Способ количественного определения сульфаниламидных лекарственных препаратов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 791 А 119) П 1) 1501 М 21/78 Вгдф Фс ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Овафа УДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Львовский государственный медицинский институт(54) (57) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФАНИЛАМИДНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ путем обработки анализируемой пробы растворами солянойкислоты, нитрита натрия с последующим фотометрированием полученногораствора, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повьиаения чувствительности и точности, анализируемуюпробу дополнительно обрабатываютраствором 3-( д., р-дикарбоксиэтил)роданина в присутствии боратногобуФерного раствора с рН 12.Изобретение относится к фармацевтическому анализу, касается количественного определения сульфаниламидныхпрепаратов, например норсульфазола,сульфамонометоксина, стрептоцида вФармакопейных препаратах, лекарственных формах и биологических средахкрови и моче, и может быть использовано в центральных заводских лабораториях, контрольно-аналитическихлабораториях аптекоуправлений, научно-исследовательских лабораторияхдля количественного определения сульфаниламидных препаратов в исследуемых объектах и изучения их метаболизма. 15Известен способ определения сульфаниламидных лекарственных препаратов путем титрования раствора пробыанализируемого вещества нитритомнатрия в присутствии индикатора ( 1),Недостатками данного способа являются его малая чувствительность(для одного анализа требуется 0,25 гвещества) и невысокая точность(А - "+ 3,5-4,5) .Наиболее близким к предлагаемомупо технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения сульфаниламидных лекарственных препаратовпутем последовательной обработки 30анализируемой пробы растворами соляной кислоты, нитрита натрия, мочевины, тимола и щелочи с последующимфотометрированием полученного раствора Г 23 55Недостатками известного способаявляются относительно невысокая чувствительность и малая его точность(А = 10,5),Цель изобретения - повышение чувствительности и точности. способа.Поставленная. цель достигаетсятем, что согласно способу количественного определения.сульфаниламидныхлекарственных препаратов путем обработки анализируемой пробы растворамисоляной кислоты, нитрита натрия споследующим фотометрированием полученного раствора анализируемую пробудополнительно обрабатывают раствором3-(с,-дикарбоксиэтил) роданинаГ в присутствии боратного буферногораствора с рН 12,3-(й,р-дикарбоксиэтил) роданинпредставляет собой светло-желтыйкристаллический порошок, легко. растворяющийся в ацетоне, диоксане, спирте, в воде он малорастворим. Т.пл.=140 ОС,П р и м е р 1. Количественное определение сульфаниламидов в Фармако-,макопейных препаратах,Точную навеску 0,01 г исследуемого вещества (норсульфазола, стрепто"цида или сульфамонометоксина) растворяют в 1 .н растворе соляной кислоты 65в мерной колбе на 25 мл. 0,1 мл полученного раствора помещают в другую мерную колбу на 25 мл, затем прибавляют 0,8 мл 1 н раствора хлориднойкислоты, 1 мл 1-ного раствора нитрита натрия и 1 мл 0,1-ного водного раствора реагента. Смесь хорошо взбалтывают и объем в колбе доводят до метки раствором боратного буфера и гидроксида натрия, при этом контролируют рН среды с помощью индикаторной бумаги, устанавливают рН 12.(способ приготовления боратного буфера описан ниже),Окрашенный в красный цвет раствор колориметрируют на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром при 1 = 500 нм, используют кювету с толщиной слоя 10,0 мм. Кювету сравнения заполняют раствором, состоящим из всех компонентов кроме исследуемого вещества. Содержание препарата в процентах рассчитывают по следующим Формулам Р - 0,005 100 25 10пНорсУ1,6165 навеска(мг) Р - 0,004111 ст р2,036 10025 10 навеска (мг)- Р - Ор 002 100 25 10шсчльФамон.1,8122 .