Способ диагностики метастазирования опухолей

19) К 3 51) 5 6 33 4 Е ИЗОБРЕТЕНИЯ ТУ омитет Российской Федерации о патентам и товарным знакам(76) Абакарова Офелия Расуповна(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ ОПУХОЛЕЙ(57) Использование: экспериментальная машина,Сущность изо предварительно мике роста опу холи в симметрич измеряют рН окр изменении этот вания судят о р бретения: лабораторным животным прививают опухоль, затем в динахоли вводят электрод в область опуную область здоровой ткани, затем ужающей среды в динамике и при о показателя в сторону защелачиазвитии метастазов. 2 иттИзобретение огносится к медицине икасается проблемы онкологических заболеваний, в частности раннего обнаружения метастазирования опухолей.Известны способы диагностики опухолевых заболеваний (авт, сеид, М 859928, кл. А 61 В 5/04, 1980; авт. сеид, М 1488996, кл. А 61 В 5/00, 1987), которые основаны на измерении биопотенциалов ткани с помощью накладных электродов.Однако эти сйособы не предназначены для обнаружения ранней стадии метастазирования опухолей, хотя решение именно проблемы ранней диагностики метастазирования определяет возможность успешного исхода лечения онкологических заболеваний,Ближайшим по сущности и результату является способ относительно раннего обнаружения метастаэов злокачественной опухоли - "Радиоиэотопная диагностика в онкологии", Киев, "Здоровье", 1981, с, 5,Способ радиоизотопной диагностики метастаэирования опухолей основан на применении радиофармацевтических препаратов (РФП), которые вводятся в организм и, избирательно накапливаясь в опухолях и в метастазах в большем количестве, чем в здоровых тканях, обнаруживаются с помощью радиометрических методов исследования.Для получения изображения (визуализации) органа или ткани, накопивших радиоактивное вещество используются радиодиагностические приборы, основным элементом которых является детектор излучения. Детектор состоит из сцинтилляционного кристалла, фотоумножителей, коллиматора и защиты. Кристалл преобразует попадающие в него гамма-кванты в световые вспышки, Последние от сцинтиллятора передаются на фотокатод фотоумножителя, оптически связанного с кристаллом, и преобразуются в электрические импульсы на выходе фотоумножителя, которые затем поступают в электронные блоки для обработки, В итоге эоны повышенного накопления радиоиэотопных индикаторов или, так называемые. эоны высокой радиоактивности в тканях на сканнограмме представляются в виде "горячего очага", т.е, очага интенсивного радиоактивного излучения. который, соответственно, принимается эа пораженный участок.Радиодиагностические приборы представляют собой сложные, дорогостоящиеустройства, работа на которых требует нежелательной большой затраты времени наисследование одного больного (до 2-х часов и более), что значительно удорожает диагно 5 10 15 20 25 3035404550 стику и одновременно является большим неудобством для больного, котооый по своему состоянию не всегда может выдержать длительное неподвижное лежание в вынужден ном положении.Следует отметить, что радиофармацевтические препараты, используемые в диагностических целях, разделяют по характеру своего сродства к тканям на 2 группы; РФП, куммулирующие непосредственно в опухолях и в метастазах так называемые туморотропные, и РФП, накапливающиеся в здоровых участках тканей,В случае применения последних иэ-эа сравнительно низкого уровня накопления изотопов и,соответственно, менее интенсивного излучения с данных участков зоны поражения на сканнограммах выглядят как "холодные очаги".Однако, в этом случае диагностическая надежность метода относительно невелика. "Холодные очаги" могут быть обусловлены не только наличием метастаз. Любые патологические процессы, ведущие к замещению функционирующей ткани органа, такие как воспалительные процессы кисты, доброкачественные опухоли, рубцовые изменения, сдавления извне в результате патологических изменений в соседних органах и тканях дают на сканнограммах "холодные очаги",И, наконец, одним из самых существенных недостатков радиоизотропного методадиагностирования является необходимостьприменения радиоактивных веществ. К тому же при обследовании больных с онкопатологией допускаются более высокие лучевые нагрузки, так как риск диагностической ошибки значительно выше риска потенциального лучевого повреждения.Целью предлагаемого способа является диагностирование ранней стадии метастазирования опухолей, т.е, такой стадии, когда только появляются биохимическиепредпосылки к появлению вторичных очагов новообразований, при одновременном снижении трудоемкости и вредности для организма.Поставленная цель достигается тем, что в ткань первичной опухоли вводят электрод,предназначенный для измерения рН среды, затем измеряют значение рН в исследуемой ткани ео времени, а раннюю стадию метастазироеания диагностируют по факту по вышения величины рН, т.е. изменениязначения рН в сторону защелачивания.Были проведены эксперименты в онкологическом центре АМН СССР в период с 1986 по 1988 г. Исследования проводились на мышах линии Вистар. весом 22-26 г сшерсть раздвигали и в обнаженной коже 25 30 35 55 индуцироеэнными опухолями трех различных видов солидных опухолей мягких тканей: 1/Асцитная кэрцинома Эрлиха (АКЭ), 2/саркома ОИБ(опухоль индуцированная белком),Животным в мышцу правого бедра вводили необходимое количество клеток соответствующих опухолей и с первого же дня производили регистрацию значения рН единовременно в нормальной ткани левого бедра и в опухолевой ткани правого бедра ежедневно от самого начала процесса развития опухоли до смерти животного,Измерение рН проводили электрометрически на универсальном иономере ЭВ, Индикатором служил стеклянный микро- электрод для измерения рН в тканях.