Способ количественного определения 2, 3-диоксибензойной кислоты

Союз Советских Социалистических РеспубликОП ИКАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Фс.Г и КАВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(61) Дополнительное к авт, свид-ву(22) Заявлено 0304,78 (21) 2598247/23-04 (51)М. Кл,С 01 й 33/15 а присоединением заявки Ио(23) Приоритет Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытийОпубликовано 23,12,8 ЦБеллетень Ио 4 7 Дата опубликования описания 23. 12. 80,институт 71) Заявит твенный медицйЧк. Читинский госуд ПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИ 2,3-ДИОКСИБЕНЗОЙНОЙ КИСЛОТЫ30 Изобретение относится к аналигической химии, а именно к способам зпределения 2,3-диоксибензойной кислоты в лекарственных формах и биоло- гических жидкостях при фармацевтичес ких, биохимических и токсикохимических исследованиях.Известен способ количественного определения 2,3-диоксибензойной кислоты, заключающийся в титровании 1 О анализируемой пробы едким натром в присутствии фенофлталеина )11 .Недостатками данного способа является низкая чувствительность и неспецифичность определения. 15Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемым результатам является способ количественного определения 2,3-диоксибензойной кислоты, заключающийся в 20 обработке пробы анализируемого вещества хлоридом железа в кислой среде с последующим колометрированием полученного соединения 2).Недостатки этого способа состоят 25 в невысокой чувствительности й 00 мг/мл) и неселективности.Цель изобретения - повышение чувствительности и специфичности спосо ба определения. Поставленная цель достигается тем, что в способе количественного определения 2,3-диоксибензойной кис лоты в качестве неорганического реагента используют хлорид алюминия и обработку ведут в присутствии этилового спирта с последующим измерением флуоресценции полученного при этом раствораСпособ осуществляется следующим образом. П р и ме р 1. 0,1 г (точная навеска) мелкоизмельченных таблеток переносят в мерную колбу емкостью 100 мл, прибавляют 50-60 мл этилового спирта и энергично встряхивают 3-5 мин. Затем заливают спиртом до метки и тщательно перемешивают. К 1 1 мл полученного раствора прибавляют 1 мл 1-ного раствора хлорида алюминия и 2 капли 2 н. раствора соляной . кислоты, замеривают интенсивность флуоресценции. Содержание 2,3-диоксибензойной кислоты рассчитывают по калибровочному графику, длячего отмеривают 0,1; 0,5; 1,0, 1,5; 2,0 мл стандартного раствора 2,3-диоксибензойной кислоты в этиловом спирте с содержанием 100 мг/мл, добавляют по789750 1 мп 1-ного раствора хлорида алюминия, по 2 капли 2 н. раствора соляной кислоты и доводят объем всехрастворов до 10 мп этиловым спиртом.флуориметрируют одновременно с раствором исследуемых образцов. По резульТаблица 1 Навеска, г Количество 2-3-диоксибензойной кис- лоты Метроологическиехарактеристики Х = 0.4997СР: + 0,0143 0,5260 0,4928 0,4940 0,4928 0,5071 0,4726 0,4988 0,4940 0,5119 0,5071 0,0102а = 0,49971+ 0,0102 П р и м е р 2. Определение 2,3 диоксибензойной кислоты в крови.К 0,1 мл крови добавляют 0,9 мпэтилового спирта, хоРошо перемешивают и центрифугируют 3-4 мин. К 1 мпцентифугата добавляют 1 мл 1 -ногораствора хлорида алюминия, 8 мл этилового спирта, 2 капли 2 н. растворасоляной кислоты, перемешивают.Флуориметрируют со стандартнымиобразцами, которые готовят следующимобразом: в ряд пробирок отмеривают0,1; 0,5; 1,0; 1,5,и 2,0 мп стандартного раствора 2,3-диоксибензойнойкислоты в этиловом спирте с содержанием 100 мкг/мп, добавляют по 1 мп,1 -ного раствора хлорида алюминия,по 2 капли 2 н. раствора солянойкислоты, доводят объем каждой пробирки до 10 мл, перемешивают и флуориметрируют одновременно с исследуемыми растворами.Результаты флуориметрического определения 2,3-диоксибензойной кислотыпрфцставлены в табл. 2,Пр и м е р 3. Определение 2,3 диоксибензойной кислоты в моче,1 мп мочиразбавляют до 10 млэтиловым спиртом, хорошо перемешивают, центрифугируют 3-4 мин при ЮО3000.