Способ прогнозирования бесплодия у мужчин

(Р ЬЭ Комитет Российской Федерации ио патентам и товарным знакам Р) 4944574/14(71) Ростовский медицинский институт(УЗ Сизякин Дмитрий Владимирович(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ БЕСПЛОДИЯ У МУЖЧИН(7) Изобретение относится к медицине, преимущественно к урологии и иммунологии, и может бытьприменено для прогнозирования развития бесплодия. Цель изобретения - повышение точности иупрощение определения бесплодия при варикоцеле. Сущность предлагаемого способа заключается в том, что исследуется венозная кровь больного варикоцеле. В крови определяют антигены Н 1.А системы и по обнаружению в ней антигена А и отсутствию антигенов А и С прогнозируют высокий9 3риск развития иммунопатологического компонента бесплодия при варикоцеле. Предлагаемый оасоб прост, легко осуществим в лаборатории, не требует дорогостоящего оборудования, а главное в отличие от уже имеющихся методов направлен на прогнозирование развития бесплодия. 1 табанеполную удовлетворенность от проведенного оперативного лечения.Учитывая, что варикоцеле выявляется, как правило, у молодых мужчин, и то, что 50 аарикоцеле в ряде случаев осложняется бесплодием, становится очевидным необходимост прогнозирования бесплодия в наиболее ранние сроки, при выявлении заболевания.Проведенными исследованиями патентной и научна-медицинской литературы выявлен ряд способов диагностики мужскогобесплодия, в частности при варикоцеле, м Описан способ диагностики иммунологиче- м Изобретение относится к медицине, преимущественно к урологии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития бесплодия, вчастности, при варикоцеле.Проблема диагностики и лечения бесплодия у мужчин является одной из серьезнейших и социально значимых задач здравоохранения, Бесплодный брак ведет кразрушению семей, часто чреват различными психогенными нарушениями, отрицательно сказывается на демографическойкартине;К мужскому бесплодию ведет множество причин, одной из которых является варикоцепе, которое сравнительно часто встречается и проявляется следующими симптомами; болями в мошонке, увеличением и отвисанием половины мошонки, чаще слева, гипотрофией яичек. Различают 3 стадии заболевания; 1 стадия - варикоз вен выявляют только пальпатарно при натуживании больного в вертикальном положениитела; 2 стадия - имеется четко определяемое визуально расширение вен, но размеры и консистенция яичка не изменены; 3 стадия - нв фоне выааженной дилятации вен гроздьевиднога сплетения отмечаются явноеуменьшение и дряблость яичка. В настоящее время тактика лечения больных, страдаю цих варикоцепе - оперативная.Одним из наиболее тяжелых оспожне:.ий вдрикоцеле является развитие бесплодия у 20 - 45 мужчин. В Основе развития беспподля при варикацеле лежат различные механизмы; гипаксия и гипертермия семенников рефлюкс токсических мета" болитов и гормонов из надпочечника в яичковую вену; формирование иммунопатапагического компонента,При варикоцепе, осложненном бесплодием, в послеоперационном периоде проводится курс консервативной терапии. Однако восстановление фертипьности в послеоперационном периоде наблюдается внебольшом проценте случаев, чта вызывает 1015 2030 35 40 45 ского бесплодия, заключающийся в там, что лимфоциты больного инкубируются с живыми аллогенными сперматозоидами в течение 60-90 мин, после чего подсчитывают число лимфоцитов, вошедших в контакт со сперматозоидами, По наличию сенсибилизации лимфоцитов к сперматозоидам диагностируют бесплодие, Недостатками способа являются необходимость постоянного наличия и использования экспериментальных животных, получение аллогенных сперматозоидов крыс, субъективность количественной оценки при подсчете в камере Горяева.