Способ определения степени активности воспалительного процесса при хронических бронхитах

Сбоз СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 09) (и 54334 51)5 С 01 М 33/68 ГОСУДАРСТВЕННЫЙПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ ИПРИ ГННТ СССР МИТЕТТКРЫТИЯМ ИСА ЭОБРЕТЕНИЯ 2держащего 20 мг/мл гемоглобина в ацетатном буфере, с рНф 4,0 с добавлением 120 мг/мл мочевины. Пробирку инкубируО ют в закрытом виде 1 ч при 37 С, приливают 2,0 мл 4 Х-ного раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мин 15 мин. Контрольная проба от опытной отличается тем, что в контроле О, 1 мл супернатанта мокроты вносится в пробирку после добавления трихлоруксусной кислоты. В пробах определяют оптическую плотность при длине волны 280 нм и рассчитывают активность катепсинов по формуле А=Е/КС, где А - активность катепсинов в мокроте, выражается в нИ тирозина/ч мг белка; К - коэффициент калибровки, равный 0,42; С- концентрация белка в пробе, мг; Е - единицы экстинции, При показателях А меньше 130 нМ тирозина/чмг белка устанавливают 1 степень, 130 - 260 - 11 степень и свыше 260 - 11 степень активности воспалительного процесса, Использование изобретения позволяет назначать адекватное индивидуальное лечение и следить за его эффективностью. При этом метод имеет высокую точность - до 87-93 совпадений с известными методами, являясь простым и безопасным для больного,1 табл,(21) 4239165/28(22) 28,04,87.видетеА 61 В Целью изочност особ о тение относитс к лабораторной к медицине, иагностике, для опреде- воспалительских бронИзо а именспособа. ществляю ние т Сп раз ом Ио послещим об быть использов епени активнос и может ни абирают ч бо ых натощак ти и гомоого п сса при хронич нации ротовой поло тах АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ АКТИВНОСТИ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА ПРИ(57) Изобретение относится к медицине, в частностик лабораторной диагностике, и может быть использованодля определения степени активностивоспаления при хронических бронхитах,Целью изобретения является повьппениеточности способа. Для этого у больных хроническим бронхитом натощак забирают мокроту, гомогенизируют ее,разбавляют в 2 раза физиологическимраствором, добавляют 1%-ный раствортритона Хв количестве, равном1 /10 от объема пробы, охлаждают и .центрифугируют 20 мин при 5000 об/минВ надосадке определяют активностькатепсинов по расщеплению ими гемоглобина. Для этого к 0,1 мл супернатанта приливают 1,0 мл раствоРа, соетения является повышеген из ируют в стеклянной пробирке стефлоновым пестиком с частотой вращения 200 об/мин в течение 20 мин, Гомогенат мокроты переносят в мернуюцентрифужную пробирку, приливают равное количество охлажденного Физиоло-.гического раствора и тщательно перемешивают, Добавляют в количестве,равном 1/10 от общего гомогената,1%-ный раствор тритона Хперемешивают и оставляют в холодильникена 15 мин, а затем центрифугируют при5000 об/мин в течение 20 мин,В две пробирки (опыт и контроль)берут по 1,0 мл субстратного раствора. В опытную пробирку приливают0,1 мл (супернатанта), затем обе пробирки закрывают стеклянными пробкамии инкубируют 1 ч при 37 О С. После инкубации в обе пробирки приливают2,0 мл 4%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и в конт. роль приливают 0,1 мл надосадочнойжидкости. Центрифугируют при 253000 об/мин в течение 15 мин, Измеряют оптическую плотность в надосадкепри длине волны 280 нм. Определяютактивность катепсинов в расчете насодержание белка в йадосадочной жидкости по ФормулеЕА= -КСгде Е - единицы экстинции;К - коэффициент калибровки (К=-( -1нИ тирозина ч мг белка.Используют следующие реактивы дляопределения катепсинов,1. Субстратный раствор, 4,8 г мочевины растворяют в 6,2 мл дистиллированной воды, добавляют 800 мг гемоглобина, тщательно перемешиваютВ закрытой стеклянной посуде инкубируют2 ч при 60 С, Затем к раствору приливают 30 мл ацетатного буфера рН 4,0,2, Ацетатный буфер рН 4,0, Берут73,4 мл 1 И уксусной кислоты и приливают 50 мл 1 И едкого натра и дово цдят объем до 500 мл дистиллированной водой.