Средство, проявляющее антиоксидантную активность

(57) Изобретение относится к ме тут: именно к фармакотерапии.на вследствие активации процессов а и . ного окисления липидов, Цель изо- повышение эффективности тер ед- этого в организм вводят гонадотро рз- . онический в качестве средства, и 39; щего антиоксидантную активность, 3. ства. Пособие по фармакотерапии для вчей, М Медицина, 1987, изд,Х, т,2, с.37 -НТИОК дицин рущ,е пере брет апии. пин.х роявл е,а ний кисения Дляори- . яюл,Изобретенйе отйосится к медицине и: - Сущность предлагаемого средства:забиологии и касается применения хорйони- ключается в прйменениигонадотропинахоческого гонадотропина в качестве средства.: рионического для нормализации для нормализации перекисного окисленияактивностиПОЛ. Гормон применялся следу-3 липидов (ПОЛ). Об активности ПОЛ судили ющим образом. по количеству первичных продуктов - дие-, 5.самцов белых беспородных крыс, полновых конъюгатов в ткани печении сердца, учающих СС 4 в количестве 20-ти инъекцийЦельизобретения заключается в,следу-. .и 5 самцов белых беспородных крыс, пол-, ющем: 1. Стойкость эффекта нормализаций: упавших СС 14.в.течение 5-ти месяцев, через ПОЛ, т,к, имеющийся в арсейале средств, день после отмены СС 4 пОлучали гонадотснижающих ПОЛ, практически только один.: ропин хорионический под кожу 1 раз в день препарат - альфа-токоферол,: не дает стой- вдозе от 75 ЕДдо 85 ЕД на 100,0 массы тела кого эффекта нормализации ПОЛ; 2, предла- . животногов 1,2,3;9, 10, 11 дни после начала гается использовать вкачестве средствадля-леченйя. 11. крыд, получавщйх 20 инъекций нормализации ПОЛ лечебный препарат, 3, . СС 14 и 6 крыс; получавших СО 4 в течение отсутствие осложнений при.примененйи го-тимесяцевпослеотмены СС 4 не лечились надотропина хорионического в качестве . йслужилй нелеченым контролем; В качестве -. средства дпя йормализации ПОЛ; 4. йросто- : интактного контроля использовали 20 сам-:С та и доступность проведения курса лечения . цов белых беспородных крыстакого же возгонадотропином хорионическим, в том чис- раста; каки.животные, получившие СС)4 и, ле и амбулаторно, .: го.рмон,Укаэанная цель достигается примене- Для нормэлизацйи 11 ОЛ крысам через нием отечественного коммерческого препэ- день после окончания введения СС)4 кэк в рата хорионического гонадотропина - - . количестве 20-ти инъекций, тэк и в течение гонадотропина хорионичекского 5-ти месяцевв виде 65 раствора в растительйом масле в количестве 0,3 глл под кожу18212193 4по 4 раза в неделю, вводят гонадотропин тельном масле, количество диеновых коньхорионическийдвумя курсами по 3 инъек- . югатов в печени снижается достоверно:(Р .цииодин раз вдень подкожув 1,2.3,9,10 меньше 0,01) до 227,0+7,8 в сравнении с и 11 сутки после начала его применения в содержанием диеновых конъюгатов в пече, дозеот 75 ЕДдо 85 ЕДна 100,0 массытела, 5 ни нелеченых животных(451,8+72,0), безУказанная доза гормона выбрана пото- достоверной разницы (Р больше 0,9) в сравму, что она оказывает биологическое дейст- нении с интактными животными вие на организм. Курс в 3 инъекции был 231,5+37,0, табл,3. Через 10 дней после навыбран потому, что через 48 часов после. чала лечения гормоном количество диенодвух инъекций гормона было установлено "О вых конъюгатов в печени крыс, получавших достоверно по сравнению с контролем сни- СС 4 в количестве 20 ийъекций, было равно жение дионовых конъюгатов в тканях, а 282,1+13,7; при Р больше 0,3 в сравнении с третья инъекция была выполнена для за- нормой (231,5+37,0),крепления эффекта двух первых инъекций,У животных, получавших ССд в течение 5-ти дневный перерыв между курсами вве-. "5 5 мес, в печени через 45 сут после начала дений препарата делалидля того, чтобы введения гормона количество диеновых дать организму передышку от действия гор-конъюгатов -составило 508,5+82,2 при Р мона. Повторно 3-х дневный курс введения меньше 0,01 в сравнении с нелечеными.