навеска(мг) где Р - оптическая плотность (числа 0,005 1,6165 р 0,004 у 2,03 бу0,002; 1,8122 получены в результате математической обработки калибровочной кривой).Для построения калибровочной кривой готовят стандартный раствор путем растворения. точной навески пре-. парата (0,01.г) в 25,0 мл 1 н раст-. вора соляной кислоты. 1 мл стандартного раствора содержит 0,4 мг.препарата. Исходя из стандартного раство-. ра готовят серию растворов с содержанием исследуемого вещества от 0008 до 0,2 мг, Для этого в четыре колбы емкостью на 25 мл каждая помещают соответственно 0,02; 0,04; 0,06; 0,5 мл стандартного раствора. Для проведения реакции азосочетания к ним последовательно прибавляют 0,8 мл 1 н раствора соляной кислоты, 1,0 мл 1-ного раствора нитрита натрия и 1,0 мл 0,1-ного раствора реагента. Содержимое каждой колбочки хорошо взбалтывают и доводят до метки, используя смесь боратного буфера и гидроксида натрия, Для приготовления буферного раствора берут 12,367 г борной кислоты, растворяют ее в 100 мл 1 н раствора гидроксида натрия, доводят объем раствора до1105791 ром при 1 = 500 нм, используют кювету с толщиной слоя 10,0 мм, Кюветусравнения заполняют раствором, состоящим из всех компонентов кроме исследуемого вещества,5 Результаты для построения калибровочного графика приведены в табл.1.Таблица 1 100,0 мл дистиллированной водой. К полученному раствору прибавляют 200 мл 0,1 н раствора гидроксида натрияОкрашенный в красный цвет раствор колориметрируют на фотоэлектроколо-. риметре ФЕК-М с зеленым светофильтОптическая плотность 1 Р) 1 1 Концентрация, (С) Стрептоцид Сульфамонометоксин Норсульфазол 0,015 0,008 0,016 0,03 0,024 0,040 0,080 0,120 0,140 0,160 0,180 0,20 Подчинение светопоглощения закону Бугера-Ламберта Вера сохраняется 35в пределах концентраций 0,0080,2 мг/мл для всех исследуемых лекарственных, препаратов,П р и м.е р 2. Количественноеопределение сульфаниламидов в таблетках.Точную навеску порошка таблетокнорсульфазола, стрептоцида или сульфамонометоксина с содержанием препарата около 0,01 г растворяют в 1 нрастворе соляной кислоты в мернойколбе на 25 мл. Спустя 30 мин смесьфильтруют через бумажный фильтр,отбрасывают первые 5 мл фильтрата.Из последующей порции отмеривают.0,1 мл и вносят в колбу на 25.мл. 50Дальнейший анализ проводят аналогично .примеру 1.Содержание препарата рассчитывают по формулам Результаты количественного определения представлены в табл, 2.П р и м е р 3, Количественное определение сульфаниламидов в крови,Точный объем 0,5 мл сыворотки крови, содержащей 0,1-0,05 мг исследуемого препарата, помещают в пробирку с притертой пробкой и прибавляют 0,8 мл 1 н раствора соляной кислоты, 1 мл 1-ного раствора нитрита натрия и 1 мл 0,1-ного раствора реагента. Смесь хорошо взбалтывают и доводят ее объем до 25 мл боратно-буферным раствором, при этом контролируют рН с помощью универсальной индикатоРной бумаги, устанавливают рН 12, Окрашенный в красный цвет раствор колориметрируют на фотоэлектроколориметре ФЕК-М аналогично примеру 1.Содержание препарата в крови рассчитывают по формулам 0 - 0,005 25 10 100 55п 1, 6165 навеска . препарата (мг) П - 0,005оноре1,6165 Ч г/л 0 -0,0042,036 Ч 60 г/л стр 2,036 . навеска препарата(мг) 1 Э - О, 0021,8122. Ч г/л навеска препарата(мг)65 сиффочФ 0,045 0,070 0,135 0,20 0,250 0,260 0,300 0,330 Р - 0,004 25 10100 Р - 0,002 25 10 100 0,020 0,035 0,050 0,085 0,170 0,250 0,290 0,330 0,370 0,410 0,020 0,030 0,045 0,075 0,145 0,220 0,255 0,295 0,330 0,3651105791 Для анализа используют точный объем 0,1 .