Способ получения пептидов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ АТЕНТУ идов особ и роднодинени свобо ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Дзе Салк институт фор Биолоджикал Стализ (ЦБ)(72) Николас Чай-Кван Линг,Фредерик Стефен Еск (11 Б),Петер Болен (СН), Поль Эрнест Бразо-младший (СА) и Роджер ЧарльзЛуис Гвиллемин (ББ)(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ(57) Изобретение касается пептидови, в частности, получения соединенийобщей ф-лы 1: Н-Туг-А 1 а-Азр-А 1 аеРЬе-ТЬг-Авп-Бег-Туг-Аг 8-1,ув-Ча 1-1,ецС 1 у-С 1 п.ец-Бег-А 1 а-Аг 8-1,ув-Ьец.ецС 1 п-Азре-Мег-К-Х, где Х-ОН илиКН; К-а)-Бег-Агд-С 1 п-С 1 п; б)-БегАгв-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц-Бег; в) -БегАга"С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц-Бег-Азп-С 1 пС 1 ц; г) -Бег-Ага-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц-БегАзп-С 1 п-С 1 ц-Аг 8-С 1 у-А 1 а; д)-БегАга-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц-Бег-Авп-С 1 пС 1 ц-Аг 8-С 1 у-А 1 а-Аг 8-А 1 а-Агец, которые способны вызывать секрецию природного гормона роста, что может быть Изобретение относится к способу олучения пептидов новых биологически активных соединений, которые могут н;,ти применение в медицине.Цель изобретения - разработка способа получения новых производных пеп 801531857(59 4 С 07 К 7/00//А 61 К 37/02 использовано в медицине. Цель изобретения - создание новых малотоксичных и активных пептидов. Их синтезведут присоединением к полимернойсмоле МБГА или полистирольной смолеМ-защищенной аминокислоты общей ф-лыВос-НН-С(К,К)СООН, где К,-Н; К -СН-СН СН СООН, Затем продукт деблокируют и проводят постепенное наращиваниепептидной последовательности в соответствии с ф-лой 1. Далее отщепляютноситель и деблокируют полученныйпептидилполимер общей ф-лы Хуг(Х)А 1 а-Авр(Х)-А 1 ае-РЬе-ТЬг(Х)-АвпБег(Х)-Туг(Х)-Агд(Х)-1 уз(Хз)-Ча 1 Ьец-С 1 у-С 1 пец-Бег(Х+)-А 1 а-Аг 8(Х) -1,уз(Хз)-1.ец,ец-С 1 о -Азр(Хз)-11 е-МегК-Х, где Х-ОСН -бензилполистирольнаясмола или ХН - смола МБГА; Х, - бензилоксикарбонил; Х - 2,6-дихлорбенэил; Х - сложный бенэиловый эФир;Х- бензил; Х- тоэил; Х-2 С 1-Е; К - см. выше. Новые вещества оказывают влияние на секрециюгипофизарных желез, что может бытьиспользовано для промотирования ростатеплокровных и холоднокровных животных в сельском хозяйстве, а также вдиагностической практике. 2 табл. малотоксичных, облдцающцхостью вызывать секрецию приСН, но более доступных соеи м е р 1. Синтез РСКР(1-44 ой кислоты, имеющей формулу15 3185 7 Н-Туг-А 1 а-Азр-А 1 ае-РЬе-ТЬг-Аз иБег-Туг-Аг 8-Ьуз-Ча 1-Ьец-С 1 у-С 1 пЬец-Бег-А 1 а-Агя-Ьуз,ец-Ьец-С 1 п 5Лвре-Мег-Бег-Аг 8-С 1 п-С 1 п-С 1 уС 1 ц-Бег-Азп-С 1 п-С 1 ц-Ага-С 1 у-А 1 аАг 8-А 1 а-Аг 8-Ьец, осуществляется поэтапно с использованием пептидногосинтезатора Бекмана 990 на основехлорметилированной смолы, котораяпоставляется из "ЬаЬ. БувГешз 1 пс;",с содержанием 0,9 Мэкв С 1/г, Соединение ВОС-Ьец со смолой получаютсогласно процедуре, описанной ниже,и это приводит в результате к замещению примерно 0,22 ммоль Ьец на 1 гсмолы. Все используемые растворителитщательно дегазируют путем пропускания инертного газа, предпочтительногелия, с тем чтобы гарантировать отсутствие кислорода, который может нежелательно окислять серу группы МегПосле снятия защиты и нейтрализации пептидную цепь поэтапно встраивают в смолу. Снятие защиты, нейтрализация и введение каждой аминокислотыобычно осуществляют согласно процедуре, описанной в табл. 1.