В работе Л, В. Посисеевой, Ю, С. Татаринова, В, Н. Горадкова и других описан способ определения фертильности мужчин, заключающийся в определении плацентарного микроглабулина в сперме, и при его уровне 16 мкг/мл и ниже определяют сниженную фертильность. Однако для осуществления этого способа необходимы полиэтиленовая матрица, сложные реактивы, в частности антисыворотка против плацентарнога микрагпобупина, что существенно затрудняет практическое применение этого способа,В работе Г, П, Денисова, А. В. Пешкова и других предложено проводить цитафотометрию зякупята, разведенного физиологическим раствором с последующим определением по гистограмме количества сперматозоидов и по изменению величины максимального пика на гистограмме диагностировать бесплодие. Однако для осуществления зтага метода необходимы лазерный проточный счетчик-анализатор микрочастиц, ЭВМ-обработка диаграмм, что делает этот метод крайне сложным и трудно применимым в практическом здравоохранении.Прототипом изобретения является способ, описанный М. И. Ухалем, М. А. Гончаром и Т. М. Вишневской, в котором определяется иммунапатологический фактор олиго-зооспермии у больных простатитом и веэикулитом, Сущность способа заключается в том, чта с цепью диагностики бесплодия в семенной жидкости и непосредственно на сперматозоидах определяют иммунопоглобупины А, М, 6 с помощью пюминесцентных антител и при их наличии определяют иммунопатологический компонент бесплодия, Недостатком этого способа является необходимость сложного оборудования, реактивов. постановка ряда контролей для пюминесцентных сывороток, необходиость получения семенной жидкости и сператазоидов.Таким образом, все указанные способы направлены на диагностику уже имеющегося бесплодия, выявление сформировавшегося иммунопатологического фактора, ноони не позволяют прогнозировать бесплодие при различных заболеваниях. когда бесплодия нет.Целью изобретения является упрощение способа и повышение точности прогнозирования развития иммунопатологического компонента бесплодия. Это достигается путем исследования крови, в которой определяют антигены Н 1 А 510 системы и по обнаружению в ней антигена А 1 и отсутствию антигенов А 9 и Сз про гнозируют высокий риск возникновения иммунопатологического компонента бесплодия при варикоцеле.Описание способа.Кровь, взятую из локтевой вены больно го в количестве 2 мл, дефибринируют, из нее выделяют лимфоциты на градиенте плотности (1,077) фиколл - верографина. Концентрацию лимфоцитов доводят до 2-4 10 /мл, раскапывают типирующие сы6воротки и лимфоцитарную взвесь микрошприцом Тарассаки М 705 в планшеты и инкубируют при 22 С в течение 1 ч, В каждую лунку добавляют 1 мл 5 О-ного зозина, через 2-3 мин закапывают 4 мкл 17%-ного 30 раствора формалина. реакцию учитывают через 10 мин под микроскопом (ОК,х 7 об.х х 20), При выявлении в фенотипе антигена А в сочетании с отсутствием антигенов А 9 и Сз прогнозируют высокий риск развития имму нопатологического компонента бесплодия,Проанализирована частота распределения антигенов НМ у здоровых доноров(600 человек), больных варикоцеле, осложненным бесплодием (27 человек), и больных ва рикоцеле, не осложенным бесплодием (10 человек), Результаты проведенной статистической обработки с использованием не- параметрического критерия Фишера выявили статистически достоверные отли.- 45 чия в содержании антигенов Н 1 А Р 1, А 9 и Сз у больных варикоцеле, осложненным бесплодием (таблица).Таким образом, у больных варикоцеле с бесплодием отмечается существенное уве личение частоты антигена А 1, сочетающееся с отсутствием в фенотипе антигенов А 9 и Сз, по сравнению са здоровыми донорами и больными варикоцеле без бесплодия, Наличие укаэанных изменений в фенотипе явля ется предрасполагающим моментом развития иммунопатологического компонента, приводящего к бесплодию при варико целе. П р и м е р 1, Больной С, 16 лет, поступил в урологическую клинику по направлению райвоенкомата с диагнозом: варикоцеле слева. При объективном осмотре: яички обычных размеров, гладко-эластичной консистенции, безболезненные при пальпации. По ходу левого семенного канатика определяются варикозно расширенные вены, прослеживающиеся до верхнего полюса яичка. Общие анализы беэ особенностей. Данные сперматограммы: объем 5,0, цвет белый, время разжижения 40 мин, запах специфический, рН 8,0, сперматозоиды количество 100 млн/мл, хорошо подвижных 71 , слабо подвижных 18, неподвижных 11, морфологич. изменения: с патологией головки 1 млн., лц нет, эр нет, реакция агглютинации отрицательная. Гор.