Способ микроразмножения шафрана посевного (crocus sатivus l. )

(51)5 А 01 Н 4/00 ИЗ СА ПАТЕНТ ЗМНОЖЕНИЯ госцз за 1 чоз 1,) ология, микрощность изобревиц помещают ивируют до опосят на другие вая до получетении иметики и с, Д.Д.Ахуновстений имдемии Наукшафрана. - Баку, 1979 ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(71) Институт физиологии раК,А.Тимирязева и Институт генлекции АН АЗССР(56) Килани А.Н, ВыращиваниеИзд-во Азербайджанской ССР,с. 1-24 Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу микроразмножения шафрана посевного с помощью культуры тканип чахло, который может быть использован для нужд фармацевтической, пищевой,парфомерной, и медицинской отраслей промышленности.Цель изобретения - увеличение процента образования клубнелуковиц и, следовательно, увеличение коэффициента размножения,Поставленная цель достигается новым способом микроразмножения шафрана посевного (Сгосцз за 1 вцз) с использованием клубнелуковиц, причем клубнелуковицу разрезают на кусочки размером 0,7-2,0 см в ширину и 1,0-2,0 см в высоту, помещают на питательную среду 1, содержащую минеральные соли по Мурасиге и Скуга, витамины, мг/л; никотиновая кислота 1; тиамин 10, пиридоксин 1; аминокислоты, мг/л; глицин 10; аденин 10; тирозин 10; ийозит 100; фолиевая кислота 5; гидролизат казеина 5; агар 70, которая дополнительно содержит регуляторы роста мг/л; гибберелловая кисЖ 1807844 АЗ(54) СПОСОБ МИКРОРА ШАФРАНА ПОСЕВНОГО (С (57) Использование; биотехн размножение растений. Су тения; сегменты клубнелуко на питательную среду, культ ределенной стадии и перен среды и субстраты, выращи ния растений. 2 табл., 7 ил,лота 0,1-5,0; 6-бензиаминопурин 0,1-10,0 и глюкоза 20 г, затем культивируют в течение ф 0,5-2,0 мес, потом переносят на питательную среду 2, содержащую минеральные соли по Мурасиге и Скугу, витамины, аминокислоты, глюкозу и агар по среде 1, которая дополнительно содержит стимуляторы роста мг/л: зеатин 0,1-5,0; нафтилуксусная кислота 0,1-1,0, культивируют до образования побегов в основании и появлением клубнелуковичек, покрытых сухими че- Оф шуями, отделяют эти клубнелуковички и С помещают в среду 3, состоящую из половинной нормы солей по Мурасиге и Скугу, вита- СО минов, аминокислот, глюкозы и агара по средам 1 или 2, индолилуксусную кислоту 0,5-5,5 мг/л, культивируют до появления корней и побегов, помещают в раствор, стимулирующий корнеобразование, выдерживают во влажном субстрате во влажной Ы камере.П р и м е р 1, Клубнелуковицу разрезают на кусочки размером 0,7 см в ширину и 1 см в высоту, помещают в стерильные условия на питательную среду 1, состоящую из минеральных солей по Мурасиге и Скугу, макро- соли г/л; ИН 4 ИОз 33; КИОз 38; СаС 2 2 Н 20 8-8; МцЯ 04 7 Н 20 7-4; микросоли мг/л: НЗВОз 620, Мп 304 Н 20 2230; Еп 304 х 4 Н 20 х 680,КЛ 83; йа 2 М 04 2 Н 20 25; СцЯ 04 5 Н 20 2-5; СоС 12 6 Н 20 2-5; витамины мг/л. никотиновая кислота 1 тиамин 10; пиридоксин 1; аминокислоты,мг/л: глицин 10; аденин 10; тирозин 10; инозит 100; фолиевая кислота 5; гидролизат казеина 500 мг/л: глюкоза 20 г/л агар 70 г/л, стимуляторы роста: гибберелловая кислота 0,1 мг/л;6-бензиламинопурин 0,1 мг/л, культивируют 0,5 мес до почернения эксплантов и среды при освещенности 4 тыс, лкс. и влажности 80 о . Затем экспланты пересаживают на новую питательную среду 2, содержащую минеральные соли, витамины, аминокислоты, глюкозу и агар, как в среде 1, и дополнительно зеатин 0,1 мг/л, нафтилуксусную кислоту 0,1 мг/л. Через 2-3 недели из спящих боковых почек, расположенных на сегментах, появляются побеги (фиг. 1) и через месяц в основании их происходит утолщение (фиг, 2), 2-3 месяца формируется в клубнелуковичку(фиг, 3), которая в свою очередь покрывается сухими чешуями фиг, 4), На этих клубнелуковичках вновь образуются побеги, которые снова утолщаются и дают новые клубнелуковички (фиг, 5). Затем отделяют клубнелуковички одну от другой и пересаживают