Способ определения иммунопатологического фактора олигозооспермии у больных простатитом и везикулитом

(51)4 А 61 В 1 О/00 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТМЙ(71) Запорожский институт усовершенствования врачей им. М,Горького(56) ЯхЖхпв 8.8. аг а 1 1 я А АпгдЬоПУ го врегшагоаоа дп вешхпа 1 апйРговгагс Е 1 иЫве вцЬйегг 11. М. 1Ашег Мед Авв; 1982, 247, 7, 014101 5.(54)(57) 1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУ-" НОПАТОЛОГИЧЕСКОГО ФАКТОРА ОЛИГО-ЗООС" ПЕРИИИ У БОЛЬНЫХ ПРОСТАТИТОМ И ВЕЗИ- КУЛИТОМ путем выявления иммуногло 801173985 А булинов класса А в семенной жидкости отличающийся тем, что., с целью повышения точности способа и сокращения времени исследования, из семенной жидкости выделяют сперматозоиды и выявляют дополнительно иммуноглобулины класса М, 6 непосредственно на поверхности сперматозоидов методом люьенесцентных антител.и по наличию иммуноглобулинов трех классов определяют иммунопатологический фактор.2, Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что семенную жидкость обрабатывают в течение 5 мин раст- а вором терилитина в концентрации 50-60 ПЕ с последующим центрифугиро ванием при 2000 8 в течение 5 мин.Изобретение относится к медицине, преимущественно к лабораторной диагностике олигоэооспермии у больных простатитом и виэикулитом.Целью изобретения является ловы шение точности способа и сокращение сроков исследования.Способ осуществляется следующим образом.Сбор семенной жидкости в пробирку больные производят общепринятым методом. Готовят ех йешроге раствор терилитина путемдобавления во флакон с порошкообразной.массой фермента 5 мл 0,97"раствора хлорис того натрия. Семенную жидкость разливают поровну в 4 пробирки и к ней добавляют раствор терилитина, содержащий не более 50-60 ПЕ. Смеси осторожно встряхивают и помещают 20 в,штатив пробирки, выдерживая их при комнатной температуре в течение 5 мин. За это время слизь практичес-ки растворяется, а сперматозоиды и лейкоциты остаются неразрушенными и переходят в окружающую среду. По истечении срока инкубации в пробир" ки к смесям добавляют по 8 мл 0,9%- ного раствора хлористого натрия, осторожно встряхивают и центрифугируют 30 при 2 тыс я в течение 5 мин, Надосадочиую жидкость сливают. К осадку добавляют по 0,3 мл,среды 199 и пробирки встряхивают, Из разведенных осадков на предметных стеклах готовят мазки, Последние высушивают при комнатной температуре и фиксируют в течение 5 мин химически чистым метиловым спиртом. Мазки высушивают при комнатной температуре, готовят 40 разведения моноспецифических люминис" центных антител М, я и А. С этой целью в ампулы добавляют по 1 мп сре- ды 199. На первый мазок контроль ) наносят 0,3 мп среды 199, а на три последующие " раздельно по 0,3 мл раствором.люминисцентных антител М, я и А. Мазки инкубируют во влажной камере в течение 15 мин. По окончании, срока инкубации производят смыв маз ков 0,9%-ным раствором хлористого натрия и струйно дистиллированной водой. Мазки высушивают и с помощью люмисцентного или обычного микроскопа производят микроскопию при 55 Х 400.Способ иллюстрируется следующим примером. Больной Д. Жалобы на боли в надлобковой области и в промежности, резипри мочеиспускании, быструю утомляемость при физической и умственной нагрузкеа также умеренное снижение1 ЬЫо и отсутствие потомства в браке.Семейный анамнез не отягощен, В детстве болел ангиной, респираторнымизаболеваниями и ветряной оспой, Туберкулезом, венерическими заболеваниями не болел. Травм, оперативныхвмешательств не переносил. Паротитоми болезнью Боткина не болел. Хроническим простатитом более с 1977 г.Женат с 1978 г. По заключению врачагинеколога жена здорова,Диагноз; хронический простатит.Веэикулит. ОлигозооспермияМужскоебесплодие.Данные лабораторного, биохимического и иммунологического исследования; общий анализ крови и мочи неиэменены, печеночные пробы не изменены, сахар крови 5,4 млмоль/л,Анализ секрета предстательнойжелеэы - лейкоцитов на 1/2 поля зрения, лецитиновых зерен мало. Симптомкрис таллизации ,Анализ семенной жидкости: количество 2 мл, рН 7,6, Общее количествосперматозоидов 18 млн. Из них подвижных 18%,слабоподвижных 207 и неподвиж-ных 62%. Лейкоцитов 25-30 в поле зрения микроскопа.В посеве секрета предстательнойжелезы патогенной микрофлоры не определяется,При определении 1 А . в семеннойжидкости с помощью метода радиальнойиммунодиффузии по Мапс 1 п эти иммуноглобулины не определяются.При исследовании содержания иммуноглобулинов на сперматозоидах попредлагаемой методике они определяются на подавляющем большинстве сперматозоидов, При этом на 60% сперматозоидов определяются 1 я А, на 307 -1 я Ви на 107 - 1 яМ,После проведенного курса леченияс применением левомизола, индометацина, витамина Е, витамина А и метандростенолона, состояние больногоулучшилось. Боли и дизурическиеявления прекратились, Уменьшиласьутомляемость, Повысилось 1 ЬйоКоличество сперматозоидов повысилосьдо 68 миллионов, Иэ них подвижных567, слабсподвижных 18%,и неподвиж173985 Составитель Л.БонарцевРедактор О,Черниченко Техред С.Мигунова Корректор Л.Бескид Заказ 5088/3 Тираж 722 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 ных 247. При иммунофлюоресцентном исследовании Ер М, я и А на сперматозоидах практически не определялись.Спустя один месяц после окончания курса лечения у жены наступила бе- э ременность, которая протекала нормально и закончилась родами здорового ребенка.Исследования проведены у 35 больных хроническим пиелонефритом и везикулитом, а также у 5 здоровых доноров. У 18 больных с хроническим про статитом и везикулитом отмечалась олигозооспермия.Положительный эффект, специфич" 13 ность и точность способа подтверждаются следующими данными.При хроническом простатите и вези кулите без олигозооспермии (17 человек ) 1 я А, д и М определяются у всех 20 больных на 3-47 сперматозоидов от их общего количества в семенной жидкости, а при олигозооспермии (18. человек ) - на 80-903 сперматозоидов, При этом наиболее часто на сперма-25 тозоидах определяются 1 я А ( на 603 ), . а затем 1 д я (на ЗОБ ). 4У здоровых доноров 1 я А, я и М на сперматозоидах не определяется.С помощью метода радиальной иммунодиффуэии по Мапспь (известный ) 1 я А в семенной жидкости у боль ных с хроническим простатитом и везикулитом беэ олигозооспермии пракес тически не определяется, а у боль" ных с олигозооспермией эти 18 выявляются в количестве 70"80 МЕ лишь у 62,2 Х больных, т.е. у 11.иэ 18 человек. Как указано, с помощью предлагаемого способа 1 я А, я и И определяются у всех 18 больных с олигозооспермией (у 1003 случаев ). Этот факт свидетельствует о том, что предлагаемый способ, определения 1 я А, и М на поверхности сперматозоидов с помощью люминисцентных антител является более точным, чем нэвест" ный. Кроме того, предлагаемый способ значительно сокращает сроки исследования по сравнению с методом радиальной иммунодиффузии ( до 1 ч вместо 24 ч .