Способ получения микроклубней картофеля in viтrо

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 19) (11) 1)4 А 01 Н 300 ГОСУД ПО ДЕ ПИСАНИЕ ИЭОБРЕТЕ 37:, Ц ИДЕТЕЛЬСТ А ВТОРСНОМ а- мол А.Ав еточной культу.)е труды ОКЛУБНЕИ к сельс кретно к картофеля. ение време- повыщение РСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССС М ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫ(71) Всесоюзный научно-исследтельский институт прикладнойкулярной биологии и генетики(56) Исследование по клре картофеля, М.: НаучньНИИКХ, 1984, с, 14-19.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИИКАРТОФЕЛЯ ТИ ЧТТЮ(57) Изобретение относиткому хозяйству, более коселекции и семеноводствуЦель изобретения - сокращни получения микроклубне жизнеспособности и размеров. Способзаключается в выращивании каллуснойткани с зачатками регенерантов ( 510 мм ) на питательной среде с минеральной основой по Мурасиге-Скугу.Среда содержит, мг/л: сахароза80,000-90,000, эеатин 0,35-0,45,ИУК 0,05-0,15, инозит 90-110, никотиновая кислота 0,4-0,6, пиридоксин0,05-0,15, тиамин 0,05-0,15, гидролиэат казеина 900-1100, глицин 1-3,фолиевая кислота 0,4-0,6, биотин0,03-0,08, Культивирование ведут вобычных условиях при 18-20 ОС ночью,23-25 С днем, 16-часовой фотопериод,освещенность 6-8 тыс,л, создаваемаялампами ЛФР 150), Образовавшиеся микроклубни оставляют на материнскихрастениях в условиях культивированиядо посадки, 2 табл, 1376990Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции картофеля, в исследо"ваниях по фитопатологии и морфоге 5неэу картофеля,Цель изобретения - сокращение времени получения микроклубней, повьппение их размеров и жизнеспособности,П р и м е р,1 Каллусную тканькартофеля сорта Янтарный 5-го пасса"жа культивируют на питательной.среде Иурасиге-Скуга с 2-7 мг/л 2,4 дихлорфеноксиуксусной кислоты 1, 2,4-Д 1Затем переносят каллусную ткань в 15пробирки, содержащие по 20 мл агаризованной среды для индукции морфогенеэа, Культивируют каллусы в пробирках при 23-25 ОС днем и 18-20 Сночью, при 16-часовом фотопериоде и 20освещенности 6-8 тыс,л, создаваемойлампами ЛФР 150,Через 2 мес культивирования отбирают пробки с каллусом, в которомпоявились регенеранты различных раэмеров (,5-10 мм в высоту),Состав питательных сред приведенв табл.1,Эти каллусы вместе с регенерантами пересаживают на среду, индуцирующую микроклубнеобразование (см.табл.1).Выращивание продолжают в тех же условиях, Через 2 недели на регенерантахначинают образовываться микроклубни.Они интенсивно растут, достигают через 1 мес культивирования размеров10 х 12 мм и более, а через 2-2,5 мес12 х 20 мм, Свьппе 757 регенерантов обра.эуют более 1 микроклубня на растение,По известному способу до появления А 0на регенерантах микроклубней, обладающих достаточно длинным периодом покоя, проходит 4,5 мес (около 1,5 месрегенеранты доращивают до состояния,в котором они могут быть расчеренкованы, и 3 мес выращивают черенкидо появления на них микроклубней ).Еще через 1 мес, когда их закладываютна .хранение, размер микроклубнейне превышает 6-7 мм в диаметре,По предлагаемому способу микроклуб 50ни начинают образовываться на регенерантах уже через 2-3 недели культивщрования на индицирующей микроклубнеобраэование среде через 1 мес кульФ55тивирования регенерантов с микроклуб"нями последние достигают размеров10 ф 12 мм и более и через 2,0-2,5 мес1 2 ю 20 мм, Таким образом, срок получения микроклубней по предлагаемому способу по сравнению с прототипом сокращается в 6 раэ, а величина микро- клубней оказывается через 1 мес выращивания регенерантов с микроклубнями в 1,5 раза больше 11012 мм) в сравнении с 6-7 мм в диаметре, .а при сравнении окончательных размеров в 2 раза больше: 1220 мм по предлагаемому способу и 6-7 мм по способу прототипу.Влияние компонентов пйтательной среды на индукцию регенерантов картофеля и .на индукцию микроклубней на них приведено в табл,2,Как видно из табл.2 при концентрации зеатина 0,2 мг/л наблюдали очень слабую регенерацию побегов в каллусе, а при концентрациях 0,6 и 0,8 мг/л отмечено ингибирование процессамикроклубнеобразования на регенерантах, Поэтому оптимальными концентрациями зеатина для образования побегов и микроклубней на них являются 0,35 - 0,45 мг/л. При этом микро- клубни появлялись через 2 мес выращивания образовавшихся регенерантовДля ускорения микроклубнеобраэования каллусную ткань сорта Янтарный с зачатками регенерантов (5-10 мм в высоту) переносят на морфогенную среду с 0,4 мг/л зеатина и различными концентрациями сахарозы ( см.табл,2) и культивируют в тех же условиях как описано вьппе. Наиболее активную индукцию микроклубнеобразования наблюдали при концентрации сахарозы 80000"100000 мг/л. При концентрации сахарозы 60000 мг/л индукция микроклубнеобразования проходила гораздо медленнее. В то же время при концентрации сахарозы 100000 мг/л небольшие регенеранты почти совсем не развивались и были очень уродливыми, Так как регенеранты, получаемые при различных генетических манипуляциях (слияния протопластов отдален-. ных видов, трансформация протопластов и т.д.), часто характеризуются низкой жизнеспособностью, целесообразно использовать для индукции микроклубнеобразования сахарозу в концентрациях 80000 - 90000 мг/л, которая не полностью ингибирует рост и развитие регенерантов.Найденные закономерности были проверены на каллусах различных сортов1376990 Таблица 1 Содержание компонентов питательныхсред, мг/л среды Компонент Для индукцииклубнеобраэоДля индукцииморфогенеза Для культивированияя вания каллуса 1650 1650 1650 1900 1900 1900 СаС 1 2 Н О МПВО 7 Н О КН РО 440 440 440 370 370 370 170170 170 6,2 6,2 6,2 22,3 МПВО 4 Н О ЕпВО 7 Н 04 2 22,3 22,3 8,6 8,6 К 1 0,83 0,83 0,83 0,250,0250,025 0,250,0250,025 Н МоО 2 Н 1 0,25 СиВО 5 Н О СоС 12"6 Н 0 0,0250,025 37,3 На ЭДТА ГеВО 7 Н О Сахароза 37,3 37,3 27,8 27,8 27,8 20000 80000-9000090,0-110,0 20000 100 Инозит 100 картофеля: Домодедовский, Изобилие, Бирюзаи Повировец. Каллусы культивировали и вызывали в них образование побегов по вьппеописанному для сорта Янтарный способу. По 50 каллусов с зачатками регенерантов (5- 1 Ц мм в высоту) всех указанных сортов пбмещали на среду с 80000 мг/л сахарозы и 0,4 мг/л зеатина ( табл.2) и культивировали как описано вьппе для сорта Янтарный, Через 4 недели культивирования наблюдали образование микроклубней у всех сортов ( Домодедовский 32%, Изобилие 28%, Бирюза 26%, Повировец 32%).Таким образом, предлагаемым способом можно индуцировать микроклубнеобраэование у регенерантов различных сортов картофеля,ф о р м у л а . и з о б р е т е н и я 5Способ получения микроклубней кар"тофеля п уего, включающий культиви;рование эксплантатов на питательной, среде с минеральной основой по МурасигеСкугу, обогащенной сахарозой о т л ивчающийся тем, что, с целью сокращения времени получения микроклубней, повьппения жизнеспособности иразмеров, в качестве эксппантатовиспользуют каллусную ткань с зачатками регенерантов, а в питательнуюсреду дополнительно вводят зеатин вколичестве 0,35-0,45 мг/л среды.1376990 Продолжение табл.1 а тельны Иомнонент Для индукцииморФогенеэ ания Ник 5 0,6,05-0 идокси 0 05-0,иами 1000 0 00,0-1100 диват казе 2 У 0 ици 0 0,4"0,6 иевая кисл 0,03 оти 1 нббер елл е теро аук си ни 0,05-0,15 5-0,4 еати 40 700 0 ар 1 вавеаюнвенвиввйма 4 ваеивююмйваееевмаьвэфеовая кислота Аскорбиновая кислота Хлорогеновая кислота е коипонектовед, мг/л среды я индукцииубнеобравония