Для реакции соединения на 1 г смолы используют 1 ммоль ВОС-защищенной30аминокислоты в хлористом метиленеплюс 1 экв. 0,5 М ДСС 1 в хлористом -метилене или 30% ДМГ в хлористом метилене, реакция протекает в течение2 ч. При соединении с Ага используютсмесь 10% ДМГ с хлористым метилецом, 35используют как защитную группу с гидроксильной боковой цепью для Бег иТЬг. 2-хлор-бензилоксикарбонил (2 С 1 Е) используют как защитную группу длябоковой цепи Ьуз. ТоБ используется для 40защиты гуанидиногруппы Агя, и С 1 пили Авр карбоксильная группа защищенакак Вг 1 эфир, Гдроксильная фенольнаягруппа Туг защищена как 2,6-дихлорбензил, По окончании данного синтеза45получают следующее соединение:Х-Туг (Х) -А 1 а-Азр (Х 1)-А 1 ае 1 Ь 1-ТЬг (Х 4) - Авп-Бе г(Х) -Туг(Х ) -Аг 8(Х 6)-Ьуз(Х )-1 а 1-Ьец-С 1 у-С 1 пЬец-Бег(Х) - А 1 а-Агд(Ха)-Ьуз(Хт) - 50Ьец-Ьец-С 1 п-Азр(Х)-11 е-Мег-Бег(Х) -Аг 8(Х)-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц(Х)-Бег(Х) -Авп-С 1 п-С 1 ц(Хз)-Аге(ХБ)-С 1 у-А 1 аАгя(Х 6)-А 1 а-Аге(Х 6)-Ьец-Х,где Х - бенэилоксикарбонил;(Х - 2, 6-дихлорбензил;Х - сложный бензиловый эфир;3Х( - бецзил; Х - тозил52 С 1-;Х - Х-О-СН-бецзолполистирольцыйсмоляной носитель.После того как последняя Туг группа соединена со смолой, группу ВОС удаляют посредством 45% ТРА в СН С 1 . Для того, чтобы отщепить и снять защиту с оставшейся защищенной пептидом смолы, ее обрабатывают 1,5 мл анизола, 0,25 мл метилэтилсульфида (МЕБ) и 10 мл фтористого водорода (НР) на 1 г пептида - смолы при температуре -20 С в течение 30 мин и при 0 С также в течение 30 мин, После удаления НР в высоком вакууме оставшуюся смолу - пелтид промывают поочередно обезвоженцым диэтиловым эфиром и хлороформом, и пелтид затем экстрагируют дегазировацной 2 н. уксусной кислотой. В результате лиофцлизации экстракта уксусной кислоты получают белое мягкое вещество, Отщелленньп и лишенный эать лелтид затем растворяют в 30%-цой уксусной кислоте и подвергают гель-фильтрации ца тонком геле БерЬадех СДанный пептид затем дополнительно очищают посредством катионообменной хроматографии с использованием карбоксиметилцеллюлозы СМЪаГшап (18 х 18 см, У, = 50 мл), и с использованием вогнутого наклона, образуемого путем закапывания 1 л 0,4 М ИН 4 ОАс, рН = 6,5, в колбу для смешивания, содержащую 400 мл 0,01 М %1 ОАс, рН = 4,5. Окончательную очистку осуществляют посредством распределительной хроматографии на носителе РЬаспадал тонкого порошка БерЬаех Сс использованием системы растворителей НВ 4 ОН: ЕВОН: лиридин: 0,2%ИНОАс 4:1:1:7. Хроматографические фракции тщательно разделяют методом тонкослойной (ТЬС) хроматографии с использованием 0,25 мм толщины предварительно покрытых стеклянных пластин, силикагеля 60 без флюоресцентного индикатора, проявление осуществляется с помощью системы растворителей: 1-бутанол, пириин, уксусная кислота, вода 6:6:1,2:4,8. Пластины Т 1,С окончательно проявляются посредством 2 г цицгидрлца в 50 мл уксусной кислоты и 950 мл 1-бутацола. Величина К составляет 0,464. Собирают лишь те фракции, отор це показывают значительную гтеедстоты.25 40 5Выход продукта 80 мг на каждый 1 гполистироловой смолы.