Способ количественного определения димилина в растительных объектах

Союз СоветскмиСоцмапнстмчесимнРеспублик ОП ИСАНИЕИ ЗОБРЕТЕ Н ИэоК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 888034до делам изобретений и открытий(7 г) Авторы изобретения Г.ф. Вылегжанина и Н.И. Красновская Всесоюзный научно-исследовательский институтбиологических методов защиты растений(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИМИЛИНА В РАСТИТЕЛЬНЫХ ОБЪЕКТАХ Иэооретение относится к области физико-химических способов определе- ния органических соединений и может быть использовано для обнаружения остаточных количеств инсектицидов, в частности димилина, в растительных объектах (листьях, клубнях, плодах и т.д.) и контроля за качеством сельскохозяйственной продукции.Известен способ определения димилина в организме насекомых и.воде водоемов (прудовой воде), заключающий" ся в экстракции соединения из насекомых - ацетоном, из воды - этилаце-. татом, концентрировании и очистке экстракта, идентификации соединения методом ТСХ и количественной оценке методом ГЖХ 1,11.Но применение этого способа для анализа растительных проб невозможно ,по следующим причинам:ацетон не является подходящим экстрагентом для растительных проб, содержащих высокий процент воды, из 2за его смешиваемости с водой и затруднительности дальнейшего перерас-,. пределения димилина иэ водного аце"тона в другие органические растворители. При этом практически весь димилин остается в водном ацетоне всилу высокой полярности димилина;без .тщательной очистки экстрактовэтот метод невозможно осуществить, 1 Опоскольку ТСХ не обеспечивает разде-ления сложной многокомпонентной смеси коэкстрактивных веществ и димили на при высоком содержании пигментов,жиров и восков, имеющихся в растительных объектах. Целью изобретения является сокращение сроков анализа и повышение его точности.Поставленная цель достигается тем, что в качестве органического растворителя при экстракции димилина из растительных объектов используют хло- ристый метилен, а очистку экстракта51 О15 20 25 эо 35 4 О 45 50 55 осуществляют методом препаративной хроматографии.П р и м е р. Навеску 10 г измельченных листьев или 50- 100 г клубней картоФеля или плодов баклажан помещают в коническую колбу емкостью 500 мл со 100 или 200 мл хлористого метилена и извлекают димилин в течение 16-18 ч (через ночь) методом настаивания. Отфильтровывают, экстракт через воронку Бюхнера и бумажный фильтр в коническую колбу, используя водоструйный насос. Растительный остаток в колбе и на фильтре дважды промывают по 50 мл хлористым метиленом, присоединяя его к основному экстракту. Объединенный фильтр сушат над безводным сернокислым натрием или магнием, вновь Фильтруют и . концентрируют до 5-7 мл, используя ротационный пленочный испаритель при температуре 40оЭкстракт наносят полосой на препаративную пластину из кремниевой кислоты (размер 816 или 20 х 20 см, толщина слоя 2 мм, размер частиц 0,10 мм) на высоте 2 см от нижнего края пластины, Рядом наносят стандартный раствор димилина для установления расположения соединения после проявления хроматографической пластины в системе хлороформ. Дают подняться фронту растворителя до верхнего края пластины. Затем ее проветривают в течение 20-30 мин в вытяжной шкафу при комнатной температуре.