Способ получения 16, 17-ацетальзамещенных прегнан-21овой кислоты в виде их стереоизомеров

д 1, ,. Чщ З 0 ВРК ИСАЯ Е); Пер Туре Андерсьссон(5 Ц; Ральф ПенТален(ЬЕ); Ян Вильям Ия 161 17 АЦЕН- ОВОЙ КИСПИЗОМЕРОВ Ьфф ОтО 3 сОВетскихСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИКОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ ССС(72) Пол Хок н Андерссонсон(ЗЕ); Бенгт Ингмар Аксенар Браттсанд(ЗЕ); Бро АрнТрофаст(ЗЕ)Предметом настоящего изобретения является способ получения 16,17-ацетальзамещенных прогнан-оной кислоты общей формулы СООР 151 Ф С=О 3 С СН 2 СН С 1-1100 обладающих ценными фармакологическими свойствам. 15Целью изобретения является созданиеновых глюкокортикостероидов, обладающих большой противовоспалительной активностью при местном применении и низкой глюкокортикоидной системной ак тивностью в сравнении с известным аналогом подобного действия - будезонидом,Изобретение иллюстрируется примерами. В приведенных примерах в препаративных хроматографических исследованиях 25 применяется скорость потока, равная 2,5 мл/см ч, Молекулярные веса во всех примерах определяются при помощи электронной ударной масс-спектрометрии, а температуры плавления определяются при З 0 помощи микроскопа для определения температуры плавления 1 е 1 тз ЧЧе 1 г 1 ег, Все анализы высокоэффективной жидкостной хроматографии выполнялись на колонке И/атегз рВопдарак Св(300 3,9 мм для внут реннего диаметра) со скоростью потока 1,0 мл/мин и соотношением этанола и воды 50,50 и 60;40 в качестве подвижной фазы, если нет специального указания.П р и м е р 1. Раствор 0,18 г ацетата 40 медив 100 мл метанола добавляют к раствору 0,825 г (22 В)-1 ба, 17 а -бутилидендиоксиа, 9 а -дифторф 21-диоксипрегнан,4-диен,20-диона в 50 мл метанола, Воздух барботирует через реак ционную смесь в течение 40 мин при комнатной температуре. Большую часть метанола удаляют, а остаток растворяют в 150 мл метиленхлорида, промывают 10- ным водным раствором хлористого аммо ния и водой, а затем сушат, Остаток после выпаривания осаждают из смеси метиленхлорида и петролейного эфира, в результате чего получают ОЯ 37 г (22 й)-16 а, 17 а-утилидендиоксиа, 9 а -дифтор,В -окси,20- диоксопрегнан.4-диен-ал-метилполуа цеталя, Чистота, определенная посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии, равна 98,5%. 100 мг этого альдегида растворяют в 1,25 мл диметилфторамида. К этому раствору добавляют цианистый калий(13 мг), окись марганца (И) (175 мг), метанол (0,5 мл) и концентрированную уксусную кис:оту (0,1 мл), после чего реакционную смесь геремешивают в течение 50 мин при комнатной температуре. Окись марганца (1 Ч) удаляют фильтрованием и к фильтрату добавляют 25 мл метиленхлорида. Этот раствор промывают 60-ным водным раствором карбоната калия и водой, После высушивания растворители выпаривают и остаток рекристаллиэуют из смеси ацетона и воды с выходом 66 мг метил (22 й)-16 а, 17 а -бутилидендиокси-б а, 9 а -дифторф -окси,20-диоксопрегнан,4-диен-оата. Чистота, определенная при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии, равна 94,70. Температура плавления 225-236 С, а)0 = +72,0 С = =0,400; СН 2 С 12, Молекулярный вес равен 494,П р и м е р 2, Ацетат меди (1) (0,5 г) добавляют к раствору 1 г (22 й)-16 а, 17 а -бутилидендиоксиа, 9 а -дифторф 21- диоксипрегнан,4-диен,20-диона в 100 мл метанола. Эту смесь перемешивают в течение 3-х дней при комнатной температуре, В течение 3-х ч вводят кислород, после чего эту смесь перемешивают еще на протяжении 8 дней. Растворитель выпаривают и остаток растворяют в 300 мл метиленхлорида, промывают 4 х 25 мл 10;ь-ным раствором гидроокиси аммония, 2 х 25 мл воды, сушат и выпаривают. Остаток очищают посредством хроматографии на колонке из сефадекса Н(72 6,3 см) с использованием хлороформа в качестве подвижной фазы, Фракции 2550-3000 мл (А) и 3150-3825 мл (В) собирают и выпаривают, Из фракции А получают 102 мг твердого вещества, идентифицированного как метил-(22 В)-16 а, 17 а -бугилидендиокси-б а, 9 а -дифторр 3 -окси,20-ди оксо и регна н,4-див н-о ат, и из фракции В получают 586 мг метил-(228)- 1 ба, 17 а -бутилидендиоксиа, 9 а -дифторф 20-диокси-З-оксопрегнан,4-диен-оата.