жипрепаратаделалидлятого,чтобы закрепить ватными - 846,0+89,4 при Р больше 0;5 в.эффект действия первого курса. 20 сравнении содержанием диеновых конъюЧерез 2 и 10 суток у крыс, получавших гатов в печени животных одновозрастного20 инъекций четырххлористого углерода, интактногоконтроля -453,0+32,5 табл,2.после начала введения гормона брали на У крыс, получавших СС 14 указаннь 1 м курисследование ткань печени, У крыс, пол- . сом в течение 5 мес, в сердце количество учивших четыреххлористый углерод в тече диеновых конъюгатов достоверно (Р меньние 5 мес. Брали для исследования тканьше 0,01) увеличилось(636,5+116,5) йо сравпечени и сердца через 45 сут после начала . нению с нормой(278,6.28,98). Череэ 45 сут введения гормона, В соответствующие сропосле начала введения.гонадотропина хори".ки брали ткань печени и сердца на исследо- онического количество диеновых койьюгавание у контрольных нелеченых животных, 30 тов оказалось нормальйым (355,9+28,3) при а также у животных одйовозрастного конт- ., Р меньше 0,05 в сравнении с нелечеными роля.";: ЖивотнымиилриРбольше 0,05 всравнениидиеновыеконъюгатыопределялидя,ме с ийтактными одновозрастными животнытоду ИД,Стальной следующим образбм. ми, табл.3.Навеску ткани замораживали в жидком 35 П р и м е р 1. Крыса В 80 получала подазоте и тщательно размельчали в охлажден. кожу 20 инъекций по 0,3 мл 65 О раствора ной Фарфоровой ступке, Затем 0,3 г пФрош СС 4 в растительном. масле па 4 инъекции в ка ткани печени и сердца растирали с 2, г .мл неделю, Через день после отмены СО 4 крыэкстрагирующей смеси гептана сизопропи-са М 80 получала 2 дня подряд по 1 инъекловым спиртом в объемном отношении 1:1. 40 ции в дейь гонадотропин хорионический в .Полученную суспенэию йомещали в поли- . дозе 75 Ед на 100,0 массы тела, Через 48 ч этиленовые пробирки, плотно закрывали после начала введения гормона и через 72 пробками, П робы центрифугировали 10 мин часа после отмены СС 14 у крысы М 80 брали при 4000 9, Надосадочную Фракцию перено- на исследованйе ткань печени и определяли сили в градуированные пробирки и добавля в ней количество диеновых конъюгатов слели 1/10 объема дистиллированной воды, дующим образом; навескуткани эаморажиПосле двукратного встряхивания и расслаи-. вали в жидком азоте и тщательно вания фаз отсасывали 0,5 мл гептановой размельчали в охлажденной фарфоровой фазы, К равным объемам по.0,5 мл добавля- ступке. Затем 0,3 г порошка ткани печени ли этиловый спирт в объемном отношении 50 растирали с 2,7 мл экстрагирующей смеси. 1;5. Оптическую плотность проб измеРяли гептана. с изопропиловьгм спиртом в объемна спектрофотометре Сфпри 233 нм в ном отношении 1;1, Полученную суспенэию кварцевых кюветах. помещали в полиэтиленовые пробирки,Содержание диеновых конъюгатов в плотйо закрывали пробками. Пробу цент. пробе рассчитывали сучетом коэффициейта 55 рифугировали 10 мин при 4000 д. Надоса 5 -1 1экстинции, равноо 2,2 10 см М . дочную фракцию переноСили вПод влиянием гонадотропина хориони- градуированные пробирки и добавлялического через 48 ч после начала введения 1/10 объемадистиллированной воды, После его