Наркотизированную мышь фиксировали на специальном столике, хвост опускали в стаканчик с физиологическим раствором, туда же ставили электрод сравнения (вспомогательный) для замыкания электрической цепи, Лапку в месте ввода индикаторного электрода обрабатывали спиртом, затем прокол (только кожы) стерильной внутримышечной иглой, после чего в место прокола вставляли индикаторный электрод и аккуратно осторожным движением проталкивали на нужную глубину опухоли или здоровой ткани. Оба электрода рабочий (индикатор) и вспомогательный соединяли с иономером, включенным в сеть завсдогло прогретым и проверенным по инструкции При одновременном определении рН в опухоли и в здоровой ткани использовали 2 иономера для подводки элс ктродов с одного и другого участков измерения,В процессе измерения животное должно быть полностью расслабленно, т.е, хорошо усыплено, С этой целью применялся нембутал из расчета 50 мг /кг васа животного внутрибрюшинно.Показания рН снимали после установления стабильного значения а шкале иономера через 7-10 мин после введения электрода в ткань,Делали перееивку соответствующей опухоли на определенное количество животных, Затем через 24 ч поле псрееивки у трех из первичных животных проводили измерение рН в опухолевой лапе и в здоровой вышеуказанным методом. По окончании измерения этих животных забивали. Следующие измерения проводили на 5 день после перевивки 3 мыши, взятые из оставшегося количества перевитых животных, усыпляли нембуталом и определяли у них рН в опухоли и здоровой лапе таким же 5 10 15 20 40 45 50 образом как и ранее, После окончания измерения этих животных тоже забивали.На фиг. 1 и 2 приведены кривые, отображающие изменение величины рН от времени (по дням) в зависимости от развития опухолевого процесса: Асцитная карцинома Эрлиха - фиг. 1 и саркома ОИБ- фиг. 2.На оси абсцисс дополнительно указано и количество животных - мышей, на которых были проведены исследования, На этих же рисунках приведена кривая (пунктиром), отображающая изменение величины рН в здоровой ткани (левого бедра) опухоленосителя.Из рисунков видно, что в начале значения рН в пораженной лапке снижается, т,е, идет процесс сильного закисления, Затем величина рН достигает минимального значения и в дальнейшем растет в сторону защелачивания. Кривая изменения рН нормальной ткани показывает зависимость ее характера от кривой ацидограммы опухолевой ткани, а также от агрессивности использованного штамма опухоли. У опухоленосителей ОИБ(фиг. 2) как в опухоли, так и в нормальной ткани процесс закисления происходит во времени и сильнее, чегл у опухоленосителей АКЭ, Из фиг. видно также, что и стремление к защелачиванию в обеих тканях у опухоленосителей О И Бпроисходит быстрее, т.е. раньше, чем у опухоленосителей АКЭ. Подобным же образом отличаются эти группы по продолжительности жизни - опухоленосители АКЭ живут примерно вдвое дольше чем опухоленосители ИОБ,Кэк показали вскрытия, нэ стадии начала выщелачивания, т.е. на 20-й день поле перевивки АКЭ и на десятый день после начала роста эащелачивания в легочной ткани обнаружены единичные мелие темные точечки (фиг, 1).Перьые такие признаки в легочной ткани у опухоленосителей ОИБобнаружены на 12-й день перевивки и соответствовали третьему дню начала защелачивания опухолевой ткани (фиг. 2).Б дальнейшем, на 35-40-е дни у опухоланосителей АКЭ на 15-й день у опухоленосителей ОИБв легочной ткани были обнаружены светлые уплотнения размерами с мелкую и крупную чечевицу, которые в случае ОИБросли прогрессивнее и к 25-му дню и далее легкие полностью приобретали вид гроздьев из светлых чечевицевидных уплотнений - метастаз.При этом селезенки у опухоленосителей опережали е росте таковых у опухоленосителей ОИБ: на 20-й день рост селезенки в случае АКЭ было в 5,8 раз больше, чем в2001400 Таким образом, главным признаком (56) Радиоизотопная диагностика в онраннего обнаружения метастаэирования кологии. Киев, "Здоровье", 1981.20 формула изобрете н и я ,СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ ОпухОлей, включающий лабораторно-инструментальное обследование, отличающийся тем, что, с целью ранней диагностики, лабораторным животным предварительно прививают опухоль, затем в динамике росОЫггйо 4 ХРр .,нцбепн фас ( контрольной группе животных (90 мг), а на 35-й день - в 10,1 раэ и в дальнейшем увеличение селеэенкл продолжало расти.У опухоленосителей ОИБзти данные соответствовали увеличению селезенки в 2,6 раз на 20-й день и максимум увеличения достигал на 25-28 дни, когда селезенка была увеличена в 4 раза по сравнению с контролем. В дальнейшем эта цифра уменьшалась, достигая к моменту смерти значения, немногим превышающего вдвое контрольную цифру.Во всех исследованиях, как видно иэ фиг процессам метастаэирования предшествует перегиб кривой ацидограммы в сторону эащелачивания,является рост величины рН в сторону защелачивания; хотя наиболее оптимальным является выявления роста рН от его минимального значения, т.е. от точки пере гиба кривой ацидограммы. Для этого необходимо проводить исследования как можно раньше.Таким образом, положительный эффектпредлагаемого способа заключается в бо лее точной диагностике и в воэможностиопределения метастаэирования опухолей на ранних стадиях развития процесса, а также ввиду того, что измерение рН - процесс хорошо отработанный, имеет место как со кращение трудоемкости способа, так и выполнение в щадящем режиме. та опухоли вводят электрод в область опухоли и в симметричную область здоровой 25 ткани и измеряют рН окружающей среды вдинамике и при изменении этого показателя в сторону защелачивания судят о развитии метастазов.2001400 в,г 4 о мсьВойиь иг ктор В, П едак Заказ 3126 Тираж Подписно НПО "Поиск" Роспатента113035, Москва. Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 10 Составитель О,Абакаро