К раствору 100 мг последнего соединения добавляют 20 мг окиси марганца (И) и реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч при комнатной температуре. Двуокись марганца (1 Ч) удаляют фильтрованием через целит и растворитель, выпаривают. Остаток растворяют в хлороформе и очищают хроматографированием ча колонке из сефадекса 1 Н(72 6,3 см) с использованием хлороформа в качестве подвижной фазы, Фракцию 2190-2560 мл собирают, 1839673выпаривают и повторно очищают хроматографированием на колонке из сефадексаН (72 6,3 см) с использованием смеси гептана, хлороформа, этанола с соотношением 20:20:1 в качестве подвижной фазы.Фракцию 5130 - 5745 мл собирают и выпаривают с выходом 35 мг метил-(22 В)-16 а, 17 а -бутилидендиоксиа, 9 а -дифтор1 В -окси.20-диоксопрегнан,4-диен-оата.Чистоту определяют посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии, и она равна 95,50 , Температура плавления 223-35 С. Молекулярный вес равен 494.П р и м е р 3. Раствор 0,45 г ацетата медив 100 мл абсолютного этанола добавляют к раствору 2,0 г (228)-16 а, 17 а -бутилидендиокси-ба, 9 а-дифтор, 21-диоксипрегнан,4-диен,20-диона в 300 мл абсолютного этанола и подвергают взаимодействию, после чего выделяют образовавшийся продукт так, как описано в примере 1, и выход составляет 2,0 г (228)-16, 17 -бутилидендиоксиа, 9 а -дифтор3-окси.20-диоксопрегнан,4-диен-ал-этил полуацеталя.Этот альдегид подвергают взаимодействию в условиях, описанных в примере 1, заменив метанол этанолом, Выход 1,77 г неочищенного продукта, который очищают на колонке из сефадекса .Н(76,5 х 6,3 см) с использованием смеси гептана, хлороформа, этанола с соотношением 20;20:1 в качестве подвижной фазы, Фракцию 2655-3150 мл собирают и выпаривают, После рекристаллизации остатка из этанола получают 1,03 г атил-(228)-16 а, 17 а-бутилидендиоксиа, 9 а -дифтор1 -окси,20-диоксопрегнан,4-диен1-оата, Чистота, определенная высокоэффективной жидкостной хроматографией, равна 9701, Температура плавления 227 - 235 С. ар =+67,2 (с = 0,180; СН 2 С 2). Молекулярный вес равен 508.П р и м е р 4. Раствор 0,35 г ацетата медив 150 мл пропанола добавляют к раствору 0,80 г (22 й)-16 а, 17 а -бутилидендиоксиа, 9 а -дифтор, 21-диоксипрегнан,4-диен,20-диона в 100 мл пропанола и подвергают взаимодействию. Образовавшийся продукт выделяют так, как описано в примере 1, при этом выход составляет 0,95 г (228)- 16 а, 17 а -бутилидендиокси-б а, 9 а -дифторф -окси,20-диоксоп регна н,4- диен-ал-пропилполуацеталя.Этот альдегид подвергают взаимодействию в условиях, описанных в примере 1, заменив метанол пропанолом, Неочищенный продукт очищают на колонке из сефадексаН(76,5 6,3 см) с использованием 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 гептана, хлороформа, этанола с соотношением 20:20:1 в качестве подвижной фазы.Фракцию 3450-3990 мл собирают и выпаривают, Остаток осаждают из сМеси метиленхлорида и петролейного эфира с выходом 0,38 г н-пропил-(228)-16 а, 17 а -бутилидендиоксиа, 9 а -дифторД -окси,20-диоксопрегнан,4-диен-оата. Чистота, определенная посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии, равна 98,9(. Температура плавления 192 - 195 С. ( ар =+66,4(с = 0,256; СН 2 С 2), Молекулярный вес 522,П р и м е р 5. Раствор 0.45 ацетата медив 150 мл метанола добавляют к раствору 1,0 г (228)-16 а, 17 а-бутилидендиокси-ба, 9 а -фтор11, 21-диоксипрегнан,4-диен,20-диона в 150 мл метанола