животным, получившим 20 инъекций двукратного встряхивайия и расслаиванияСС 1 по 0 3 мл 65"Д раствора ГГ 1.1 в растифаз отсасывали 0,5 мл гептановой фазы. К ткани печени растирали с 2,7 мл экстрагир -ги руравным объемам по 0,5 мл добавляли этила- ющей смеси гептана с изопропиловым спир. вый спирт в объемном отношении 1:5. Опти- том в объемном отношении 1,:1. Полученную ческую плотность пробы измеряли насуспензию помещали в полиэтиленовые спектрофотометре СФпри 233 нм в квар пробирки, плотно закрывали пробкой, Процевых кюветах. Содержание диеновых бу центрифугировали 10 мин при 4000 ц на коньюгатов рассчитывали с учетом коэффи- . центрифуге, Надосадочную фракцию перециента экстинкции. равного 2,210 см носили в градуированные пробирки и до 5 -1М 1. бавляли.1/10 объема дистиллированнойЧерез 48 ч после введения двух ийьек- "0 воды. После двукратного встряхивания иций гормона в ткани печени крысы М 80 расслоения фаз отсасывали 0,5 мл гептаноколичество диеновых коньюгатов оказалось вой фазы.равным 208;8 нмоль/мг, . : ,:. К равным объемам по 0,5 мл добавлялиП р и м е р 2, Крыса М 72 получала под: этиловый спирт в объемном отношении 1;5, кожу 20 инъекций по 0,3 мл 65% раствора 15 Оптическую плотность пробы:измеряли на СС 4 в растительном масле по 4 инъекции в " спектрофотометре СФпри 233 нм в кварнеделю. Через 72 часапосле отмены СС 14 у .:.-цевцх кюветах, Содержание диеновых конь- крысы М 72 забирали для исследования югатов в:пробе рассчитывали с учетом . ткань йечени, вкоторой определяли количе- ." коэффициента экстинкции, равного 2,2 10 ство диеновых коньюгатов следующим об см, М .разом; навеску ткани замораживали в, Через 45 сут после начала лечения в жидком азоте и тщательно размельчали.в: печени крыСы М 106 диеновые коньюгаты охлажденной фарфоровой ступке, Затем 0,3 оказались в количестве 236,1 нмоль/мг, г порошка ткани йечени растирали с 2.,7 мл: П р и м:е р 4, Крыса й, 126 получала по экстрагирующей смеси гептана.с-изопропи 0,3 мл 65% раствора СО 4 в растительном ловым спиртом в объемном отношении 1:1., масле в теченйе 5 мес. Через день после Полученную суспензию помещали в поли-. отмены СО 4, крысеМ 126 вводили под кожу этиленовые пробирки, плотно закрывали . поодномуразувдейьгонадотропинхорио-пробкой, Пробу центрифугировали 10 мин , нический в дозе 85 ЕД на 100,0 массы тела при 4000 ц на центрифуге, Надосадочную 30 в 1, 2,3, 9;111 дни после начала лечения. .фракцию переносили в градуированйые Через 45 сут посленачала. примейения горпробирки и добавляли 1/10 объема дистил- :., мона у крысь М 126 брали печень на иссл 6- лированной воды. Последвукратноговстря- дование и определяли в ней количество хивания и расслоения.фазотсасывали 0;5 мл диеновых коньюгатов следующим образом: гептановой фазы, К равным обьемам по 0;5.35 навеску ткани змараживали в:жидком азоте мл добавляли этиловый спирт в обьемном . и тщательйо размельчалй в охлажденной отношении 1;5. Оптическую плотность про- . фарфороВой ступке. Затем 0,3 г. порошка бы измеряли на спектрофотометре. СФткани. печени. растирали с 2,7 мл экстрагирупри 233. нм. в кварцевых кюветах; Содержа- .: ющей смеси гептайас изопропиловымспирние диеновых конъюгатов рассчитывали с 40 том"вобъемном:отношейии 1:1. Полученную учетом коэффициента экстинкции, равного. суспензию .помещали в .