Способ обработки спермы индюков

(50 4 А 61 0 7/02 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРГО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЮОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯН ВУСОНОМУ СВСВВУВ/СТОУ(46) 30.11.88. Бюл. В 44 (71) Украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) В.И.Бесулин и П.И.Каркач (53) 591.463,1:621.7(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР В 691132 кл А 61 0 7/02 1979Авторское свидетельство СССР Ф 1136806, кл. А 61 Р 7/02, 1985.(54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ СПЕРМЫ ИНДОКОВ(57) Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных птиц. Целью изобретения являетсяповышение биологической полноценности спермиев. Охлаз)ение и эквилибрацию спермы при 2-4 С проводят в течение 55-70 мин. Перед заморазиванием и после оттаивания насыщают спермуводородом. Заморазивание осуществляют в три этапа: 1 - от 2-4 до (-12)(-14) С за 180-240 с, 1 Т - от -14до (-58)-(62)С за 160-180 с, 111 -от -62 до -196 С за 20-40 с. Увеличение оплодотворяющей способности сперииев при насыщении спермы водородомперед замораяяванием и после оттаивания достигается за счет ингибированияаэробного ферментативного окисления,снижения процессов переокисления липидов мембран спермиев, интенсивноеокисление которых при действии низкихтемператур приводит к накоплению токсических продуктов. Способ обеспе"чивает получение оплодотворенности яицв течение первых трех недель на уровне 71-74,6 Х при выводе молодняка -60-613. 5 табл. С."Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, в частности к способамобработки спермы самцов птиц.П р и м е р . Сперму от индюков получают асканийским способом, оцени"вают по подвижности спермиев и другим показателям, разбавляют защитнойсредой в соотношении 1:3 при комнатной температуре . Затеи ставят в холодильник иа эквилибрацию, котораяпродолжается 55-70 мин. Увеличениеи уменьшение периода эквилибрацииспермы индюков при плюсовой температуре ведет к заметному снижению подвижности оттаянных спермиев и проценту целых акросом.Проведенные исследования показали, что при применении более короткого (10"40 мин) периода эквилибрациив спермнях не создается условий дляпассивного осмотического ультрафильтра, не поступает уравновешивания концентрационных градиентов вещества, 25растворенных внутри снермиев и находящихся в окружакщей его среде,Кроме того, при таком короткомпериоде эквилибрации спермии болеевосприимчивы к повреждению, обусловленному токсическим действием криопротектора.Так, подвижность спермиев послеоттаивания при 55-70-минутном хранении составила 346 361 балла а при 3510-40-минутном только 0,54-2, 14 балла,Это подтверждается и большей степенью деструктивных изменений цитоплазматической мембраны спермиев 40(9429-9954% против 766"757%)После 55-70-минутного охлажденияспермы при 2-4 С в нее вводят крио"протектор ВИ-диметилацетамид. Приэтом днметилацетамид вводят в разбавленную сперму за 20-70 с до глубокого замораживания. Исследованиями также доказано, что увеличениепериода эквилибрации спермы с криопротектором свьппе 70 мин перед замораживанием вызывает снижение биологической полноценности спермиев .Сразу после введения .криопротектора сперму насьпцают водорадом в течение 20-30 с и приступают к ее замо"раживанию. При этом указанным приемом обработки спермы перед замораживанием позволяют на 5,7% повыситьоплодотворенность, на 76% выводи- . мость яиц и на 7,3% вывод индюшат (табл. 1)Технический прием насыщения спермы водородом перед замораживанием позволяет снизить процессы переокисления липидов мембран спермиев н придать замораживаемой субстанции форму полых сфер, Образование полых сфер приводит к более разобщенному распределению спермиев н созданию индентичных условий снижения температуры во всем объеме замораживаемого биологического объекта.