Делят полосу пластины со стандартным раствором димилина на 2 см поперечные зоны, начиная от линии старта, до верхнего края пластины. Соскребают слой сорбента из каждой зоны в отдельную чистую колбу емкостью 50 мл со шлифом 29 или 14,5 мм. Вливают в каждую по 10 мл ацетона свежеперегнанного, подсбединяют колбу к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане при 55-60 С в течение 5 мин. Фильтруют экстракт, через пористый фильтр в круглодонную колбу, используя водоструйный насос. Дополнительными порциями ацетона (5 х 2 мл) ополаскивают сорбент и колбу и присоединяют его к основному экстракту, Упаривают ацетон на водяной бане до 0,5 мл и наносят остаток на ТСХ силуфол Уф 254 (ЧССР). Рядом с анализируемым раствором наносят свидеталь 5-10 мкг стандарта димилинаПроявляют ТСХ в системе хлороформ-ацетон(4:1), проветривают на воздухе ипросматривают под Уф-лампой. Отмечают й димилина,Определив таким образом зону расположения димилина на препаративнойпластине, соскребают на этом же уровне слой сорбента с растительной про-,бой, захватывая полосу на 0,5 см шире для обеспечения количественногоизвлечения димилина из анализируемой пробы. Зкстрагируют димилин изсорбента, как описано выше, Ацетоновый экстракт упаривают до 0,5 мл ииспользуют для ТСХ идентификации,перенося количественно на ТСХ силуолУф 254 в виде полосы шириной 2 см. Рядом с анализируемой пробой наносятстандартный раствор димилина 510 мкг. После проявления ТСХ в системе хлороформ-ацетон (4:1) проветривают пластину на воздухе, просматривают в Уф-свете и отмечают зону расположения соединения. Выскребают слойсорбента с димилином в колбу емкостью10-15 мл. Экстрагируют димилин 3 -5 мл ацетона при 3-5 минутном нагревании на водяной бане в колбе, снабженной обратным холодильником. Фильтруют экстракт через пористый фильтр,используя водоструйный насос, Ополаскивают трижды колбу и Фильтр ссорбентом 1 мл ацетона, присоединяяего к основному экстракту. Отгоняютацетон на водяной бане, отдувая парыацетона током воздуха. Очищенный остаток в колбе используют для количественного определения димилина. Количественное определение димилина проводят по способу, заключающемуся в том, что к очищенному анализируемому остатку добавляют 0,5 мл свежеперегнанного диметилсульфоксида, 0,3 мл иодистого метила и 20 мг гидрида натрия. Колбу с содержимым сильно встряхивают и оставляют на 15- 20 мин. Затем вливают 3 мл гексана, после чего осторожно по каплям добавляют 10 мл воды. Закрывают колбу пробкой и встряхивают 20-30 с. Оставляют для разделения слоев. Отделяют гексановый слой метилированного ди- милина. Водную Фракцию встряхивают вновь с 1 мл гексана, Присоединяют этот гексановый экстракт к первому. Сушат экстракт безводным сернокислым натрием. Фильтруют гексановый экстракт в сухую чистую пробирку с делениями и упаривают гексан до нужного888034 где 5объема (1-2-3 мл). Доводят объем дометки гексаном и используют для ГНХопределения,Условия ГЖХ определения метилированного димилина: хроматограф 3"Цвет" с пламенно-ионизационнымдетектором, стеклянная колонка 2 м к3,5 мм, заполненная хроматономМ-АЯ-НМОЬ (0,16-0,20 мм) с 5 Ж 5 Е температура испарителя 230 , колонки Р220 , азот 40 мл/мин, водород30 мл/мин, воздух 400 мл/мин, шкалаэлектрометра 2 10 ", а время удерживания метилированного димилина9,5 мин.13Для количественного определенияхроматографировали анализируемые истандартные растворы с известной концентрацией вещества (10-100 мкг/мл),в колонку хроматографа вводили по2 мкл из серии стандартных растворов для получения высоты пика, близкой к анализируемым растворам.Для по.лучения средней высоты пика проводили 2-3 параллельных определения,Содержание димилина в пробе (вмг/кг) вычисляли по формуле: Дщ Сл Ц Са - и у лЗР- высота пика стандартного 1раствора, мм; к - высота пика анализируемогораствора, мм; - объем стандартного раствора, вводимого в колонку газово- ЗЗ го хроматографа, мкл; - объем анализируемого раство. ра, вводимого в колонку газового хроматографа, мкл; - концентрация стандартного 4 Рраствора, мкл/мл; - объем экстракта анализируемой пробы, мл;- масса пробы, кг. бВ таблице 1 приведены данные, характеризующие предел обнаружения и точность количественного определения димилина.