и подвергают взаимодействию. Образовавшийся продукт выделяют так, как описано в примере 1, Этот продукт растворяют в 15 мл изопропанола и выпаривают. Эту процедуру повторяют дважды, в результате чего получают 1,2 г (22 й)-16 а, 17 а -бутилидендиокси-б а, 9 а -дифтор1 -окси,20-диоксопрегнан,4- диен-ал-пропил полуацеталя,Этот альдегид подвергают взаимодейг ствию в условиях, описанных в примере 1, заменив метанол изопропанолом, Неочищенный продукт очищают на колонке из сефадексаН(71.5 6,3 см) с использованием хлороформа в качестве подвижной фазы. Фракцию 1845-2100 мл собирают и выпаривают с образованием ,4 г твердого вещества, которое осаждаю из смеси метиленхлорида и петролейного эфира, Выход составляет 0,41 г изопропил. (228)-16 а, 17 а -бутилидендиоксиа. 9 а -дифторД -окси,20-диоксопрегнан,4- диен-оата, Чистота, определенная посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии 96,5, Тем перату ра пла еления, 198-210 С, (ар = +62,0 (0.292; СН 2 С 2), Молекулярный вес равен 522,П р и м е р б. Раствор 55 мг ацетата медив 25 мл метанола добавляют к раствору 200 мг (226)-1 ба, 17 а -бутилидендиокси-ба, 9 а -дифтор, 21-диоксипрегнан,4-диен,20-диона в 25 мл метанола и подвергают взаимодействию, Образовавшийся продукт выделяют так, как описано в примере 1, при этом выход 250 мл (228)-16 гк, 17 а -бутилидендиокси-ба, 9 а -дифтор/3-окси,20-диоксопрегна н,4-диен-ал-метилполуацеталя,Этот альдегид подвергают взаимодействию в условиях, описанных в примере 1, заменив метанол бутанолом. Неочищенный продукт очищают на колонке из сефадекса5 10 15 Н(78,5 2,5 см) с использованием смеси гептана, хлороформа, этанола с соотношением 20:20;1 в качестве подвижной фазы.Фракцию 610 - 674 мл собирают, выпаривают и осаждают из смеси метиленхлорида и петролейного эфира с образованием 76 мг бутил-(22 В)-16 а, 17 а -бутилидендиоксиа, 9 а -дифторР -окси,20-диоксопрегнан,4-дие н-оата.Фармакология,Противовоспалительный эффект, Избирательность в отношении противо- воспалительного действия на месте применения в легких было исследовано в моделирующей системе у крысы после внутрибронхиального введения глюкокортикостероида,Введение шариком сефадекса в легкие крыс приводит к бронхиальному и альвеолярному воспалению, Это вызывает интерстициальный отек легких, который увеличивает вес легких, поэтому воспаление можно измерять в виде увеличения веса легких цо сравнению с контрольной группой, которой было произведено вливание носителя. Образованию отека легких можно противодействовать путем предварительного лечения глюкокортикостероидами, предпочтительно в результате внутрибронхиального введения или ингаляции, В идеальном случае противовоспалительное действие должно быть достигнуто только в месте применения глюкокортикостериода в легких, а не за пределами этого участка, так как это при продолжительном лечении может привести к ограничивающим лечение системным побочным явлениям,Дифференциация между действием глюкокортикостероида в обработанном участке легкого и за пределами этого участка была охарактеризована в следующем протоколе испытаний. Крыс - Оаа 1 еу (225 г) слегка анестезировали простым эфиром, после чего им вводили испытуемый препарат глюкокортикостероида е объеме 0,5 мг/кг только в левую долю легкого. Это достигалось путем введения тонкого и изогнутого стального катетера через рот и трахею в левую долю легкого (выбор этого режима введения только в левую долю был подвержен отдельными экспериментами с использованием сини Эванса, в результате выполнения которых было обнаружено, что более 95% введенного вещества находилось в левой доли и менее 5% - в правой доле легкого). Через тридцать мин вводили суспензию сефадекса в обьеме 1 мл/мг в трахею непосредственно над бифуркацией, 1 ак что суспензия достигла как левой, так