на среду 3, состоящую из половинной нормы минеральных солей по Мурасиге и Скугу, витаминов, аминокислот, глюкозы, агара по среде 1 или 2, индолилуксусную кислоту 3,0 мг/л, культивируют 2 мес до образования корней и побегов (фиг, 6), отмывают от агара, выдерживают в воде при комнатной температуре, затем в растворе 0,4 огетероауксина и высаживают во влажный песок при 25 С и освещенности 4-5 тыс,лкс, накрыв стеклянным колпаком на сутки, Растение готоводля посадки в открытый грунт,П р и м е р 2, Клубнелуковицу разрезают на сегменты размером 1,5 см в ширину и 1,5 см в высоту, далее проводят аналогично, однако среда 1 дополнительно содержит гибберелловую кислоту 3,0 мг/л, 6-бензиламинопурин 5,0 мг/л, глюкозу 25 мг/л, культивируют 1,0 мес, среда 2 дополнительно содержит зеатин 3,0 мг/л, нафтилуксусную кислоту 0,8 мг/л, а среда 3-индолилуксусную кислоту 3,0 мг/л.П р и м е р 3. Клубнелуковицу разрезают на сегменты размером 2 мс в ширину и 2 см в высоту, далее проводят аналогично примеру 1, однако среда 1 дополнительно содержит гибберелловую кислоту 5,0 мг/л, 6-бензила 5 10 15 20 25 3035 40 45 50 55 минопурин 10 мг/л, глюкозу 30 мг/л, культивируют 2,0 мес, среда 2 дополнительно содержит зеатин 5,0 мг/л, нафтилуксусную кислоту 1,0 мг/л, а среда 3-индолилуксусную кислоту 5,5 мг/л.Результаты представлены на фиг. 1-7, Фиг, 1 - через 2-3 недели из спящих почек, расположенных на эксплантах, появились побеги, которые зеленеют.Фиг. 2 - утолщения основания побега.фиг. 3 - образовавшаяся клубнелуковичка в основании побега,Фиг. 4 - образовавшиеся клубнелуковички одеваются сухими чешуями.фиг. 5 - на образовавшейся клубнелуковичке появляется побег, который утолщается и формирует новую клубнелуковичку.Фиг. 6 - клубнелуковички с корнями и побегами после обработки в растворе гетероауксина и выдерживания во влажной камере,Фиг, 7 - график зависимости количества образовывающихся клубнелуковичек от времени года проведения способа.В табл. 1 приведены данные влияния различных сахаров на образование клубнелуковичек; в табл. 2 - влияние различных фитогормонов на образование клубнелуковичек в среде 1.Как следует из примеров, в результате заявленного способа из одной клубнелуковицы можно получить до 1000 растений в год, т,е, коэффициент размножения равен 1;1000, В случае проведения способа в марте-мае(фиг. 7) месяце коэффициент размножения может достигнуть 1:1200,Формула изобретения Способ микроразмножения шафрана посевного (Сгосцз забчоз Е,), включающий получение растений из сегментов клубнелуковиц,отличающийся тем,чтосегменты клубнелуковиц размером 0,7-2,0 см в ширину и 1,0-2,0 см в высоту помещают на питательную среду 1, содержащую минеральные соли по Мурасиге-Скугу, 1 мг/л никотиновой кислоты,10 мг/л тиамина, 1 мг/л пиридоксина, 10 мг/л глицина, 10 мг/л аденина, 10 мг/л тирозина, 100 мг/л инозита, 5 мг/л фолиевой кислоты, 500 мг/л гидролизата казеина, 70 мг/л агара, 0,1-5,0 мг/л гибберелловой кислоты, 0,1-10,0 мг/л бензиламинопурина и 20-30 г/л глюкозы, культивируют в течение 0,5-2,0 месяцев, затем переносят на питательную среду 2, содержащую все компоненты среды 1 и дополнительно 0,1-5,0 мг/л зеатина, 0,1-1,0 мг/л нафтилуксусной кислоты, культивируют до образования побегов в основании и появления клубнелуковичек, покрытых сухими чешуями, отделяют клубнелуковички и1807844 Таблица 1 абл и ца 2 переносят на среду 3, содержащую половинный набор компонентов среды 1 по концентрации и дополнительно 0,5-5,5 мг/л индолилуксусной кисоты, культивируют до появления корней и побегов, помещают в раствор, стимулирующий корнеобразование, и выдерживают во влажном субстрате во влажной камере до формирования нормальных растений,1807844 й У ССЯЧИ едакт аказ 1386 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 изводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 1016 ю4 Рм 26 Составитель Л,ЧучкинаТехред М,Моргентал Корректор Л,Пилипенко