полиэтиленовые 2, 2 10 см М,:- :пробирки, плотно закрывали пробкой. ПроЧерез 72 часа после отмены СС 4 в тка-:бу цейтрифугировали 10 мин при 4000 д на ни печени крысы ЬЬ 72 количество диеновых центрифуге. Надосадочную фракцию переконьюгатов оказалось равным 998,8 45 носили вградуированнйе пробирки и донмоль/мг, . . бавляли 1/10 объема дистиллированнойП р и м е р 3, Крыса Мт 106 получала 20. воды, После двукратного встряхивания и инъекций по 0,3 мл 65% раствора СС 14 врасслоения фаз отсасывали 0,5 мл гептанорастительном масле 4 раза в неделю. Через войфазы. К равным объемам по 0,5 мл додень после отмены.СО 4 эта крыса получила 50 бавляли Этиловый спирт в объемном гонадотропинхорйонический под кожувдо- . отйошении.1,5.Ойтическую плотность прозе 75 ЕД на 100,0 массы тела один раз в день бй измеряли:на спектрофотометре СФв 1, 2, 3 и 9 сутки после начала лечения. при 233 нм.в кварцевых кюветах. Содержа- Через 1.0 суток после начала введения гор-. ние диеновых конъюгатов в:пробе рассчитымона у крыс К.106 брали на исследование 55 вали. с учетом коэффиц 1 иента экстинкции, ткань печени и определяли в ней количество равного 2;210. см Мдиеновых коньюгатов следующим образом: Через 45 сутпосле начала введения горнавеску ткани замораживали в жидком азо- мона количество диеновых конъюгатов в те и тщательно размельчали в охлажденной ткани печени крысы М 126 равнялось 326,8 фарфоровой ступке. Зэтем 0,3 г порошка нмоль/мг.П р и м е р 5, Крыса М 46 получала 0,3мл 65% раствора ССИ в растительном масле в течение 5 мес. Через 45 дней послеотмены СС 14 у крысы В 46 взяли ткань печени на исследование диеновых коньюгэтовследующим образом; нэвеску ткани зэморэживали в жидком азоте и тщательно размельчали в охлажденной Фарфоровой, ступке. Затем 0,3 г порошка ткани печенирастирали с 2,7 мл экстрэгирующей смесигептэна с изопропиловым спиртом в объемном отношении 1;1. Полученную суспензиюпомещали в полиэтиленовые пробирки,плотно закрывали пробкой, Пробу центрифугировали 10 мин при 4000 9.на центрифуге. Надбсэдочную фракцию переносили вгрэнулированные пробирки и добавляли1/10 обьемэ дистиллированной воды,.Последвукрэтного встряхивания и расслоенияФэз отсасывали 0,5 мл гептановой Фэзьь Кравным обьемам по 0,5 мл добэвляли этиловый спирт в обьемном отношенли 1:5. Оптическую плотность пробы измеряли нэспектрофотометре СФпри 233 нм в кварцевцх кюветах, Содержание диеновых коньюгатов в пробе рассчитывали с учетом5коэффициента зкстинции равного 2,2 10см М,Через 45 дней после отмены ССИ у крысы 11 ь 46 в печени диеновые коньюгэтыбыли в количестве 1089,6 нмоль/мг,П р и м е р б, Крыса Н 127 получала 0,3. мл 65% раствора ССИ в растительном маслев течение 5-ти месяцев. Через день послеотмены СО 4 крыса М 127 получала гонэдотропин хорионический в дозе 85 ЕД цэ 100,0массы тела в 1,2, 3, 9, 10, 11 дни посленачала лечения, Через 45 суток после началаприменения гормона у крысы й 127 бралисердце нэ исследование диеновых коньюгатов следующим образом; навеску ткани замораживали в жидком азоте и тщательноразмельчали в. охлажденной фарФоровойступке. Затем 0,3 г порошкэ печени растирали с 2,7 мл экстрэгирующей смеси гептана с изопропиловым спиртом в объемномотношении 1:1, Полученную суспензию помещэли в полиэтиленовые пробирки; плотнозакрывали пробкой, Пробу центрифугировэли10 мин при 4000 9 нэ центрифуге, Надосэдочную фракцию переносили в градуированные пробир и и добавляли 1/10 объема дистиллированной воды. После двукратного встряхивания и расслоения Фаз отсасывали 0,5мл гептэновой фазы. К равным обьемэм по5 0,5 мл добавляли этиловый спирт в обьемном отношении 1:5, Оптическую плотностьпробы измеряли на спектрофотометре СФ 26 при 233 нм в квэрцевцх кюветах, Содержание диеновых коньюгэтов в пробе10 рассчитывали с учетом коэффициента экстинции равного 2,2 10 см М 1.