мональный статус без особенностей, реакция микроспермоагглютинации отрицательная. При Н 1 Атипировании выявлены антигены: А 9, Вз, В 12. Данный фенотип не прогнозирует высокий риск развития иммунологического бесплодия, Больному была выполнена операция Иваниссевича.Пример 2, БольнойД. 17 лет, поступил в урологическую клинику с жалобами на выраженные боли в левой половине мошонки, усиливающееся после физической нагрузки. При осмотре больного выявлено наличие варикозно расширенных вен по ходу левого семенного канатика, несколько не доходящих до верхнего полюса лев. яичка, Лабораторные исследования беэ патологических изменений, гормональный статус в пределах нормальных показателей, реакция микроспермоагглютинации - отрицательная, Сперматограмма: объем 4.5 мл, цвет белый, время разжижения 40 минзапах специфический. рН 7,8 сперматозоиды: количество 120 млн,/мл, хорошо подвижных 73, слабо подвижных 10 оь, неподвижных 170, клетки спермиогенеза единичные в поле зрения, лц 0-0 - 1 х. эц нет. При Н(.А типировании выявлены следующие антигены: А 1, 84, С 1, С 6, Больному установлен диагноз: варикоцеле слева и произведена операция Иваниссевича.8 дан ном случае у больного имеет место варикоцеле слева, не осложненное бесплодием в настоящий момент. однако, учитывая то, что в фенотипе больного Д, проявился антиген А 1 при отсутствии Ав и Сз у больного прогнозируется высокий риск развития иммунопатологического компонента бесплодия, в связи с чем больному необходимо помимо оперативного лечения провести комплекс иммунореабилитационных мероприятий, направленных на предотвращение развития бесплодия.50 П р и м е р 3. Больной К. 26 лет, постуг,ил в урологическую клинику с жалобами на бесплодный брак в течение 3 лет, При объективном осмотре, яички обычных размеров, гладко-эластической консистенции, безболезненные при пальпации. По ходулевого семенного канатика пальпируется конгломерат расширенных вен, прослеживающийся до уровня середины левого яичка, уменьшающийся в горизонтальном положении больного,Лабораторные данные: общие анализыкрови и мочи в норме, анализ сока предстательной железы: лц 0-0-1 х, зпителиальные клетки 2-3 х, гонококки и трихомонады не обнаружены, прочая микрофлора нет, лецитиновые зерна незначительное количество, Сперматограмма; объем 3,2 мл, цвет белый, время разжижения 40 мин, запах специфический, рН 8.0, сперматозоидьк количество 28 млнlмл, хоошо подвижных 23%, слабо подвижных 26 5, неподвижных 51 О/,; морфологические исследования: с патологией головки б млн., с патологией шейки хвоста 3 млнлц 0-0-1 х, эц нет, клетки спермиогенеза единичные в поле зрения, проба Кунина на резистентность положительная, лецитиновые зерна небольшое количество, дгглютиняция спермивв , Гоомональный статус; ЛГ 6,0 мед/мл (1,6-12,5), ФСГ 3,5 ,и /мл (3,4 - 15,8), тестостерон 8,7 нгlмл ,2 - 10), пролактин 86 мкМЕ/мл, Реакция микроспермоагглютинации - титр 1;32 положительная,Больному установлен диагноз: варикоцеле слева, бесплодие в браке 3 года, олигоастенозооспермия, Выполнение операция Иваниссевича, биопсия тестикул. При гистоанализе выявлено: отек стрсмы яичка, очаговый некроз сперматогенного эпителия, незначительное расширение просвета семенных канальцев, во многих канальцах сперматогенез прослеживается до зрелых форм, Клетки Лейцига не изменены,При НЮ типировании лейкоцитов крови больного по указанной выше методике, по локусам А, В, С выявлены антигены Н 1 А: А 1. Аг, Вз, В 12. Таким образом, в его фенотипе был Обнаружен А 1 при отсутствии А 9, Сз, Больному в течение года проводилось лечение; курс клостильбегида, 2 курса профази, однако положительного аффекта достигнуто не было, Сперматограмма, выполненная через 13 месяцев после оперативного лечения: обьем 4,0 мл, цвет белый, время разжижения 40 мин. залах специфический рН 7,4, сперматозоиды; количество 22 млн/мл, хорошо подвижных 180, слабо подвижных 21 ф, неподвижных 61 оь, морфологические исследования с патологией 5 10 15 20 25 30 35 40 45 головки 4 млнс патологией шейки хво.