Увеличение оплодотворяющей способности сперимиев при насыщении спермы водородом перед замораживанием ипосле оттаивания в сравнении с неонработанной, но замороженной по предлагаемому режиму спермой (2 группа) н в сравнении с прототипом (1 группа) достигается за счет ннгибирования аэробного ферментативного окисления, снижения процессов переокисления липидов мембран спермиев, интенсивное окисление которых при действии низких температур приводит к накоплению токсических продуктов.После насыщения спермы водородомосуществляют трехэпатное эамораживание в облицованных необлицованныхгранулах, в пайетах или же на внутренней поверхности стеклянных флаконов, вращающихся в морозильной камере.Для регистрации температуры образца спермы при замораживании в качестве датчика использовали дифференциальную термопару с выходом на регистрирующее устройство - самописецН 399. При замораживании спермы в гранулах охлаждение образцов проводят от 2-4 до (-12)-(-14) С за 180-240 с, затем от -14 до (-58) - (62) С за 160-180 с и до "196 С за 20-30 с.При замораживании во флаконах ипайетах подготовленную для заморажнвания сперму вносят в морозильнуюкамеру, предварительно охлажденнуюдо -95 фС выдерживают в течение 180 о240 С, затем вводят в морозильнуюкамеру пары азота в течение 160-180 с(образец при этом охлаждается до(-58)-(-62) С, после чего флаконынли пайеты опускают в жидкий азот,огде образец охлаждается до -196 С55 з14Замороженную сперму переносят дляхранения в сосуды Дьюара или стацио-.нарные хранилища для биологическихобъектов . Оттаивают сперму в водянойбане при 65-70 С.Рекомендуемый режим замораживания,его оптимальные.и граничные параметры проверены вначале по подвижностиоттаяных спермиев (табл, 2 и 3), азатем и по их оплодотворяющей способности (табл, 4),Представленные в табл. 3 данныесвидетельствуют о том, что лучшаяподвижность спермиев (3,3-3,6 балла)наблюдается при охлаждении спермыдо (-12)-(-14) С в течение 180-240 с.При увеличении спермы или уменьшениитемпературы или продолжительностиохлаждения спермы относительно разработанного оптимума, отмечаетсядостоверное снижение биологическойполноценности спермиев.Наиболее оптимальным периодом замораживания спермы на втором этапеустановлена охлаждение ее да -58 -(-62) С за 160-180 с. При этом получена максимальная подвижность оттаянных спермиев - 3,6-3,8 балла. Скорость замораживания образца спермыона этом этапе составляет 15-18 /мин.После охлаждения. образца с этой жеоскоростью до температуры ниже - 62 С,а также переход на более медленнуюскорость замораживания не улучшалиподвижности оттаянных спермиев, Поэтому логическим завершением исследований явился переход на более высокие скорости охлаждения. Дальнейшеезамораживание образцов спермы в интервале от -62 до -196 С (температура жидкого азота) проводили са скоростями: 50, 70, 100, 150,умин илипогружали сразу в жидкий азот (скорость 200-400 /мин), однако существенных различий по подвижности оттаянных спермиев не наблюдали. Послепрограммного охлаждения спермы до-58 - (-62) С образцы сразу опускалив жидкий азат, при этом образцы,замороженные в гранулах, достигаюттемпературы -196 С за 20-30 с, а образцы, замороженные во флаконах ипайетах - в течение 20-40 с.1оПосле оттаивания при 65-70 С сперму вновь насыщают водородом, для замедления обменньгх процессов и болеедлительного сохранения биологическойполноценности ослабленных после от 40494 4таивания спермиев, процессы катаболизма которых возрастают после ниэкатемпературнага анабиоза в присут 5ствии кислорода.