Через 45 сут после начала введения гормона количество диеновых коньюгатов вткани сердца крысы М 127 составляло15 299,64 нмоль/мг.П р и м е р 7. Крыса М 47 получала 0,3мл 65% раствора ССИ в растительном масле в течение 5 мес. Через 45 сут после отмены СС 14 у крысы гФ 47 брэли сердце для20 исследований в нем количества диеновыхконьюгэтов следующим образом; навескуткани замораживали в жидком азоте и тщательно размельчали в охлажденной Фарфоровой ступке. Затем 0,3 г.порошка ткани25 печени растирали с 2,7 мл экстрэгирующейсмеси гептанэ с изопропиловым спиртом вобьемном отношении 1:1. Полученную суспензию помещали в полиэтиленовь 1 е пробирки, плотно закрывали пробкой. Пробу30 центрифугировали 10 мин при 4000 9 нацентрифуге, Надосэдочную фракцию переносили в градуированные пробирки и до-.бавляли 1/10 обьемэ дистиллировэннойводьь После двукратного встряхивания и35 расслоения фаз отсасываял,0,5 мл гептэно-.вой фазы. К равным объемам по 0,5 мл добавляли этиловый спирт в объемномотношении 1:5, Оптическую плотность пробь 1 измеряли нэ спектрофотометре СФ 40 при 233.нм в кварцевых кюветах. Содержание диеновых коньюгэтов рассчитывали сучетом коэффициента экстинции, равного2,2 10 см ЬГ,Через 45 сут после отмены СС 4 у кры 45 сц М 47 в ткани сердца было 1021,5нмоль/мг диеновьчх коньюгэтов,Формула изобретенияПрименение гонэдотропина хорионического в качестве средства, проявляющего50 антиоксидэнтную активность,. Группы жи- вотных Сроки исследований таатипаавеютитивавивтии зю а ю 10 сутки а аа аа юаа аааз ю2 сутки В 1 крыс ДзКе Р крыс Д.К.,998,80 62 63 64 451 85+72 04245 16236,08 236,08 240,6)" 107 236, 08 108 295, 10 208,84 1.09 272,40 208,84 88а т а227,00+7,79 89 90 317,80т ю я ю т т аз В е е в т т в282, 13+13, 73 в в е ве в е в та в 23 1,54+36,98 Р между 1 и 2 группами меньше 0,01Р между 2 и 3 группами больше 0,9Р между 1 и 3 группами меньше 0,02 на 2-с суткит аат т е т т е е аа е е т ае в я в и ет т а в и ав ав аз е а а т а т Р между 3 и 2 группой на 10 сутки больше 0,3 Крысы, получавшие СС 1 ц(нелеченые) 880, 76 1089,60 85,6678;,Эб8 Э 8,Э 2830, 82а ю в т е е в в в а ю и+я 845,95+89,3552 бб 4544,80326,80 51 Крысы, получившие ХГ послеогмены СС 1 в 126 127 128 435,84710,24а ютва вав Ч+р 508,86 ф 46, 78581, 16337,04454,00508,48472,16, Интактные крь 1 сы 129 (одновозрастные 1 131 435 84454,00иваюФтевииИ+в 453,00+32,46евеаааиаваеваветвиветвиаввР между 1 и 2 группами0,02;Р между 2 и 3 группами ) 0,5;Р между 1 и 3 группаии0,01 Вив т е в тв и е ч е. Количество диеновых конъюгвтов (Д.К.) в ткани печени крыс, .покрученных СС 1 Н в течение 5 юти месяцев . (нмоль/мг)1821219 Таблица 3 Количество диеновых конъюгатов (Д.К.) в ткани сердца крыс,получавыих СС 1 ц в течение пяти месяцевнмоль/мг) вивееивееевееевтееваеаеюеаеаюетвею аив теи ю Исследование через 45 сут после начала вве"дения ХГеетееааеиваиваивеватаеваееФавивааЪЦР" крыс Д.Кеетиетатв аввеаиваиваввевеаа471021,50 Группы животных Крысы, полу"(одновозрвстные)3 Мфв 6 7 ит т т т и и тт в те ав т еве В е и В е е а Ю в в Е а е е еа е П р и м е ч а н и е, Р между 1 и 2 группами0,.05 Р между 2 и 3 группами 10,05Р между .1. и 3 группами 0,.02Составитель И,СолопаеваТехред М;Моргентал: . Корректор Е,Папп Редактор Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 2079 Тираж : . . Подписйое ВНИИПИ Государственного комитета поизобретениями открытиям:при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж; Раушская наб 4/5