мл .мочи .с содержанием .препарата 0,08-0,04 мг и помещают в .пробирку.с притертой пробкой,Дальнейший анализ проводят аналогично примеру 1Содержание препарата рассчитывают по формулам Р - 0,005Норс1,6165"0,1 мг/мл; Р - 0,004Стр2,036 0,1 мг/мл; В - 0,002 мг/мл.сульфомон 12,81220,1 Результаты количественного определения представлены в табл. 2,Таблица 2.Метрологическиехарактеристики Найдено Препарат Дано В фармакопейном препарате мг/мл0,04020,03950,04020,08040,07730,08040,03970,04070,08150,0790,08150,04020,09910,04020,07890,0800 мг/мл п=6, х=100,15 0,04 100,50 98,75 Норсульфазол 0,04 6 =0,95,Й =0,42 100,50 100,50 0,04 0,08 0,08 2 =1,07, А=+1,08 0,08 п=5; х=100,70,0,04 Стрептоцид 6 =1, 566, 6 - =О, 70,0,04 0,08 0,08 Э =1,79, А=+1,78 0,08 п=5, х=99,47 0,04 Сульфамонометоксин 6 =1,24, 6-=0,55,0,04 Э =1,42, А=+1,42 0,08 0,08 где Ч - объем сыворотки, мл.Результаты количественного определения представлены в табл, 2.П р и м е р 4. Количественное определение сульфаниламидов в крови животныхВ желудок животных (крыс) предварительно вводят 0,5 г стрептоцида или норсульфазола,с помощью зонда. Кровь от животных берут .спустя 1,5 ч после приема. препарата. 30Точный объем 1,0.мл сыворотки крови смешивают с 9,0 мл дистиллированной водыВ колбу на 25 мл вносят 0,1 мл сыворотки, полученной при разбавле нии, и проводят анализ аналогично примеру 3.Результаты определения представлены в табл, 2.П р и м е р 5. Количественное 2 О определение сульфаниламидных препаратов в моче,96,62 100,50 99,25 101,75 101,87 98,75 101,87 100,50 97,75 100,50 98,62 100,001105791 Продолжение таблицы 2 0,08 9375100,50 0,0750 0,0804 0,08 В моче (1 п ч 1 го) мг/мл 0,04 0,04 0 04 0,04 0,0414 004 103,50 93,25 0,04 Стрептоцид 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 В крови животных (крыс) Оптическая плотность мг/мл 8,04 0135 0,140 8,35 8,04 0,135 7,85 0,132 0,132 0,180 0,175 0,180 0,170 0,170 7,85 8,64 Стрептоцид 8,34 8,64 8,49 8,49 Норсульфазол Сульфамонометоксин Норсульфазол 0,04 0,04 0,04 0,04 мг/мл 0)0402 0,0402 0,0402 0,0414 0,0373 0,0397 0,0397 0,0388 0,0388 0,0402 0,0386 0,0402 0,0391 0,0391 100,50 100,50 100,50 103,50 99,25 99,25 97,00 97,00 100,50 9650 100,50 97,75 97,75 п=5, х =101,7,6=1,48,1 =0,66х Зр=1,68, А=+1,65 п=5, х=97,15,6=2,45,6=1 09,Зр=2,79, А=12,733 п=5, х=98,04,Д=1,80,6 =0,80х Эр= 2,40, А=+2,06 х=8,02, п=5,6 =0,2046,х=8,02,п=5,6 =0,2046,х Оф 0913 ф1105791 12 Продолжение таблицы 2 В фармакопейном препарате (метод нитрометрии) норсульфазол 0,3 0,2940 0,3120 0,2932 0,2960 0,3092 0,2470 0,2500 0,2302 0,2550 0,2400 98,00 104,00 97,73 98,66 103,66 п=5, х=100,41,6 =3,16,6-= 1,41,3 =3,60А=+3,58 0,3 0,3 0,3 0,3 0,25 Стрептоцид 98,80100,00 92,08102,00 96,00 п=5,.х=97,77,б =3,85,6; =1,71,2 =4,37А=4,46 0,25 0,25 0,25 0,25 35 Таблица 3 Реактив Форма Название 3-(о-р-Дикарбоксиэтил)роданил Тимол 2 АЪ Открыв Пред. Зг А 3 мини- разбав мум Пред.разбав Открывмини- мум 1:2500 1,79 1,78 100 1:10000 10,5 11,3 40 Фармокопейныйпрепарат Стрептоцид Составитель С.ХованскаяРедактор Ю.Ковач Техред Ж.Кастелевич Корректор И.Муска Заказ 5592/33 Тираж 823 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д,4/5 Филиал ППП фПатентф, г.ужгород, ул.Проектная,4 Применение предлагаемого способа приводит к повышению чувствительнос О ти реакции азосочетания в 2,5 раза, значительно повышает точность и специфичность метода, что позволяет проводить определение минимальныхколичеств сульфаниламидов в лекарственных формах и биологических жид" костях без предварительного разделения смесей на компоненты.Сравнительная характеристика методов приведена в табл, Э.