и 20 25 30 35 40 45 50 правой долей легких, Через двадцать часов крыс убивали, после чего у них отсекали левое и правое легкое и взвешивали отдельно. Также регистрировали вес тимуса. Контрольным группам вводили носитель вместо глюкокортикостероидного препарата и физиологический раствор вместо суспензии сефадекса для определения веса, не защищенного препаратом отека под действием сефадекса, и веса нормального легкого. Для каждого глюкокортикосте роидного и репарата испытывали. по крайней мере, 3 дозы в диапазоне 0,01-10 мг/кг и в отношении каждой 6 параллелей/дозу, Глюкокортикостероиды суспендировали в носителе СМС-Ка 0,75%, твине 80 0,04% и 0,7% КаС, добавляемой до 100%,При строго локальном противовоспалительном действии в случае заболеваний дыхательных путей идеальным профилем соединения является такой профиль, который должен противодействовать воспалению в подвергаемой локальному лечению левой доли легкого, а не правой доли легкого, куда сначала попадает глюкокортикостероид по большому кругу кровообращения (после поглощения из левого легкого), Соот. ношение между требуемой средней эффективной дозой (уменьшающей отек на 50%) в правой и левой долях легкого может использоваться в качестве параметра для оценки избирательной активности на месте применения. Для идеального глюкокортикостероида это соотношение избирательности должно быть высоким.Результаты выполненных испытаний приведены в таблице, где в верхней части представлены действия достигаемые ранее известными типами глюкокортикостероидов. Будезонид не обеспечивает какой-либо избирательности для места применения в легком, так как требуемая среднля эффективная доза для левой и правой долей легкого была почти одинаковой (соотношение избирательности 1,5), В случае самой высокой испытанной дозы (0,3 мг/кг) будесонид уменьшает вес тимуса на 22% (р0,01). Ранее известный глюкокортикостериоид ГСВ достигает некоторой избирательности, так как уменьшение отека правой доли легкого требует в 2 - 3 раза большей дозы по сравнению с необходимой дозой для торможения отека левого легкого,Новые соединения по этому изобретению характеризуются гораздо лучшей избирательностью в отношении активности,связанной с подвергнутой местному лечению левой доли легкого. Соотношение избирательности достигает 6 или даже большего1839 б 73 10 числа величин. С помощью этих соединений можно препятствовать развитию отека легкого. по меньшей мере, на 60 без какого- либо значительного влияния на отек правой доли легкого, При дозе 10 мг/кг соединения в соответствии с примерами 1 и 5 вообще не влияют на вес тимуса, в то время как соединение по примеру 3 при той же дозе вызыДействия испытанных глюкокортикостероидов в модели сефадекса. Результаты приведены по отношению к соответствующей контрольной группе, которой вводился сефадекс.Средняя эффективнаяуменьшения отека на 50%,треб да, необходимая для я доза глюкокортикос Формула изобретенияСпособ получения 1 б, 17-ацетальзамещенных прегнан-оновой кислоты общей ормулы 1 К СН н нс где В 1 предразветвленйся тем, чтогида форму тствии циэзначени рректор Е. Папп Редакт ред М.Моргента Тираж Подписн НПО "Поиск" Роспатента 5, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 аказ 34 иэводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 1 в виде их стереоизомеров ставляет прямолинейный и ный С 1 - С 4-алкил, отличаю осуществляют окисление ал лы вает незначительное уменьшение веса тимуса (на 15 оь, р0,05).Новые соединения обладают более высокой противовоспалительной активностью на 5 месте применения значение средней эффективной дозы в левой доле легкого 5 мг/кг) по сравнению с низкой активностью, продемонстрированной для препарата РСВ (10 мг/кг). виде его полуацеталя в при ид-ионов и спирта формулый 10 Н,е В 1 имеет вышеуказанные