Возможности метода проверены при исследовании в лабораторно-полевых опытах продолжительности сохранения и биологической эффективности димилина на картофеле и баклажанах в борьбе с колорадским жуком. В лабораторно-полевом опыте с участков карто-. фельного поля площадью 2 га и баклажанного поля в 0,2 га, обработанных 0,08-0,2 М по действующему веществу (253 смачивающийся порошок), через определенные интервалы времени отбирали пробы листьев картофеля и баклажан и съемный урожай картофеля и баклажан. Определяли в них содержание димилина предлагаемым способом. В таблицах 2 и 3 представлены результаты определения.Преимущества предлагаемого способа заключаются в том, что значительно сокращается рабочее время, затрачиваемое на анализ, для экстракции и очистки используются эффективные дешевые, легкодоступные реагенты, а их сочетание позволяет отделить мешающие определению вещества, четко выделить на ТСХ димилин и использовать его для дальнейшего количественного определения.Другие дополнительные преимущества предлагаемого способа заключаются в том, что он позволяет. распространить применение его к широкому кругу растительных объектов и с высоким со" держанием коэкстрактивных веществ, что в конечном итоге будет способствовать организации охраны окружающей среды от неблагоприятного воздействия этого пестицида.888034 гТаблица 1Результаты количественного определения димилина в различныхрастительных объектах Димилина Проба задано найдено мкг мкгСтандартныйраствордимилина 8,21 27,11 5,23 3,61 7 30 0,34 0,02 0,05 100 18,60 5,10 11,11 7,63 5,32 22,89 4,20 2,41 10,32 50 20 10 г листьевбаклажан Контроль Не обнару- жено 1,50 0,60 1,66 2,42 1,08 2,80 75,0 80,0 20 15,0 10 8,0 10 г клубней картофеля Контроль Не обнаружено20 15,0 1,50 0,60 1,66 2,42 1,08 2,80 75,0 80,0 10 8,0 20 г плодовбаклажанов Контроль Не обнару- жено 3,82 2,92 8,08 6,90 3,44 10,95 20 15,0 10 7,0 75,0 70,0 100 91,79 80 69,89 50 42,62 20 14,08 10 9,Л 5 10 г картоФельныхлистьев Контроль Не обнару- жено 89,60 40,94 12,90 13 2 4888034 10 Таблица 2 Результаты определения димилина на листьях картофеля после обработки их димилином Норма расхода димилинаОбнаружено димилина в мг/кг листьев в 1 день на б день на 10 день на 16 день на 24 день Не обнаружено Контроль Не обнаружено Не обнаружено Не обнаружено Не обнару-жено 0,02 640 г/га 320 г/га 1,50 5,52 0,01 0,20 0,86 0,80 0,06 0,01 0,20 П р и м е ч а н и е: в. клубнях съемного урожая картофеля остатков димилина не обнаруженоТаблицаРезультаты определения димилина на листьях Оаклажан послеих обработки димилином Обнаружено димилинв в мгlкг листьев Норма расхода димилина 1в 1 день на 2 день на 26 день на 33 день Не обнаружено Не обнаружено Не обнаружено Не обнару- жено Контроль 0,42 0,34 3,81 0,01 0,01 0,65 0,01 24,65 0,01 0,22 П р и м е ч а н и е: спустя 44 дня после обработки в съемных плодах баклажан остатков димилина не обнаружено. формула изобретения Способ количественного определения димилина в растительных объектах, .55 включающий его экстракцию органичес" ким растворителем, концентрирование экстракта, очистку экстракта, иден 240 г/га320 г/га640 г/га320 гlга + 500 г/гахлорофоса 3,57 16 91 23,45 16,36 тификацию димилина синтезом тонкослойной хроматографии и количественное определение его методом газожидкостной хроматографии, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью сокращения сроков анализа и повышения его точности, в качестве органического088034 12Составитель П. РубиноваРедактор Н. Аристова Техред М.Рейвес Корректор М. Пожо Тираж 910 Подписное ВЯИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5,Заказ 10718/12 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 растворителя при экстракции димилинаиз растительных объектов используютхлористый метилен, а очистку экстракта осуществляют методом препаратив.ной хроматографии. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе