мл) прибавляют0,65 г галогенида сахара формулы 17,растворенные в 10 мл хлористого метилена, и 5 г молекулярных сит (4 А"Мерк"). Смесь обрабатывают 0,64 гтрифторметансульфоната серебра, растворенными в 15 мл безводного диэтилового эфира. Через 5 мин реакционную смесь нейтрализуют прибавлением0,4 мл безводного коллидина, Послевыдержки в течение 1 ч при комнатной температуре органический растворпромывают цасыщенным водным раствором кислого углекислого натрия, водой, водным 0,1 и. раствором хлористоводородной кислоты и снова водой. Органическую фазу отделяют, после чего раствор упаривали до получения сухого остатка в вакууме, Полученный в результате этого остаток подвергают очистке с помощью хроматографии на колонке, заполненной кремневой кислотой, при применении в качестве элюирующего средства смеси хлороформа и ацетона (96:4 по объему), В результате получают 0,48 г соелинео ния формулы "КЬ т.пл65-66 С, Ю-МС: ш/х 582 (М ), и 0,45 г соединения формулы 71 Ь. Соединение Л растворяют в 20 мл ацетона и производят обработку 20 мл 0,2 н, водного раствора гидроокиси натрия при комнатной температуре. Через 1 ч значение рН раствора доводят до 7 и экстрагируют хлороформом, После отгонки органического растворителя в вакууме получают чистое соединение формулы 1 Ь с количественным выходом, т.пл.165-166 С, РВ-МС: и/к 498 (М ), После обработки соединения формулы ЪЬ в основных условиях получали чистое соединение формулы 11 Ь. ПМР (СРСХ ) п 1 ег аХда около 1,39 (СН-С);2,428 (8, СНд - СО), 3,50-4,00 Б (ш, С-Ни С-Н); 4,08 8 (, СН О);5,33 8(Ья, С-Н), 5,58 б (Ья, С-1), 5,65 (а, С-Н), 5,93 У(а, С-Н- ).Биологическая активность соединений 11 а, 1 Ь.Соединения 11 а и 1 Ь были испытаныГ в сравнении с даунорубицином ДНР) и доксорубицином (ДК) в 1 п ч 1 го и п чиччо системах с целью установления их цитотоксичности и противоопухолевой активности.В табл. 1 приведены активности на Не 1 а клетках, размножающихся продуктивно п ч:1,го (обработка 24 ч),Соединение 11 а примерно в 25 раз менее цитотоксично, чем ДНР, и в 40 раз менее цитотоксично, чем ДК.Первичные исследования п чСго были проведены на СРГмышах, страдающих асцитической Р 388 лейкемией (1 О клеток/мышь). Результаты представлены в табл. 2 (обработка .р, 1 раз в сутки. Соединения 11 а суспендировали в 10/-ном Тесп 80 и инъицировали внутрибрюшинцо. Соединение 11 а оказалось менее токсичцым и было инертным по отцошецию кР 388 асцитцческой лейкемие при двухдозцом .испытании, включая максимальцую переносимую дозу (МПД)00 мг/кг.Саединецие ТЬ было изучено пч.1 го на НеХ,". и РЗ 88 лейкемическихклеток чувствительных (Р 388) и устойчивых (РЗЯЯ/ДК) к ДК, а п ч 1 гс 10 ца РЗЯЯ и Огояя 1 ецКеппа. Значения,приведенные в табл. 3, показывают,что соединения ТЬ, исследованное наНе 1 а клетках, размножающихся продуктивно 1 п чайф;. о, в сравнении с изпест 15 цыми соепицеццями ДНР и 4-деметокси-Д 11 Р (4-дм-ДНР), в 3 и 6 раз ме=цее цитоксично, чем ДНР и 4-дм-ДНГ.Соединение 1 Ь было изучено наР 388/1 К п"го,Р 388 и Р 388/ДК лейкемические клетки были отобраны из асцитическойжидкости мышей и помещены для выращивания в суспензию п ч 1 го. Тесты на нитотоксичность осуществлялипутем воздействия на клетки препаратов в различных концентрациях в течение 48 ч. В конце экспозиционногопериода клетки были подсчнтаны с помощью счетчика Сои 11.ег клеток, аЫ доза, которая дает 5 ОХ-носуменьшение количества клеток, в сравнении с необработанными контрольными клетками была рассчитана.