Аминокислотный анализ осуществляют после гидролиза в запаянных труб 5ках уже известным в данной областиметодом с использованием аминокислотного анализатора Ь 18 ц 1 шаг с цельюпроверки правильности получаемой последовательности, при этом получаютследующие результаты: Авх (3,62),ТЬг (0,75), Бег (3,5), С 1 х (6,83),С 1 у (2,87), А 1 а (5,10), Ча 1 (0,9),Ме (1,23), 11 е (1,84), 1.ец (5,045),Туг (2,09), РЬе (0,91), 1.ув (2,31), 15Аг 8 (6,61) Анализ подтверждает правильную последовательность,Определяют вращение плоскости поляризации света, и получают следующие результаты; Я , = -65,6+ 1 (С1,30 Х-ная уксусная кислота).,П р и м е р 2. Осуществляют поэтапно синтез РСКР(1-40) формулы НТуг-А 1 а-Авр-А 1 ае-РЬе-ТЬг-АвпБег-Туг-Аге-Ьуя-Ча 1-Ьец-С 1 у-С 1 пЬец-Бег-А 1 а-Ага-Ьуя,ец-Ьец-С 1 пАвре-Мес-Бег-Ага-С 1 п-С 1 п-С 1 уС 1 ц-Бег-Авп-С 1 п-С 1 ц-Ага-С 1 у-А 1 аОН,используя пептидный синтезатор Бекмана 990 на основе хлорметилированной смолы, Синтез осуществляют аналогично примеру 1. Выход продукта составляет 37 мг на каждый 1 г смолы.В результате обработки методами тон 35кослойной хроматографии (ТЬС) и жидкостной хроматографии высокого разрешения (НРЬС) пептид абсолютно чист.Величина К , измеренная аналогичнопримеру 1, составляет 0,414Аминокислотный анализ осуществляют после гидролиза с целью проверкиправильности получаемой последовательности, при этом получают следующие результаты: АВх (3,89), ТЬг= -64,0+1:П р и м е р 3. Осуществляют поэтапно синтез РСКР(1-34) - свободной кислоты имеющей формулу Н-Туг-А 1 а-Аэро55А 1 ае-РЬе-ТЬг-Аяп-Бег-Туг-Аг 8 ЬувЧа 1-Ьец-С 1 у-С 1 п-Ьец-Бег-А 1 а-Ага-ЬувЬец-Ьец-С 1 п-Авре-Ме-Бег-Ага-С 1 пС 1 п-С 1 у-С 1 ц-Бег-ОН с использованием 857дептидного синтезатора Бекмана 990 наоснове хлорметилированной смолы, Синтез проводят аналогично примеру 1.Выход продукта 121 мг на каждый 1 гсмолы. В результате обработки методами тонкослойной хроматографии и жидкостной хроматографии высокого разрешения пептид, как показал анализ, практически чистый продукт. Величина Ксоставляет 0,500.Аминокислотннй анализ осуществляюют после гидролиза с целью проверкиправильности получаемой последовательности, при этом получают следующиерезультаты: Аех (2,87), ТЬг (0,78),Бег (3,78), С 1 х (5,11), С 1 у (1,93), А 1 а(1,07), 1,уя (2,29) и Аг 8 (3,22). Анализ подтверждает правильную последовательность.о = -60,8+1.22П р и м е р 1 . Осуществляют поэтапно синтез РСКР (1-31)-свободной кислоты, имеющей формулуН-Туг-А 1 а-Аяр-А 1 ае-РЬе-ТЬг-АяпБег-Туг-Ага-Ьуя-Ча 1-Ьец-С 1 у-С 1 п,ецБег-А 1 а-Ага-Ьуя-Ьец,ец-С 1 п-Ля реМе-Бег-Ага-С 1 п-С 1 п-ОН с использованием пептидного синтезатора Бекмана990 на основе хлорметилированной смолы. Синтез проводят аналогично примеру 1. Выход продукта составлял143 мг на каждый 1 г смолы. В результате обработки методами тснкослойнойхроматографии и жидкостной хроматографии высокого разрешения пептид,как показал анализ, представляет собой практически чистый продукт. Величина К равна 0,536,Аминокислотный анализ осуществляют после гидролиза с целью проверкиправильности получаемой последовательности, Анализ показывает следующие результаты; АВх (2,73), ТЬг= -65,0+1.П р и м е р 5. Осуществляют поэтапно синтез СКР(1-44)-амида, имеющего следующую формулу: Н-Туг-А 1 аАвр-А 1 ае-РЬе-ТЬг-Аяп-Бег-Туг-Лгг, -Ьув-Ча 1-Ьец-С 1 у-С 1 п-Ьец-Бег-А 1 аАг 8-Ьув-Ьец-Ьец- С 1 п-Авре-МегБе г-Аг 8-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц- Бе г-Ая и-С 1 и 1531857С 1 ц-АгВ-Г 1 у-А 1 а-Агд-А 1 а-Агд.ец-БНгс использованием пептидного синтезатора Бекмана 990 иа основе6 г смолы МВНА, с использованиемтех же операций (изложенных в видетабл. 1), что и в примере 1, Смолупептид обрабатывают 10 -ным анизоломв НГ плюс МСБ, как и в примере 1.После отделения смолы и ее промывкипептид экстрагируют уксусной кислотой и затем лиофилизируют, Послеочистки методом гель-фильтрации,ионообменной хроматографии и затемраспределительной хроматографии получают 321,4 мг пептида, выход которого составляет 54 мг на 1 г смолы. В результате обработки методомтонкослойной хроматографии и жидкостной хроматографии высокого разрешения данный пептид, как показаланализ, представляет собой практически чистый продукт. Величина К 1составляла 0,464Аминокислотный анализ осуществляют после гидролиза с целью проверкиправильности получаемой последовательности, при этом получают следующие результаты: Аях (3,75), ТЬг= -63,1+1.35П р и м е р 6. Осуществляют поэтапно синтез РСКГ 1-40)-амида, имеющегоформулу Н-Туг-А 1 а-Авр-А 1 ае-РЬеТЬг-Аяп-Бег-Туг-Ага-Ьуя-Ча 1-Ьец-С 1 у 40С 1 п-Ьец-Бег-А 1 а-Ага-Ьув-Ьец.ец-С 1 пАвре-МеТ-Бег-Аг 8-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 цБег-Аяп-С 1 п-С 1 ц-Ага-С 1 у-А 1 а- ИНг, используя пептидный синтезатор Бекмана 990 на основе МВЕ 1 А смолы. Синтез45осуществляют аналогично примеру 3.Выход продукта 60 мг на каждый 1 гсмолы, В результате обработки методами тонкослойной хроматографиии жидкостной хроматографии высокогоразрешения получаемый пептид, какпоказал анализ, представляет собойпрактически чистый продукт, ВеличинаК 1 составляет 0,464.Аминокислотный анализ осуществляют после гидролиза с целью проверки 55правильности получаемой последовательности, анализ показывает следующие результаты: Аях (3,76), ТЬг (0,88) Бег (3,68), С 1 х (6,89), С 1 у (3,12), А 1 а (4,08), Ча 1 (0,88), МеС (1,36),11 е (1,76), 1.ец (4,24), Туг (2,00),РЬе (0,80), 1.ув (2,32) и Ага (4,16)Анализ подтверждает правильную последовательность.Ы 1 = -62,2+1.П р и м е р 7. Осуществляют поэтапно синтез СКЕ(1-37)-свободной кислоты, имеющей формулу Н-Туг-А 1 аАвр-А 1 ае-РЬе-ТЬг-Авп-Бег-ТугАгя-Ьуя-Ча 1-Ьец-С 1 у-С 1 ц-Ьец-БегА 1 а-Аг 8-Ьуя-Ьец-Ьец-С 1 п-Аяре-Ме- Бег-Аг 8-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц-Бег-АяпС 1 п-С 1 ц-ОН, с использованием пептидного синтезатора Бекмана 990 на основе хлорметилированной смолы. Синтез осуществляют аналогично примеру 1, Выход продукта 29 мг на каждый 1 гсмолы. В результате обработки методами тонкослойной хроматографии и жидкостной хроматографии высокого разрешения получаемый пептид, как показал анализ, представляет собой практически чистый продукт. Величина К 1 составляет 0,421.