об/мин. К 1 мп полуЧенного раствора прибавляют 1 мл 1-ного,раствора хлорида алюминия, 8 мл этилового спирта и 2 капли 2 н, растворасоляной кислоты, измеряют интенсив Таблица 2 Время Содержание 2,3-диоксинахожде- бензойной кислотыния, ч55в крови, в моче,мкг/мл Г 0,485(всего) 4,2 2 10,0 0,0442 0,0414 0,0415 0,0414 0,0426 0,0397 0,0419 0,415 0,430 0,0426 татам этих измерений строят калибровочный график,Результаты флуориметрического определения 2,3-диоксибензойной кислоты в таблетках по 0,5 г представлены в табл.1. ность флуорисценции, Содержание 2,3-диоксибензойной кислоты рассчитывают по калибровочному графику, для чего в ряд пробирок отмеривают 0,1", 0,5, 1,0," 1,5, 2,0 мл стандартного раствора 2,3-диоксибензойной кислоты в этиловом спирте с содержанием 100 мкг/мп, добавляют го 1 мп 1 -ного раствора хлорида алюминия, по 2 капли 2 н. раствора соляной кислоты, добавляют объем каждой пробирки до 10 мп, перемешивают, флуориметрируют одновременно с исследуемыми растворами.Результаты флуориметрического определения 2,3-диоксибензойной кислоты в крови и моче при назначении по 0,5 г в виде таблеток представлены в табл. 2.,03 0,3 3 0 8 5,30,0 0,0 40,151 1,10,0 олжение табл. условийак ии 3Ц ту устасть интен- онцентраоты наб- оследней аточитьенныхх и дос прово карст дкост х ко ят на 8,04 по- эле ристогообработавляетая конК алюми ки а 0,00 цент вора хл ого для бы, сос птималь ,03 г/мл нцентрация рания, используализируемой п001-0,1 г/мл,ация - 0,01 уорес- ы ри ица Т Относительная нтенсивностьфлуоресценции,Ъ оресценции завирации соляной соляной кислоты,етового света.редставлены, со 5,6,7 и 8. 0 61 65 Продолжение табл, 2 Концентрация 2,3-диокс кислоты, мкг/мл При изучении оптимальныхпроведения флуоресцентной рна 2,3-диоксибензойную кислновлено, что прямая зависимсивности флуоресценции отции 2,3-диоксибензойной кислюдается при концентрации0,01-50 мкг/мп.Чувствительность реакцино высокая, что позволяетопределения препарата в леформах и биологических жибез отделения.сопутствующинентов. Определения проводтронном флуориметре Эф-ЗМАЗависимость интенсивностценции от концентрации хломиния представлена в табл. Концентрация хлорида алюминия,г/мл Продолжение табл, 2 Зависимость интенсивности флуореции от концентрации 2,3-диоксизойной кислоты представлена вл. 3. носительная интенсивнос флуресценции, Ъ Интенсивность флсит также от конценкислоты, количествавремени и ультрафиолДанные зависимостиответственно, в таб% Продолжитель - ность действия ультрафиолетового света, мин 84 85 85 70 Сразу 83 86 Т аблица 7 80 10 20 7 71 73 7 4 7 15 Концентрация соляной кислоты, н.5Исследуют состав полученноговнутрикомплексного соединения методом изомолярных серий и методом отношения наклонов, изучают спектральные характеристики.Состав внутрикомплексного соединения 2,3-диоксибензойной кислоты с хлоридом алюминия методом иэомолярных серий представлен в табл 9.789750 Таблица 9 Состав соединения, мл Относительная интенсивность луоресценции/% 2,3-диоксибенэойнаякислота Хлорид алюминия при концентрации при концентрации при концентрации 4 о 5/104 1 10 4 0,510 ф 110 0,5 10 10 5,0 1,0 0,5 25 9,0 4,5 13 2,0 1,0 8,0 4,0 46 25 3,0 1,5 7,0 3,5 61 33 6,0 4,0 2,0 3,0 42 73 2,5 5,0 5,0 2,5 82 50 6,0 3,0 4,0 2,0 87 55 7,0 3,5 3,0 1,5 91 62 8,0 2,0 4,0 1,0 65 4,5 1,0 9,0 0,5 81 73 5,0 10,0 концентрации 1 10 методом отношения наклона представлен втабл.10. Состав внутрикомплексного соединения 2,3 - диоксибензойной кислоты с хлоридом алюминия при Таблица 10 Состав соединения,мл Состав соединения, мл хлоридалюминия хлорид алюмин 5,5,0 3,0 4,0 70 0 4 4,5,0 6 5 55 5 2,20 8 2/ 2,5,5 6 25 2,3-диоксибензойная кислота От носитель ая интен ивностьФлуоресенции,2,3-диоксибенэойная кислота От носительнаяинтенсивностьфлуоресценции/Ъ789750 12 Формула изобретения Составитель С.Хованская Редактор И.Михеева Техред М.Кузьма Корректор И.Макаренко9025/38 Тираж 1019 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035,Москва,Ж,Раушская наб;,д,4/5Заказ Филиал ППП "Патент",г.ужгород,ул.Проектная,4 Способ количественного определе.ления 2,3-диоксибензойной кислотыпутем обработки пробы анализируемоговещества неорганическим реагентом вкислой среде, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышениячувствительности способа, в качественеорганического реагента используютхлорид алюминия, обработку ведут в присутствии этилового спирта с последующим измерением флуоресценцииполученного раствора. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1,.Временная фармакопейная статья42/-469-75.2. Коренман И.М. Фотометрическийанализ. М., 1975, с. 264-276 (прототип),