317215

3 7215 ОП И САНИ ЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ Союэ Советских Социалистических РеспубликЗависимый от патеига М Заявлен 9.Ъ 1.1969 (ЛЬ 1337123/30-15)11.И,1968, М 17570 Л,68, Итдли МПК д 9/14 орит Комитет по делам изобретений и открытийУДК 615 779 9(088 8 публиковано 07.Х.1971, Бюллетень М 3 ри Совете Министров СССРата опубликования описания 7.1.19 Авторы 1 зобрете ИностранцьКотта, Пьера (Италия)рора Санфи (Австрия) рнесто лита италию Иностранная фирмаСосьета Фармасеутикив и Фдр(Италия) явитель СОБ ПОЛУЧЕНИЯ АН 1 ИЬЙ 01 ЙЧЕСКО 1 О ПЛЕК Изобретение относится к спосооам получения антибиотиков с использованием грибовпродуцентов, в частности к способам, при которых в качестве продуцентов берут грибы из гру ппы Ьтгер 1 оггусе 1 еь.Известен способ получения, например, антибиотического комплекса либаномицина, который основан на культов прова шш ряда штаммов Ыг. 11 Ьат 11 в авроо 1 ых условиях на питательной среде, содержащей источники усвояемого углерода, усвояемого азота и минеральные соли.Для получения антибиотического комплекса аксеномицина, включающего аксеномицин А (Г.1, - 2604 Л) и аксеноъицин Ь (1.1. - 2604 В) предлагается способ, основанный также на кулы ивировании 1 редсгавителя Ыгер 1 огпусе 1 ез, а именно Ыгер 1 оптусез 11 вапс 1 г 1 п. вр. (Ягер 1 оптусез 1. 1. - 2604) (Ьос 1 е 1 д 1.аггпасеп 1 с 1 11 а 11 а),51 г. 11 зап 11 г 1 выделы из образца почвы с участка в Лизандоро Олмос (Аргентина), зарегистрирован и депонирован в Институ те фитопатологии при Миланском университете (Италия) под Ле 1 РЪ 1951, затем в Университете Руджера (СШЛ) под,хс 1 МК3935 и в Государственном микологическом институ те в Ферри Лейн, Кью, Сюррей (Великобритания) под М 137178. 11 ри выра 1 цивании на обычной среде всгетативный Мицелий состоит из более или менее тонких гиф толщиной 0,5 - 0,9 л 1 к, длинных и обильно разветвленных, конндофоры 5 длинные и прямолинейные, толщиной 1,1 -1,3 лк. Гифы развствляотея по моноподиальному типу, образуя споры нормальной длинь, завитые в плотную спираль нд пх диссальном у астке. Эти гифы могут быть ьключсны про тивоположно или чередующимся образом шкондиофордх,; прп созревд 1 пш ош змси 1 отся, образуя цепочки спор илн кошдпй. 11 оследнпе ямеот глддку 10 новерхнос 1 ь, овдг 11 - ную форму и размеры (0,9 - 1,21 - 1,4) лк.15 В табл, 1 обобщены свойства культур, полученных нд различных средах при 28.,. 11 д.11 оден 1 я де;1 а.11 па 3, 8, 15, 20 п 30-й д":1 осле инокулировдн:я. Микроорганизмы хдр;ктсризуются быстрым и обильным размноже нием с образованием компактного плотноговегетативно:о мицелия, поверхность когорого :лгдкая при выращивании на сн 1 ггетичсской среде и слегка складчатая при выращивании на органической среде, Нд синтетнческойсре дс вегетативный м:1 целий бесцветен, в товремя как его обратная сторона может быть окрашена в различные цветовые оттенки от соломеш о-желтого до темно-желтого, каштаново-коричневого или серого с фиолето.1:1-, ,, , обатявдст 2 н .бнотк, рб") л,: )н , , сакся но.е :112.Идентификеия тяикроорганзеялС В 0 Й СТ В Л, П 0 К Д 3 Ь В 2 С . 1 Я С. Х. И К Р О О Р Г ЛЦ 3 , Р т Н позволяют отнести его к золу Я.СГ;).Опус св Га)СВГПЯП Е 1 НЕПГСу (БЕссуя .31;: )НЛ Р Г)С 1 егптПЯ 1 лс БЯС 1 епооту, 7 1 Г.1:). р.744 в 7)111 тамм относится к разлсл, ". .г, Гснм."ЯЙе" по Ггстздп е 1 а 1. (.пр. 1,Гго ц 1958, 6, р. 52); к разлслх 11. СГтн: " 3 Ь,с)" л.мив" по Вд 51 лс (1)1 СгоЬо. е). 058., 1 О к серии ",1 Ьд" по 3)сдтяпе и ТГ ."с пм - се 1 ев, 1961, хо 1. 11, р. 117) и кр - :Г ст:)Гпт: - миистов, имсОпих светл,11) возл кпк,.й цели по Н 111 ег (;)х яГте 1,1 с Гг (гс"),еп. ВЬ 1. 3 СТОЬо., 1-1 С 1 6,1"лг сг, Вл.с, 1967, р. 256)С;) 2 ГНСНИЕ Г БР 1 23 хц Кп тр" г;КЕХ И )СЕ С 3т 3)Е 31 С) 3пит;рованЕм по.-,россо.31,х Г: . , ."группдм (тдксл) ослзлл 1,: .С;СЛНИХ:Г ИМС;Т ТЛКИХ СВОП тслелуемоо .:икпоорглпнз,д. Всвязи с тем, ит;) мц; рорргл:1:.змь ), кНе -л: -ВЯСТ НЯ ГЕНТЕТ 1 СГНОИ Спс"2" ";)"ПИГМГ.Т ИЗЕТ 1,0 ТООГО ЕЗМ. . Т ЯБОГО ПО КРЯСНОВ 2 ТО "О, фОСГ "Р";)-.31Рного и лемонно-жслтро, сгр нр ря ,ружено 13 опсаняк люс)ог; цз н,РОРГЯНИЗХ 12, ОТНОСЯ;П:ХСЯ К П ТЕ; с;3ПОЛРОЛОЬ. ГРМЦДМ ЕТДКСЛ). Л ЛХ)крЗИ С ТСМ, ИТО ОН 3,РЯОДТ 1ВЯГ Кт,Млекс атбтотика аксеномпн л г 3 ГСЯ, ТО М 1 КРООРГЛЦИЗХт ЯВ,тЯЕТ; 5РНЬ,КОТОПОМ 1 ПЕсвд;Елет ся Нд 1: ОВ, С,1 опусев 15 дпсг и. Вр,51 г. 1 Вдпсг 1 манжет сохпаняться е". . ,; 1;Греносов ня тверлую срелу, а тлкж, -рсрслстВОм ле;01)елезлцнц ссспсн:3 Г.с) я сс 0 мн - КРООРГЯНЕ 1 ЗМЯ В СООТВЕТСТВС)1 СХ Л;ТГ - теле.ГЕособ ипотовлсня комплсксл 2 51:бцр - тцкл аксснотпПа состоит из к,сь:" 3 рзлН 1)я Про 3 ц); ЕОНГГО 2)"Гнб)нрТ Х 1:Ммд81 г. 1 Вдпс)г в Лдробнх ,с;о няхлспж 21 ей цс Оч:к х св 051 с х 01 Р х ."51 рр ";),ИСТС)ЧНИК МС 32 ЦВЛСХ 10 ГС) ДЗОТЕ : МН:СЛ;1 ".;". соли. 1 хот цлекс хожст акстрд-ц)с)35 тьс 5 Г ц; - С Г СЛ М ЮтВ 11 .Г Л Г С ХЕ ) 1 Х Е, К "",, Т Г 5 )сисе 1)я 5 н, хо.5 П)ц В сго срс тл:3, ПРГ.- цоТитель" с) 81 г. 11-Лис)г кмльтнв:.:)Р 2 гь д /кц.;ой с)с лс пр28 - 87 Г прст "Рктнт),но прц 28=Г, в тс снце 60 - 60 птс ВцдГП 1 Г1еяр:,кст колебаться в зл)исимос си От , с: яЕМОй фсрМЕНтацОННОй СрсЛЬЕ )3 " С.с ЛЛХВ КдтГСТВЕ 1.СТГ ЕКЛ МГ 1 Г Г 13 З) "кР Р И М Г .и Т Ь ГЛ 10 К О З ", КЛ Х ХЛ Л, . Г К . ".". ) Л в ли енье сорта м) к кр,нного смрл;. :12:)ц Кмьтр ЗЦО:;Л: НСНЦНС)11), КМ.Ц,; )1 Ц С О Д НЕ; Р Г :П Я С)О 5 ГХГ, Л.РИРТ:Л В КМЛ- рС", Г, ря р рст ГГТЗ тят О; Х)) Г 1 ВГ ГГТВДМГ твР,"С)1.як )КГЛТР" ЯТГ С, Л ЬЕХ Проп СКрлс- тр" н. х;3 бс:зрлс " НГ;хОлси," ,; НТГЛ 1.Р ОК ЛГТГОР 11 В 55 рс ,с,:л л.Гтдтс, 2 Гтр Г, хл Гп Рфом Г. ОниЛ;-ПР . РГЕ )НЛР Р 1 МСТЦЛР 30.1 и П 0".ЛР".Р,;"".:;Х, ВРСГТЛ Л .Л:1:321 ЛТ РГ 2 КТНВС)ЛГ;) Ц Г тЛ 1 К Ц ) 2 . Т 3 Р П 2 З Р ТН Р и Ц Г Л 0 ГО, Р т Ожцт Г 1,С) рс,1 КнцО Г60"23 лр;3. Г.Из Кплстслс 1. РГЛК 1 ияГ-л;р -Рло)китсльндя. При итрвелсП,т Л С "ГЛСЛй С ЛНЛИПС)ТЛЛдтОХЕ Нд- -Р 1- Г-,Р) Рвр 1 НЛ КГТОЗЬ РТХ ,РГ".1 Х 5 КГЛСЗОМ С)5 . , К , . р :; Х :1 " Г " )Е31215 10 48 час определяли показатель Д 11 М. Полученные данные приведены в табл. 5. Таблица 6О,С 6 од 2 йой о оф иРезультат Значение показателя Д И.,11 УСг/С,нв Аксеномицин А Ак сеном;1 цин БОчень сильно устойчивый, даже при двукратном введении его в течение месяца КрупныЙ рога 10 тый скот БассЬагоп 3 усез саг 1 ЭЬегдепяз , 0,04 Сапс 1 Ыа а 1 Ьсапз 1,25 0,04 1,25 ОвцыСобаки Очень сильно тстойчивый Очень сильно устой гивый 30 Испытание на выносливость ИспиТания ца выносливость проводили, ь ца крупном рогатом скоте, овцах и сооакдх путем введения аксеномицина А и акссномицина Б в дозе 20,игкг. Результаты приведены в табл. 6. 11031 С 1 в дозе 20 .11 г кг, г.риблизительцо пос -18 113 с испиТ 1 ци 51. Пос;1 е Обр;3 ботчси зкс сМИИт 1,1 Г;ОдзсрГаЛИ ИССЛЕЛОВацЮ ЛЛя рЕГу г 1:. Оыдц 3 я выбралгвдция пдрдзИ 1 ов. 1 ерез-4 иис после обработки две собдк Оыл уби . д их к 1 шсчц 13 к 01 ял под 13 ерг 13 т исследова: 31( д л я О;р с д 1 л с 3:151 13 а л1 и 51 с кол е к с и .3 оставшимися собаками вели цдблюдс и 1 я и через 30 дней после обаботки. Экскреметь 1 исследовали цд наличие яиц лсцто 1 цо Ср 3 я. Розльтдты пр 1 веде 3 ы в табл. 7. Антигельминтная активность при введении собакамАцтигельминтцую активность проверяли ца Грниах по 16 ки 130 тцых, к 010 рым бьл 1 в 30- децы ленточные черви (Сез 1 ос 1 а). Ацтиб:1 отик Тзбица 11 сс 1 сдовии ИЕ К и Н 1 ЕЧ.ника битого животного 1 сследованис экскрементов че. рез 30 днейКоличество 11 сслеловние экскрементов через н скчлько часовПаразиты Р 1 с 11 Ы 1 нп 3 саппити выделение проглотилов и 2СКОЛИКОВ Ч 1 РеЗ1 аС отрицательное отрица. тельное ВЬЛЕСоп 1 Е ПРОГЛОТИЛОВ Че.роз-час В 1,1 ЛОЛ С 11 ИЕроз 1- 3 час ппоглтихов ч 1 с отргцтельное поглотидов ч выделениирезчас поглотидов чеВ Ь 1 Л Е.С 111роз 2 час выделен 1 нроглотилов чспс:1 про;ло.илов выделени,роз 3 час ПОГЛ 3 ИДОВ ЧЕ выделение 111 оглотилов чеВде:1 С 11 ИЕроз 2 час 10 выделение прог.цтилов че.розвыделе:1 ие нрогл.тилов че.рез 2 час 12 проглотилов:евыделениероз 3 час Данные табл. 7 показывают, что во всех цовению паразитов. что было подтверждено подвергц тык 0013 аоотке 5 кивотных ацтиоио- анализом зкскремецтов и кишсч 13 икд убитык тические вещества привели к полному исчез- ЗО 5 к.от 13 ых.Г 1 редмет изобретения Составитель М. Дранишников Тсхрсд Т. УсковаЗаказ 39269 Изд. Та 1440 Тираж 473 ПодписноеЦ 11 ИИПИ Комитета по делам изобретений и открь:тии при Совете,1 ииистров СССРЧосква, Ж, Раунская наб., д. 45 Типография, пр. Сапунова, 2 Бульон перемсшиваОт при 400 00 ин, аэрируют примерно одним об ьемом Возд 3 ха 12 один обьсм среды в 1 вин и и;кубцруют прц 27 - 28 С в течение примерно 24 час. К концу этого периода для инокулировация 50 л фермецтационной среды примецяОт 3 л полу чецной суспецзии мицелия.Ферментационная среда имеет следующий состав, о/о:Глюкоза 8 Мука соевая 3 Экстракт кукурузы 2 Кальций углекислый 1 Натрий хлористый 0,26 Масло соевое 05 Вода водопроводная до 100. После стерилизации при 121 С в течение 30 лин и инокулирования среду перемешивают с помощью турбинной дисковой мешалки с четырьмя плоскими лопастями и аэрируют путем подачи 0,7 л воздуха на 1 л среды в 1 мин при 27 - 28 С в течение 120 час, Мицелий, собранный после фильтрования 5 л культуры в бульоне, экстрагируют 4;(3 л метанола. Экстракты объединяют и упаривают в вакууме. Водный остаток промывОт;етролейным эфиром, после чего экстрагируют четыре раза равными объемами н-бутилового спирта. Экстракты смешивают и упаривают в вакууме досуха. Остаток растворяют в 100 л метилового спирта. Нерастворившуюся часть отбрасывают, а раствор упаривают. Остагок суспецдируют в 200 5 л хлороформа и затем отфильтровывают. Хлороформный раствор концентрируют и осаждают петролейцым эф 1- ром. Получается 2,0 г сырого продукта, содержащего антибиотик аксеномиццн Л и аксецомициц Б.Сырой продукт очищают путем распределения по принципу противотока в двухфазной системе хлороформ: четыреххлорисый углерод: метанол; вода=3:2:4:1. Фракццонирование по 50 пробиркам показывает, что максимум активности получают в проб:рках от 10 до 20 0,20 г чистого комплекса аксецо 3;ццп:олучают упрВнСм содсржцмо:о т.х 1;1106 рос,Осух. 110,1 1 емый кОмпгекс ЦОКЗЫ 13 СТ П 1 Ц 1 ЦЛПЗС ПО МОТО;1 У ТОЦКОСЛОЙ.10 П Х 031101 Рафиц Ц 2,1 ЦЧ 1 Е ДВХ КОИОЦСЦ тОВ ксеп 03 ццццЛ 1 ксс.Ом 1 цппЬ созц 101 ямц К 0,-10 и 0,61 сооветственцо.1 здс.1011 с двух 1 кт пп 11 х Вещес 513 Ос 31 цсс 1- ь;15 10 1 с 110 м 0 п 1112 х0 м 2 1 0 г Р ф ин 1 с и;1 и к 2- 1 еле 13 ко.10 Псе. а с; ц 13 лпв 101 р 11 7 О с помощьО ООО М сосфпото буфер, Добавляют 33 о .Орошк 00011.3 ноп Цсллюлозы. Для 1 г ом гСксцтбОгка ребуется колонка дцамстром 2,4 ся и высотой 30 с,. 11 ри эл 1011 р 0132 1 ц смесь 0 и бт.1013 ый спирт ук сОпя кислот: вода=4:О,О:1 (по объему) пол:11 ОГ фр 11.ции, сОдежащие 0,60 г соедицсН 5 Ь и зате 026 г соедицениЯ А, Каждьш з нтпбОтков, Выделен:Ый с помощью метанол 2 цз Ост 3 тка после ВыпарВн 11 я элю атов, извлекаюг путем удаления растворителя и высушивания до постоянного веса над пятиокисью фосфора при остаточном давле;и:1 0,2 10 рт. ст,;рц комнатной температуре.25 1, Способ получения антибиотического ком 30 1:лекс 2 на Осц 013 е к 3 льтнВирОВниЯ гриба.цродуцета пз гру;1;ы 81 гертоптусе 1 ев в аэ.робцых условиях на жидкой среде, содержащей :стошики свояе 1 Ого углерода, усвояемо:0 азота и минеральные соли, отличаю /цийся тем, ч ГО, с целью полу 1 ецпя комплекс 2 аксецоИци 12, ВклОч 201 цего аксеномпциц .зг (1". 1. - 2604 А) и ксе:омнццц Б (1 т. 1. - 2604 В) в сСстве гр:ба продуцецт берут 81 гс;110 г 3 сев 1 вас 1и. Вр. (8(гер(огпусев 40 1. 1. - 2604) (Босе 11 1 тПасец 1 С 1 11 а 11),2. Способ по и. 1 оглиаОци 1 ся тем, чтокмльтивровацис гриба-продуцецта ос щс стзляют прц 23 - 37 С в течение 60 - 160 час п.: р 11 с;.еды от 6 до 9.45 3. Способ по и. 1, отличаОци 1 ся тем, что