Табл. 4 показывает, что соединение 1 Ь было приблизительно таким же35цитотоксичным, как ДНР на Р 388 лейкемических клетках, и было очень активно по отношению к Р 388/ДК лейкемическим клеткам, ДНР было приблизи 40тельно в 500 раз менее активно поотношению к устойчивым клеткам, чемк чувствительным клеткам,Результаты первичного исследования и чиччо, проведенного на СРГ мышах, страдающих асцитической Р 38845лейкемией и обработанных .р. черезсутки после трансплантации опухоли,показаны в табл, 5,Сравнение на максимальную переносимую дозу показало, что соединение50 1 Ь менее активно, чем ДНР и 4-дм-ДНР.Результаты исследований, проведенных на СЗН/Ме мышах с з.,ч, трансплантированной Сгояя 1 ец 1 села, обработанных .ч. через сутки после55 трансплантации опухоли, приведеныв табл. 6, Соединения 1 Ь оказалисьболее токсичными и более сильцодействуюп;ими, чем родственные соедине378784 О11С - СЦ О ОК ОН ульфоната полученформулИС - С Форму бре ния Спосгликозидов Н ъС- С 01 ОнО ОННО С - Сн 40 ВОНОПКС- С- О Осн,О 45 ОН О то ния. Сравнение максимальных переносимых доз показывает, что 1 Ь болееактивно, чем ДНР, Соединение 1 Ь далее исследовали на активность привведении через рот, на Ьговз 1 епКещ 1 а трансплантированную 1.г., всравнении с ДНР, ДК, вводимыми .,сти в сравнении с 4-дм-ДНР, вводимымчерез рот.Данные, приведенные в табл. 7,показывают, что 1 Ь обладает хорошейпротивоопухолевой активностью привведении через рот 1 раз в сутки всравнении с активностью 4-дм-ЛНР(где продемонстрирована как активная при введении через рот) и ДНРпри введенииТаким образом, соединения 1 Ь и11 а обладают улучщенными свойствамипо сравнению с противоопухолевымипрепаратами - доксорубицином и даунорубицином,получения антрациклинбщих формул где В - Н (а), ОГЕ 1 (б),отличающийся тантрациклинон общей формуль В О ОН ОЦгде В имеет указанные значения, 10 растворяют в хлористом метилене и обрабатывают хлористым 3,4-диацетил,б-дидезокси.-Ь-арабиногексопиранозилом формулыСН,СО О С 1 511 в присутствии трифтормет серебра и молекулярных с ную смесь гликозидов общО О.СЕ1Огде В имеет указанные значения, разделяют и очищают хроматографированием на колонке, заполненной силикагелем, с использованием смеси этил ацетата и циклогексана 1:1 (по объему) в качестве элюента, защитные - ацетильные группы удаляют обработкой 0,2 н. водным раствором гидроокиси натрия при комнатной температуре.О/10 О/10 160 2,9 ДНР О/20 О/10 4,4 165-170 6,6 150-160 7/20 О/10 О/5 О/5 120 75 СоединениеТТа 1/1 О О/10 90 100 О/18 2/18 4,4 220-227 6,6" 227-305 ДК О/26 2/26 3/26 6/26 268-610 10 ф Среднее время выживания, % по отношению к необработанным контрольным клеткам;Выжившие на продолжительное время (Ъ,60 сут);"Оцененные на основе аутоптических исследований намертвых мышах;фданные двух экспериментов (гапке); фДанные трех экспериментов (гаще)." Число колоний, Х от необработанных контрольных. Т а б л и ц а 4 1 Ло, мг/мл,Соединение Р 388" РЗЯЯ/ДК 1,7 800 470 ЛНР Соединение 1 Ъ 1,2 ЭО 25 Доза, приводящая к 503-ному уменьшению количества клеток, в сравнении с необработанными контрольными;Р 388 лейкемические клетки, чувствительные к ДК;РЗ 88, устойчивые к ДК;Отношение между ЬЛ на Р 388/ЦК и Ю. на РЗЯЗ,0ьод.ч. Через рот О/6 150 22,5 171Соединение 1 2,9 214 Способ График Соединение Доза, введения мг/кг1 О/8, О/8 О/9 3/9 О/10 10/10 1/10 О/10 О/10 О/1 О 5/10 О/10Заказ 896/59 Тираж 348 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная,День после трансплантации опухоли;Данные двух экспериментов (гапке). Продолжение табл.7в