Способ получения пищевого пепсина

45 50 55 Изобретение относится к способам получения пищевого пепсина из слизистой оболочки крупного рогатого скота и может быть использовано при производстве молокосвертывающих ферментов (МСФ) для сыроделия, в молочной промышленности, а также в медицине,Целью изобретения является улучшение качества пепсина и повышение выхода.П р и м е р 1. Замороженную слизистую оболочку сычугов КРС в количестве 100 кг измельчают на волчке с диаметром решетки 5 мм, Полученное сырье заливают 100 л раствора соляной кислоты (из расчета 1 л концентрированной соляной кислоты плотностью 1,19 на 100 кг сырья) при рН 3,7, обрабатывают в течение 45 мин при температуре 43 С при постоянном перемешивании. после чего в смесь добавляют 325 л буферного раствора 0,1 н. ацетатного буфера, рН 5,3, консервант (бензоат натрия) до 1 о -ной концентрации, перемешивают в течение 17 мин,. экстрагируют в течение 2,7 ч, после этого сифонируют прозрачную часть, затем заливают буферным раствором и повторяют экстракцию при тех же параметрах в течение 3,0 ч.Отсифонированную жидкость часть и И экстрактов через промежуточную емкость подают на сепаратор и сепарируют при 5000 об/мин. Отсепарированный экстракт подают на фильтр-пресс и фильтруют через картон для фильтрации марки КО или фильтрующие пластины марки Фили КФО. Давление в процессе фильтрации не должно превышать 150 КПа. Отфильтрованный экстракт поступает в накопительную емкость для ультрафильтрации. Из накопительной емкости экстракт подают питающим насосом в ультрафильтрационную установку, При осуществлении способа использована плоскорамная ультрафильтрационная установка, укомплектованная модулями А 1 - ОУС (тип мембран "Владипор" марки УПМ). Поднимают давление в установке до 0,1-0.15 МПа и переходят на рабочий цикл ультрафильтрации,Экстракт проходит последовательно первый и последующий контуры установки. После того как весь. экстракт подан в установку, ультрафильтратом вытесняют ультра- концентрат в последний контур,Для диафильтрации в последний контур подают 0,3-0,6%-ный раствор хлористого кальция одновременно с началом ультра. фильтрации. Диафильтрация используется для очистки от низкомолекулярных белков и полипептидов. В результате ультрафильтрации экстракт концентрируется в 10 - 50 раз 5 10 15 20 25 30 35 ф 40(концентрация говяжьего пепсина 20 в 1 тысяч условных единиц по молокосвертывающей активности), содержание сухих веществ - не более 207,.Ультраконцен 1 рат сливают из последнего контура в емкость и подают на очистку на фильтр-пресс (в качестве фильтрующего материала используют картон марки КО и КФО).В ультраконцентрат добавляют не более 15 хлористого натрия к обьему, размешивают, разливают слоем 6-15 мм на противни. Затем проводят процесс сублимационной сушки. замораживают при температуре замороженного слоя от -40 до -25 С и сухого слоя не выше 40 С до достижения в разных точках продукта температуры от 30 до 35 С, Сухой концентрат измельчают в шаровой мельнице, просеивают через сито с капроновыми сетками, имеющими 400-600 отверстий на 1 см,Нормализацию (доведение до стандартной активности 100 тыс, условных единиц) производят смешиванием с наполни 1 елем - сухой, измельченной, просеянной солью - в смесителе.Собранный в процессе ультрафильтрации е емкости с водяной рубашкой (температура воды 15-20 С) фильтрат (600-700 л) используют повторно. Для этой цели после кислотной обработки сырья для экстрэкции вместо буфера добавляют фильтрат. а недостающую часть (300-400 л) восполняют 0,1 н, ацетатным буфером с рН 5,5,П р и м е р 2. Замороженную слизистую оболочку сычугов КРС, в количестве 100 кг измельчают на волчке с диаметром решетки 5 мм, Полученное сырье заливают 100 л раствора соляной кислоты (из расчета 1 л концентрированной соляной кислоты плотностью 1,19 н 100 кг сырья) при рН 3,1 и обрабатывают в течение 25 мин при температуре 40 С и постоянном перемешивании, после чего в смесь добавляют 200 л буферного раствора с рН 5,0, консервант (бензоат натрия до 0,5 концентрации), перемешивают в течение 15 мин и экстрагируют в течение 2,5 ч. Жидкую часть экстракта сифонируют, к оставшейся части добавляют 200 л буферного раствора с рН 5.0 и экстракцию повторяют, Жидкую часть экстракта сепарируют, фильтруют через специальные фильтрующие материалы, концентрируют ультрафильтрацией, концентрат очищают фильтрацией, сушат, как указано в примере 1. Сухой концентрат измельчают. просеивают, далее смешивают с наполнителем до получения стандартной активности препарата. Выход пепсина от 100 кг сырья состав 1834290ляет 4,5 кг порошка стандартной активности, т,е, 4,5.