Технический прием насыщения спермы водородом как до замораживания,так и после оттаивания осуществляютследующим образом.Через редуктор из газового баллона для транспортировки и хранениянаполняют водородом кислородную подушку, удалив из нее воздух или другой находящийся в ней газ. Водород,15 находящийся в кислородной подушке,с помощью эбонитового крана, с вмонтированной в него металлической ме"дицинскай иглой И, пропускают через сперму, При этом продолжитель 20 ность насыщения спермы газом составляет 20-30 с при давлении струи газа 18-40 Па.После насыщения спермы водородомпосле оттаивания сразу же приступа 25 ют к искусственному асеменению индеек.Предлагаемый способ обработкиспермы обеспечивает получение оплодатваренности яиц в течение первыхЗО трех недель на уровне 71-74,67 при1выводе молодняка 60-617. по сравнениюс прототипом, поддерживают оплодатвореннасть яиц и вывод молодняка наболее высоком уровне в течение 9 нед.племенного периода,Результаты, представленные втабл. 4, свидетельствУют о том, чтов среднем па опыту на 63 дня оплодотворяющая способность спериа, обрабо 40 танной па предложенному способу,достоверно (Р . 0,0 1) превосходитпрототип па апладатворенности яиц на11,и вывод индюшат на 11,27.Была проведена экспериментальная45 проверка предложенного способа обработки спермы индюков.Результаты экспериментальной про-верки (табл. 5) показывают, что предложенный способ достоверно (Р0,05)превосходит по аплодотворенности(на 6,37) и выводу индюшат (на 6,17)известный способ обработки спермы(прататип),Формула изобретения Способ обработки спермы индюков,включающей разбавление, охлаждение иэквилибрацию с криопротектором приТ а б л н ц а 1 Влияние различаюх способов обработки спермыдо замораживания и после оттаивания на оплодотворяющую способность спермы индюков Группы Режим замораживания Проинкуиндеек спермы и ее обработка . бировано яиц, шт.Вывод Выводимостьиндю- , яиц, 7 Оплодотворенность, Х шат, 7 6,4 80,6 32,Прототип, без обработк редлагаемый: без обработ 3,4 2 5,2 с обработкой дозраживания 14 339 с обработраживаниятаивания йдоз после т 12 85,5 53,5 51440494 62-4 фС, замораживание и оттаивание, щем режиме: от 2-4 до (-12)-(-14) Со т л и ч а ю щ и й с я тем, что, за 180-240 с, от (-14) до (-58)с целью повышения биологической пол- (-62) С за 160-180 с, от (-62) доноценности спермиев, охлаждение снер- В (-196) С за 20-40 с, причем передмы йроводят в.течение 55-70 мин, а замораживанием и после оттаиваниязамораживание осуществляют в следую- сперму насыщают водородом.(Ч С 4 л л л о о о + +1 + л а л СЧ СЧ сЧ О СЧ м о о + +1 СЧ С 4 о С 4 о о + +СО а л СЧ С 4 л вС 4 а а о о + + о о л л СЧ СЧ о о о + СО о СЧ л о+ +1 +1о л вСЧ СЧ мСЧ СЧл ло оСЗд ОЕа аЩ С 4 м л о л 11440494 Таблица 4 Оплодотворяющая способность спермы в течение 9 нед. племенного периода, обработанной предлагаемым способом ипрототипом,Спосо аботкн 3 оплодотво- Х вывода ренности яиц молодняк 1 . 48,6+ 78,74 7,4" Р с 0,05 Р с 0,01 Таблица 5зультаты экспериментальной проверкивого способа обработки спермы индюков плодо т Е Выв оенности да моособ обработ спермы ости одн я а естный (прот 4 42 531 5,4 9 енный Составитель А. Техред И,Дидык лова ктор М.Максижаи едактор И.Б Тирак 65 акаэ 6119/7 дписное ВНИИПИ Государственно по делам изобретений113035, Иосква, Ж, Ра едприя роектиая, 4 оду г,ско роизводственно-полнг ПредлагаемыйИзвестный (птотип) Проинкубировано яицвт Проинкубировано яиц,шт. комитета СССР открытий кая наб., д, 4/5 Х выводимостияиц