та 5 млн., лц нет, зц нет, клетки спермиогенеза единичные в препарате, проба Кунина на резистентность отрицательная, лецитиновые зерна незначительное количество агглютинация спермиев , Гормональный статус: ЛГ 6,5 МЕ/мл Г 1,6-12,5), ФСГ 4,0 ,и /мл (3,4 - 15,8), тестостерон 8 - 9 нг/мл 2-10), пролактин 80 мкМЕ/мл, Таким образом, у больноо с поощю Н 1 А типирования был выявлен высокий риск возникновения иммунопатологического компонента бесплодия, которое у больною развилось, Иммунопатологический характер его доказан другими исследованиями (реакция микроспермоагглютинации), а традиционные методы лечения положительного аффекта не дали,П р и м е р 4. Больной Г, 31 год, поступил в урологическую клинику с жалобами на боли в левой половине мошонки. В анамнезе больного 1 ребенок, родившийся б месяцев назад. При клиническом обследовании у больного по ходу левого семенного канатика при нахождении больного в вертикальном положении пальпируется конгломерат извитых вен, доходящий до верхнего полюса левого яичка, исчезающий в горизонтальном положении больного.Лабораторные анализы: общие анализы крови и мочи в норме, анализ сока простаты: лц О-О - 1 х, зпителий 1 - Зх, гонококки и трихомонады нет, патогенная микрофлора не выявлена, лецитинсвые зерна в значительном количестве, Сперматограмма: объем 4 мл. цвет белый, время разжижения 40 мин, запах специфический, рН 8,2, сперматозоиды: количество 70 млн/мл, хорошо подвижных 69%, слабо подвижных 19%, неподвижных 12; морфологические исследования: с патологией головки 1 млн, с патологией хвоста нет, лц 1-2 х, зц нет, клетки спермиогенеза единичные в Х, проба Кунина отрицательная, лецитиновые зерна незначительноее количество, агглютинация спермиев отрицательная, Гормональный статус: ЛГ 3,8 МЕ/мл (1,6-12,5), ФСГ 3,9,и /мл 3,415,8), тестостерон 10,4 нг/мл 2 - 10), пролактин 354 мкМЕ/мл. Реакция микроспермоагглютинации отрицательная Больному установлен диагноз: варикоцеле слева, и в связи с выраженным болевым синдромом сделана операция Иваниссевича, При НЮ типировании лейкоцитов были выявлены следующие антигены: А 2, Вь С 2, По их составу иммунопатологического бесплодия у больного не прогнозируется, Фертильность у больного сохранена(56) Авторское свидетельство СССР10 М 1173985, кл, 6 01 й 33/53, 1985. Распределение антигенов Н 1.А у здоровых и больных варикоцеле Составитель Д. СизякинТехред М.Моргентал Корректор М. Максимишинец Редактор Л. Павлова Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4(5 Заказ 3172 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101(рождение ребенка 6 месяцев назад, нормальные показатели сперматограммы).Таким образом, анализ приведенных данных в примере подтвердили прямую и сильную зависимость развития иммунопатологического компонента бесплодия от фенотипа НМ системы у больных варикоцеле,Заявляемый способ по сравнению с имеющимися позволяет прогнозировать развитие иммунопатологического компоФормула изобретенияСПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ БЕСПЛОДИЯ У МУЖЧИН путем исследования организма, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и упрощения нента бесплодия в ранние сроки при выявлении варикоцеле. Способ боле прост и не требует сложного медицинского оборудования и дефицитных реактивов. Апробация 5 предлагаемого способа проведена в урологическом и андрологическом отделениях БСМП Ф 2 им. В. И. Ленина,определения бесплодия при варикоцеле, исследуют комплекс антигенов системы НЫ и при выявлении в фенотипе А 1 и от сутствии антигенов А 9 и Сз прогнозируют бесплодие.15