П р и м е р 3. Замороженную слизистую оболочку сычугов КРС, в количестве 100 кг измельчают на волчке с диаметром решетки 5 мм, полученное сырье заливают 100 л раствора соляной кислоты (из расчета 1 л концентрированной соляной кислоты плотностью 1,19 из 100 кг сырья) при рН 4,0 и обрабатывают в течение 60 мин при температуре 45 С и постоянном перемешивании, после чего в смесь добавляют 450 л буферного раствора с рН 5,5. добавляют консервант (бензоат натрия) до концентрации 2, перемешивают в течение 35 мин и зкстрагируют в течение 3,5 ч.Жидкую часть экстрагируют, к оставшейся части добавляют 450 л буферного раствора, повторно экстрагируют в течение 3,5 ч при тех же параметрах, сифонируют, фильтруют, сепарируют через специальные фильтрующие материалы, концентрируют ультрафильтрацией, концентрат очищают фильтрацией. сушат, как в примере 1,Сухой концентрат измельчают, просеивают, смешивают с наполнителем до получения стандартной активности препарата. Выход пепсина от 100 кг сырья составляет 4,9 кг(4,9 У,),П р и м е р 4, Замороженную слизистую оболочку сычугов КРС, в количестве 100 кг измельчают на волчке с диаметром решетки 5 мм. Полученное сырье заливают 100 л раствора соляной кислоты (из расчета 1,6 л концентрированной соляной кислоты на 100 кг сырья), рН раствора составляет 3,0, добавляют бензоат натрия до концентрации 0,2 , затем 100 л буферного раствора, рН 4.0 (соотношение сырье:экстрагирующая смесь равно 1:2), перемешивают в течение 15 мин и экстрагируют в течение 2,4 ч, Жидкую часть экстрагируют, к оставшейся добавляют 100 л и экстракцию повторяют, Обработка экстракта, концентрирование и сушку ведут, как в примере 1 - 3. Выход пепсина составляет 3,5, Основные потери происходят на стадии экстракции и ультрафильтрации. Отмечена повышенная бактериальная обсемененность продукта,П р и м е р 5, Замороженную слизистую оболочку сычугов, в количестве 50 кг дефростируют и измельчают, как в примерах 1-4, Полученное сырье заливают 50 л раствора соляной кислоты (из расчета 0,6 л концентрированной соляной кислоты на 100 кг сырья), рН раствора составляет 4,5, перемешивают 15 мин, добавляют бенэоат натрия до 1 ф(,-ной концентрации, выдерживают в течение 60 мин, затем добавляют 250 л буферного раствора при рН 5,8, перемешива при повышенной температуре, в результате чего происходит частичная денатурация балластных веществ слизистой оболочки КРС, одновременно активизируются натив ные ферменты тканей желудка (катепсины идр. тканевые протеазы), оба эти параметра (рН и температура) создают оптимальные условия для зкстракции пепсина из тканей слизистой оболочки сычуга КРС. При про должительности выдержки менее 25 мин де-натурация балластных белков происходит недостаточно и затрудняется дальнейшая технологическая обработка экстракта (очистка), при продолжительности более 60 мин возможна частичная инактивация тканевых 51015 2025303540 ют 25 - 30 мин и экстрагирут в течение 3 ч, Сифонирование, очистку и концентрирование экстракта осуществляют, как в примерах 1 - 4, Выход составил 3,4,. Основные потери происходят на этапах экстракции и фильтрования,П р и м е р 6. Замороженную слизистую оболочку сычугов КРС, в количестве 50 кг дефростируют, измельчают, как в примерах 1 - 5, добавляют 50 л раствора соляной кислоты (из расчета 1 л концентрированной кислоты на 100 кг сырья), перемешивают в течение 15 мин, оН расгвора 3,7, добавляют бензоат натрия до 0,5(, перемешивают в течение 15 мин, нагревают смесь до 37 С и далее ведут обработку, как в примерах 1 - 5, но экстракцию проводят при