Аминокислотный анализ осуществляют после гидролиза с целью проверки правильности получаемой последовательности, анализ показывает следующие результаты: ЛВх (3,92), ТЬг(0,79), Бег (3,62), С 1 х (7,05), С 1 у (1,97), А 1 а (3,17), Ча 1 (1,03), МеТ (1,0), 11 е (1,91), Ьец (4,37),Туг (1, 86), РЬе (О, 76), Ьуя (2, 15), и Агг, (3,40), Анализ подтверждаетгг правильную последовательность. Я = -61,7+1.1)П р и м е р 8. Осуществляют поэ -тапио синтез СКР (1-37)-амида, имеющего формулу Н-Туг-Л 1 а-Авр-А 1 аеРЬе-ТЬг-Аяп-Бег-Туг-Аг 8-Ьуя-Ча 1- Ьец-С 1 у-С 1 п,ец-Бег-А 1 а-Ага-Ьуя-ЬецЬец-С 1 п-Аяре-Ией-Бег-Ага-С 1 п-С 1 пС 1 ц- Бег-Аяп-С 1 п-С 1 ц-С 1 ц-ИНг, используя пептидный синтезатор Бекмана 990 на основе МВНА смолы. Синтез осуществляют аналогично примеру 1. Выход продукта 25 мг на каждый 1 г смолы, В результате обработки методами тонкослойной хроматографии и жидкостной хроматографии высокого разрешения получаемый пептид, как показал анализ, представляет собой практически чистый продукт. Величина К 1 составляет 0,507Аминокислотный анализ осуществляют после гидролиза с целью проверки правильности получаемой послеповательности,анализ показывает следующие результаты: А 8 х (4,02), ТЬг(0,80), Бег (3,49), С 1 х (6,90), С 1 у (1,92), А 1 а (3,08), Ча 1 (1,05), Мег (1,01), 11 е (1,77), 1.ец (4,05), Туг (2,02), РЬе (1,14), 1,уя (2,50) и Ага (3,27). Анализ подтверждает правильную последовательность. с" = -63,3+1.Проводят биологические испытания 10 полученных пептидов. 45 Полученные результаты подтверждают низкую токсичность пептидов, синтезированных в условиях предлагаемого способа, и биологическую активность, выражающуюся в способности вызывать секрецию природного гормона роста. Для определения эффективности пептида в ускорении выделения гормона роста проводят анализ в условиях 15 "ин витро" с использованием синтетического СКГ (1-40) из примера 2 в сопоставлении с равномолярными концентрациями экстрагированного и очищенного естественного СКГ (1-40) и в 20 сопоставлении с контрольным стандар" том СКГ, имеющим уже известную эффективность в ускорении выделения гормона из гипофизарных клеток. Контрольный стандарт представляет собой препарат, полученный от гипоталамуса крысы, который дает половину от максимальной реакции в отношении выделения СН при анализе многослойной биопробы гипофизарной клетки. 30Используют культуры, включающие клетки гипофизарных желез крысы, которые были предварительно удалены за 4-5 дней. Обе культуры определяемой стандартной среды и культуры, которые рассматриваются оптимальными для секреции гормона роста, используются для сравнительного испытания общепринятым образом, Инкубацию подвергаемого испытанию вещества осущест вляют в течение 3-4 ч, аликвоты среды выращивания удаляют и подвергают обработке с целью определения их содержания в иммунореактивном (дгСН) хорошо охарактеризованным методом радиоиммунопробы.