П р и м е р 1. Больная В 40 лет,поступила с жалобами на кашель с от 55делением вязкой светло-зеленой мокроты около 100 мл/сут одышку при физической нагрузке. Страдает хроническимбронхитом 14 лет с ежегодными обострениями, настоящее обострение последние 3 недели. При поступлении состояние удовлетворительное, температура тела - 36,8 ОС. В легких легочныйзвук, дыхание везикулярное, с обеихсторон грубые сухие хрипы. Со стороны других органов патологии не выявлено. На рентгенограмме органов грудной клетки с обеих сторон легочныйрисунок усилен, перестроен, Фиброэныеизменения корней легких, При бронхоскопии обнаружено; слизистая оболочка бронхов обоих легких гиперемирована, рыхла, просвет бронхов сужен засчет рыхлой, отечной слизистой. Отде- .ляемое слизисто-гнойное. При спирографии изменений функции внешнего дыхания не выявлено: ИЕЛ - 3,8 л - 107%ДЖЕЛ; ИОД - 16 л - 115 Х ДЫОДр ИВЛ -61,6 л - 83% ДИВЛр ФЫЕЛ - 2,33 л,индекс Тиффно - 75%, Пневмотахометриявыдоха - 3,9 л/с, Общий анализ крови;эритроциты 4,6 "10 /л; гемоглобинФ150 г/л; лейкоциты - 7,910 ф/л; лейкоцитарная формула без изменений;СОЭ - 8 мм/ч, Биохимическое исследование крови: СРБ - отрицательный; сиаловые кислоты - 2,3 ммоль/л; серомукоид - 0,13 ед.; Фибриноген - 2,4 г/л;альбумины - 47%; глобулины - 7,7%;1, - 11,3%;- 13%;- 21%. Иммуноглобулины крови: 1 яА - 1,91 г/л; 1 ф 10,99 г/л; 1 дЕ - 13,4 г/л, Общий анализ мокроты: слизисто-гнойная, вязкаялейкоциты 30-40 в поле зрения,Общая активность катепсинов в мокроте составила 465,3 нИ тирозина ч мг белка. Клинический диагноз: хронический гнойный необструктивный бронхит в фазе обострения, 111 степень активности, Перибронхиальный пневмосклероэ. Назначенное лечение (гентамицин, санационные бронхоскопии с введением 0,1 Х-ного раствора Фурагина Р 5, пресоцил, аутогемотерапия, эуфиллин,.отхаркивающая микстура с термопсисом) принесло значительный клинический эффект; значительно уменьшился кашель, количество мокроты около 25 мл/сут., светлая, В легких исчезли сухие. хрипы. При бронхоскопии отмечена положительная динамика: значительно уменьшилась гиперемия, отечность слизистой бронхов, остается небольшое количество слизисто-гнойного отделяемого единичными мазками, Активность катепсинов мокроты уменьшилась до 88,6 нИ5 15 тирозина ч мгбелка. На 17-й день больная выписана из стационара.В данном примере наиболее информативными методами в оценке степени ак-. тивности воспаления явилась бронхоскопия и исследование катепсинов мокроты, Установление 111 степени активности воспаления в данном примере предопределило интенсивность антибактериального и противовоспалительного лечения с применением санационных бронхоскопий. Значительное улучшение состояния больной и уменьшение активности воспаления в бронхах четко коррелирует с уменьшением активности катепсинов в мокроте более, чем в 5 раз.П р и м е р 2, Больной М., 52 г поступил с жалобами на приступообразный кашель с оделением слизисто-гнойрой мокроты около 150 мл/сут, одышку в покое и при небольшой физической нагрузке временами приступообразного характера. Страдает хроническим бронхитом более 20 лет с практически ежегодными обострениями, Бронхообструктивный синдром около 8 лет, год назад диагносцированы бронхоэкстазы. Настоящее обострение в течение последних двух недель, При поступлении состояние удовлетворительное, температура тела - 36,7 С. Акроцианоэ губ, Число дыханий - 24 в 1 мин. Грудная клетка бочкообразная, перкуторно-легочный звук с коробочным оттенком, жесткое везикулярное дыхание, в большом количестве грубые и свистящие сухие хрипы на вдохе и выдохе; выход несколько удлинен. Тоны сердца приглушены, ритм правильный, частота пульса - 100 уд,/мин, артериальное давление - 170/110 мм рт,ст. Печень не пальпируется. Отеков нет. На рентгенограмме органов грудной клетки легочная ткань повышенной прозрачности, усиление и перестройка легочного рисунка по ячеистому типу. Бронхоскопия не проводилась иэ-за сопутствующей гипертонической болезни 11 Б стадии, При исследовании функции внешнего дыхания определяютая резкие изменения по обструктивному типу;МОД - 21,1 л - 210 Х ДИОД; ЖЕЛ - : 2,51 л - 63 Х ДЖЕЛ; ИВЛ - 35,2 л - 35 Х ДИВЛ; ФЖЕЛ, - 0,97 л; индекс Тиффно - 38 Х. Пневмотахометрия выдоха - 1,1 л/с, ЭКГ: синусовый ритм, отклонение электрической оси сердца впра 43345 45 50 55 10 15 20 25 30 35 40 во. Гипертрофия правого предсердия.Общий анализ крови: эритроциты -4,3 10 /л; гемоглобин - 132 г/л,лейкоциты - 4,4 ф 101/л, лечкоцитарнаяформула без изменений; СОЭ - 10 ми/ч.Биохимическое исследование крови:альбумины - 49,3 Х; глобулины: Ь -6,1 Х, Ь - 10,5 Х, 3- 14,1 Х,20,0 Х, С 1 Б , сиаловые кислоты 2,87 ммоль/л, серомукоид - 0,27 ед.:Иммуноглобулины крови: 1 яА - 0,54 гй1 яМ - О, 12 г/л; 1 дС - 20,7 г/л, Общий анализ мокроты: светло-желтая,слизистая, лейкоцитов много в полезрения.Общая активность катепсинов в мокроте составила 201,8 нМ тирозинакч мг белка.Основной клинический диагноз: хронический гнойнообструктивныи бронхитс бронхоэктазами в фазе обострения,11-я степень активности, Диффузнаяэмфизема легких, Пневмосклероз. После проведенной терапии (диоксицин,Фурагин, теофедрин, теоникол, ингаляция с эуфиллином и эфедрином, отхаркивающая микстура с термопсисом, массаж грудной клетки, кальций и эуфиллин, электрофорез на грудную клетку) самочувствие больного улучшилось:уменьшился кашель, количествомокроты - до 50 мл/сут, В легких количество сухих хрипов значительно уменьшилось, Пневмотахометрия выдоха увеличилась до 2,4 л/с. В общем анализекрови без патологии, Активность катепсинов в мокроте уменьшилась более,чем в 2 раза - до 98,4 нМ тирозинат чмгбелка. Больной выписан изстационара на 19-й день лечения,В данном клиническом примере установление 11-й степени активности воспаления на основании клинических и лабораторно-биохимиЧеских признаков предопределило менее интенсивную про" тивовоспалительную терапию, чем в предыдущем случае.П р и м е р 3. Больной С., 51 г., поступил с жалобами на кашель с мокротой светло-желтого цвета около 70 г/сут небольшие боли справа в грудной клетке, потливость, температура до 38 д С. Страдает хроническим бронхитом около 8 лет, настоящее обострение около месяца. При поступлении состояние удовлетворительное. Температура тела 37,5 С. Число дыханий - 18 в 1 мин. Грудная клетка ци.линдрическая, Перкуторно-легочный звук с коробочным оттенком, при аускультации жесткое везикулярное дыхание. Хрипов нет. Тоны сердца приглу 5 шены, ритм правильный, негрубый сис-толическМ шум на верхушке, частота пульса 62 уд,/мин, артериальное давление 115/75 мм рт.ст. Печень не ;Пальпирувтся. Отеков нет. На рентгенограмме органов грудной клетки: легочный рисунок в прикорневых зонах Перестроен с участками склероза, корни малоструктурны, справа в верхней доле ограниченный Фиброз. При исследовании Функции внешнего дыхания определяются начальные изменения по смешанному типу: ЖЕЛ - 2,95 л - 86% ДЖЕЛ; ИВЛ - 63,4 л - 74% ДМВЛ; ФЖЕЛ 2,24 л, индекс Тиффно - 76%, БронхоСкопия (на 11-й день лечения): слизистая оболочка бронхов легких обоих умеренно гиперемирована. Отделяемое Скудное светлое в бронхах обоих легких. ЭКГ - суносовый ритм, нормаль ное положение электрической оси сердца.,Общий анализ крови; эритроциты - 4.,3 ф 10 /л; гемоглобин - 140 г/л;лейкоциты - 7,510/л; лейкоцитарная формула без изменений; СОЭ - 10 мм/ч. 30 Биохимическое исследование крови: СРБ - отрицательно; сиаловые кислоты,8 ммоль/л; серомукоид 0,14 ед, Иммуноглобулины крови: 1 яА - 2,73 г/л;18 М - 0,9 г/л; 1 дС - 23,5 г/л. Общий35 анализ мокроты: светлая, вязкая, слизистая, лейкоциты 4-5 в