температуре 37 С. Экстракт обрабатывают, как в примерах 1-4, Выход продукта 4.,0;ь,П р и м е р 7. Замороженную слизистуюоболочку в количестве 50 кг дефростируют и подвергают технологической обработке, как в примерах 1 - 4. Однако кислотную обработку и экстракцию проводят при 45 С, Экстракт обрабатывают при тех же условиях,что и в примере 5,Выход продукта 3,6. Отмечается снижение скорости фильтрации, по ери фермента при фильтрации иультрафильтрации,Показатели пепсина, полученного по предлагаемому и извести -му методам, приведены в таблице,Предлагаемый способ получения пепсина позволяет улучшить качество готовогопродукта эа счет снижения количества нерастворимого осадка до 0,5 - 1,0; в готовомпрепарате и повысить выход до 12 - 33 посравнению с традиционным.Анализ результатов опытов ао примерам 1-3 показывает, что на ускорение процесса и подготовку экстракта для дальнейшей технологической обработки влияет кратковременная обработка сырья раствором соляной кислоты при рН 3,5 - 4.0,1834290 эобретения л ИЯ ПИЩЕВОГО вающий измельки сычугов крупислотный гидроэтапа, отделение части экстракта, ку, иэмельчение стандартизацию,с целью улучпротеиназ и инактивация пепсина (так какданный диапазон рН является зоной нестабильности для фермента), что снижает выход пепсина при экстракции,Проведение экстракции буферным раствором рН 5,0-5,5 позволяет проводить процесс в зоне стабильности фермента, а такжесоздаются условия для постепенного превращения предшественника пепсина - пепсиногена - в пепсин, что позволяет 10существенно сократить автолитические процессы (процессы, связанные с самоперевариванием фермента) и тем самым увеличитьвыход пепси на при экстракции. При соотношении сырья и жидкости, равном 1;5-1:10, снижаются потери фермента. Так, при соотношениисырья и жидкости менее, чем 1:5 потери могутсоставлять более 10, при соотношении болеечем 1:10 значительно возрастают потери пепсина при очистке и ультрафильтрации за счет 20продолжительной обработки больших обьемов экстракта,Кроме того, при соотношении сырья ижидкости менее 1;5 замедляется процессразделения фаэ, а при превышении 1:10 увеличивается продолжительность разделения СПОСОБ ПОЛУЧЕН ПЕПСИ НА, предусматри чение слизистой оболоч ного рогатого скота, к лиз, экстракцию в два и фильтрацию жидкой концентрирование, суш сухого препарата и его отличающийся тем, что фаз и отсутствует четкая граница их раздела. Выдержка раствора дважды после добавления экстрагента в течение 2,5 - 3,5 ч дает наибольший выход фермента (5,0) и эффективна при разделении фаэ отстаиванием,С целью улучшения качества фермента жидкая часть отделяется от твердой сепарированием и фильтрованием, концентрируе- ся и дополнительно очищается ультрафильтрацией, концентрат сушат в сублимационной сушилке, смешивают с наполнителем, нормализуют, упаковывают.Результаты, полученные в промерах, приведены в таблице. Из таблицы видно, что предлагаемый способ гарантирует выход пепсина на стадии отделения фермента от экстракта с минимальными потерями (до 10) по сравнению с известными. Кроме того, способ позволяет экономить в 10 раэ поваренную соль по сравнению с существующим способом, решает вопросы охраны окружающей среды, так как фильтрат, получаемый на. стадии ул ьтрафил ьтрации повторно используется в качестве экстрагирующей жидкости при экстракции. шения качества препарата и увеличения его выхода, кислотный гидролиз осуществляют соляной кислотой при рН 3,1 4,0 и температуре 40 - 45 С в течение 25 - 60 мин, экстракцию на первом этапе проводят ацетатным буфером прирН 5,0 - 5,5 в присутствии бензоата натрия в концентрации 0,5 - 2,0, а на втором этапе - тем же буфером или ультрафильтратом, полученным при кон10 1834290 Составитель Н. ЧаплинаРедактор В. Трубченко Техред М.Моргентал Корректор Н. Король Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Заказ 1539 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 центрировании экстракта, концентриро-вание ведут ультрафильтрацией, при этом суммарное соотношение раствора кислоты и экстрагирующей жидкости к сырью устанавливают из расчета 5 - 101.