Способ количественного определения пантотеновой кислоты в жидкой питательной среде

Союз СоветскиСоцмапнстическихРеспублик Оп ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ1 699013 ЖФ(23) Приоритет до делам нэобретеннй н открьпнй(53) УДК 576.8. ,093,1(088,8) Дата опубликования описания 25.11,79(54) СГОГОБ КОЛИЧЕГТВЕННОГО ОП 1 ЕДЕЛЕНИЯ ПАЕ 1 ТОТЕНОВОЙ 1 КИСЛОТЫ В ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛБНОЙ СРЕДЕ Изобретение относится к области медицины,а именно к микробиологии, Известен способ количественного определенияпантотеновой кислоты в жидкой питательной среде путем внесения в цее тест. культуры с5 последующим инкубированием и опрсделецием количества пацтотеновой кислоты по мутности среды 113.Чувствительность способа составляет10-з10Однако известный способ це обеспечивает высокой точности,Целью изобретения является иовьппецие точности способа.Это достигается тем, что в качестве тест15 культуры Используют штам.;1 1 егыпа реэтэ Еч Рап 1.Штамм 1 егэ 1 па реэтэ ЕЧ Рап 1 получен из вакиинного штамма ЕЧ после воздействия нит. розометилмочевиной из числа вариантов, устойчивых к налидиксовой кислоте, и обладает стабильно высокой избирательной реакцией на этот витамин. Штамм 1 егыпа реэтэ ЕЧ Рап 1 депонирован в коллекции Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научно-исслелова.тельского института Микроб и характе 1 гизуется следующими культуральцо-морфологическими и физиологобиохимическцми признаками.Культурально-морфологические признаки.Полиморфные, грамнегативцые палочки с закругленными концами, длиной 1-2 мкм и ши.риной 0,3 - 0,5 мкм. Жгутиков цс имеет. спорне образует. Бульон Хоттицгсра, хлопьсвидныйосадок, бульон прозрачный. Асар Хоттицгсра.Колонии диаметром 0,5 - 2 мм с приподнять мзернистым центром, окрашенные в сероватыйцвет и имеющие фестончатую периферическуюзону,Физиолого. биохимические свойства,Оптимум роста 26 - 28 Г. Устанавливает глюкозу, мальтозу, маннит, арабицозу, галактозу,маннозу. Восстанавливает цитриты. Желатицуне разрушает, Индол не обрачст. Сероводородвыделяет. Продуцирует пестиццц 1. ГрелаДжексона - Берроуза с темином. Образует цспигментированные колонии.Авирулентец для белых мьццей при подкожном введении от 10 до 10 микробць 1 х клег вСоставитель Е, Дубовицкая Техрсд Ц,Бабурка Корректор Н, Задерновская Редактор О. Степина Тираж 526 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб д. 4/5Заказ 7448/26 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 36990 ток и для морских свинок до 10 микробных клеток.Требует для роста наличия в питательной среде метионина, фенилаланина, треонина, цистеина и патотеновой кислоты или пантотената кальция.Способ иллюстрируется следующим примером.,Для получения опытной суспензии используют 48 ч культуру, выращенную при 28 С наплотной агаровой среде, Готовят густую взвесьОв физиологическом растворе, отмывают клеткицентрифугированием с целью освобождения отпитательных веществ, вновь ресуспендируют вфизиологическом растворе до концентрации2+10 микробных клеток (м,к) в 1 мл по оп. 15тическому стандарту мутности и ставят в термостат при 28 С на 3 ч для истощения внутриклеточных запасов витаминов,В качестве основной используется синтетическая среда на фосфатном буфере М/15 рН 207,1 - 7,2 (йа 2 НРОа - 66,6 г КН 2 РОа - 33,4 г,вода - 1000 мл). Непосредственно перед опытом вносят стерильно следующие компонентыв 100 мл основы: (МНа)2 80 а 20% - 0)5 мл,У 930 а ф 7 Н 20 10% - 0,25 мл, глюкоза 40%0,5 мл, раствор сульфита натрия до концентрации 0,1% и аминокислоты - метионин, треонин,фенилаланин и цистеин-в дозах 0,01 мг/мл.Готовят два параллельных ряда пробирок споследовательными десятикратными разведениями исследуемой питательной среды. Разводятдо 10основной синтетической средой без добавления лантотеновой кислоты.Для построения стандартной кривой ростатест-штамма два параллельных ряда пробирок 13заполняют по 4,5 мл основной синтетическойсреды с добавлением пантотеновой кислоты, вколичествах 10, 10, 1, 10 , 10 , 10 ,10 а мкг/мл, Затем в каждую пробиркукакв опытном, так и в стандартных рядах, вносятпо 0,5 мл истощенной суспензии тест-штамма,создавая посевную концентрацию 200 млн м.к,/мл.Посевы помещают в термостат при 28 С.После выдерживания посевов в течение 1 сутпроизводят ежедневное определение интенсивнос.ти роста тест-штамма путем измерения мутности среды с помощью нефелометра,Использование изобретения позволяет определить количество пантотеновой кислоты в пределах 10 а мкг/мл. Формула изобретения Способ количественного определения панто. теновой кислоты в жидкой питательной среде путем внесения в неЕ тест-культуры с последующим инкубированием и определением количест. ва пантотеновой кислоты по мутности среды, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве тест- культуры используют штамм 1 егяп 1 а рейша ЕЧ Рап 1. Источники информации,принятые во внимание при зкспертизе 1. Одинцова Е. И. Микробиологические методы определения витаминов. М 1959, 119 - 120.