поле/зрения, Макрофаги - 0-2, грамположительные кокки - немного, грамотрицательные палочки - умеренное количество. Общая активность катепсинов в мок,роте составила 102,3 нМ тирозина 3 кч ,мгбелка, что соответствует 1-й степени активности воспаления, Основной клинический диагноз: хронический бронхит в Фазе обострения, 1-я степень активности. Пневмосклероз. Дыхательная недостаточность 0- 1 ст. После проведенного лечения (мономицин, сульфален, бутадион, алое, отхаркивающие средства, индуктотермия на грудную клетку, массаж грудной клетки) самочувствие значительно улучшилось: жалоб нет, температура тела нормальная. В легких хрипов нет, Выписан иэ стационара в удовлетворительном состоянии на 17-й день лечеПредлагаемый способ диагностикибыл применен у 54 больных хроничес-1ким бронхитом, из них по критериямИ.И.Ииррахимова, Н,Н,Бримкулова 1-ястепень активности определялась у 16;11-я - у 23 и 111-я - у 15 больных.Активность катепсинов в мокроте убольных хроническим бронхитом составила Ийм) при активности воспаления1-й степени - 54,9+6,0 нИ тирозина ч мг белка,11-й степени - 196,9+13,4 нИ ти 1розина ч . мг белка,111-й степени - 440,2 ф 29,1 нИтирозина.ч мг белка,При определении граничных значений по Формуле М+2 б для каждой изтрех групп обследованных получаетсячастичное наложенИе определяемых интервалов как между 1 и 11, так и межф.ду 11 и 111 группами. Однако, учитывая высокодостоверную разницу (Р.(0,001) между средними величинамикаждой из групп обследованных, возможно определение крайних значенийдля 11 группы обследованных с дополнительной поправкой на величину,Раную 3 мб (м- - ошибка сигмы) с достоверностью Р(0,001.Итак, при ми=26=9,8 нижняя граница для второй группы равна И, -2 б++Зим=131,1 = 130 расч. ед верхняяграница - И+26-Зм =262,3 260 расч,ед.Таким образом, со значимостью Р0,001 можно утверждать, что нижнееграничное значение для 11 группы будет 130, а верхняя граница - 260.С целью объективизации оценки активности катепсинов мокроты как показателей активности воспаления прихронических бронхитах было проведеноопределение ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Для верификации результатов исследованиякатепсинов в качестве эталона сравнения использовались клинико-эндоскопические критерии активности воспаления, Результаты приведены в таблице.Приведенные данные свидетельствуют о высоком проценте истинно положи-тельных результатов активности катепсинов мокроты в каждой группе обследованных.Таким образом, более точное установление степени активности воспалительного процесса методом исследования катепсинов в мокроте при хрони-9 1543345 10 ческих бронхитах позволяет назначить хронических бронхитах путем биохимииндивидуальную адекватную терапию при ческого исследования мокроты, о т " обострении заболевания, определяет л и ч а ю щ и й с я тем, что, с цеинтенсивность и длительность противо- . лью повынения точности способа, опре 5воспалительнои и антибактериальной деляют уровень активности катепситерапии, Способ также позволяет конт- нов и при его значении 130 нМ тирозиролировать эффективность лечения , на/ч мг белка и менее определяют и является простым и полностью безо Т степень, 131-260 нМ тирозина/ч мг пасным для больного, белка - 11 степень, а более 260 нМ Ф о р м. у л а и з о б р е т ен и я тирозина/чмг белка - 111 степеньСпособ определения степени актив- активности воспалительного процес- ности воспалительного процесса при са. Степень активности воспаленияпри хроническом бронхите Показатели сравнения пд ЛожнойоложительныеЛожноотрицательныеИстинно положительныеР 8,7 Х4,3 Х870 Х(0,001 П р и м е ч а н и е, Р - достоверность между истинно положительными и ложнопо-ложительными и ложноотрицательными результатами.1 Составитель А,ЯхьяевЗаказ 398 Тираж 506 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета поизобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раущская наб., д. 4/5