Биоактивность аналогов ЬрСКГ 1 п чегго (изучение клеток гипофиза крыс), относительные эффективности аналогов Ьр СКГ-ИН с исключенным окон- чанием - СООН даны в табл, 2. Формула изобретенияСпособ получения пептидов общейформулы 1А-Туг-А 1 а-Авр-А 1 ае-РЬе-ТЬг-АвпБег-Туг-Аг 8-11 е-Ча 1-Еец-С 1 у-С 1 пЕец-Бег-А 1 а-Агяуя,ец,ец-С 1 п-Лв р 11 е-Ме г.-К-х,где Х - ОН, НН 1К-Бег-Ага-С 1 п-С 1 п;Бег-Ага-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц-Бег;Бег-Авп-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц-.Бег-ЛвпС 1 п-С 1 ц,Бег-Ага-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц-Бег-Авп-С 1 пС 1 ц-Аг 8-С 1 у-А 1 а;Бег-Ага-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц-Бег-Авп-С 1 пС 1 ц-Агд-Р 1 у-А 1 а-Аг 8-А 1 а-Аг 8-Еец,отличающийся тем, что,Я-защищенную аминокислоту общей формулы 11Вос-НН-С(К,К,)СООНгде К,-Н;К,-СН-СН,Ой, -СН,СН(СН,)СН СН СОНН СН СН,СООНприсоединяют к полимерной смоле МБГАили бензилполистирольной, деблокируюти осуществляют постепенное наращивание пептидной последовательности всоответствии с общей формулой 1 иот полученного при этом пептидилполимера общей формулы 111ХТуг(Х)-А 1 а-Авр(Х )-А 1 ае-РЬеТЬг(Х )-Ляп-Бег(Х 1)-Туг(Х)-Лгд(ХВ)- 1.ув(Х 6)-Ча 1-заец-С 1 у-С 1 п,ец-Бег(Х)А 1 а-Агя(Х)-1.ув(Х 6)-Еец-Еец-С 1 пАвр (Х ) -11 е-Ме г-К-Х,где Х - О- СН- бензилполистирольнаясмола;Мн - смола МБГЛХ - бензилоксикарбонил;Х,6 - дихлорбензил;Х- сложный бензиловый эфир;Х - бензил;ХтозилХ - 2 С 1-г;К - имеет указанные значения,отщепляют полимер-носитель и защитные группы,Приоритет по признакам;16.06.82 при К - Бег-Лгр-С 1 п-С 1 п;Бег-Лгя-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц-Бег; БегАвп-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц-Бег-Авп-Сп-С 1 ц.К Бег-Агя-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц-Бег-ЛяпС 1 п-С 1 ц-Ага-С 1 у-А 1 а; 15,09.82 приК-Бег-Аг 8-С 1 п-С 1 п-С 1 у-С 1 ц-Бег-ЛяпС 1 п-С 1 ц-Аг 8-С 1 у-А 1 а-Аг 8-А 1 а-Аг 8-Еец.1531857 Та блица 1 12 Реагенты и операции Время смешивания,мин Этап 0,5 Промывка СН С 1 (2 раза)50% трифторуксусная кислота + 5% 1,2-этандитиол в СН С 1 (1-кратно) 50 Х трифторуксусная кислота (ТРА)+ + 5% 1,2-этандитиол в СН С 1 (1-кратно)Промывка СН С 1 (3 раза)Промывка СН ОН (2 раза)10% триэтиламин (Езй) в СНС 1, нейтрализация (2 раза)Промывка СН ОН (2 раза)10% триэтиламин (ЕзИ) с СНС 1, нейтрализация (2 раза)Промывка СНОН (2 раза)Промывка СН С 1 (2 раза)ВОС -аминокислота (1 ммоль/г смолы) плюс эквивалентное количество дициклогексилкарбодиимида (ДСС) в СН,С 1Промывка СНС 1 (1-кратно) 50% диметилформамид в СН С 1 (2- кратная промывка)Промывка 10% триэтиламином (ЕТНИМ) в СН С 1 (1-кратно) Промывка СН ОН (2 раза)Промывка СНС 1(2 раза)25 Х уксусный ангидрид в СН С 1 (2 мл/1 смолы)Промывка СН С 1 (2 раза)Промывка СН ОН (2 раза) 0,5 20,0 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 9 10 11 1200,5 12 13 0,5 14 0,5 0,5 0,5 15 16 17 20,0 0,5 0,5 18 19 Т а б л и ц а 2 96% гарантированные пределы Испытуемые сое- Эффективдинения ность ЬрКСГ-МН(аналог)ЬрСКР (1-44)ОНЬрСКЕ (1-40) МНЬрСКУ (1-40) ОНЬрСКГ (1-37) ННЬрСКР (1-37) ОНЬрСКР (1-34) ОНЬрСКЕ (1-31)ОН 100 61 49 30 28 12 179 50-75 38-62 23-37 23-33 9-16 12-25 6-12 4.Для соединения Аяп и С 1 п в данный этап введен 1, 136 М избыток 1-оксибензотриазола (НОВ 1).