Способ идентификации нуцеллярных и гибридных растений цитрусовых

(19) (11) 4,А 016700 01 511 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ки АН СССРдственное объеким культурам Шевченко 5, (8), р. 869 - 881. ИФИКАЦИИ НУРИДНЪХ РАСТЕсельскому хои цитрусовых. ение процесса ОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(46) 29,02.88. Бюл.8 (71) Институт обшей генет и Всесоюзное научно-произво динение по чаю и субтропиче(72) Б. И (53) 631.52 (56) Агпег (54) СПО ЦЕЛЛЯРН НИЙ ЦИТ (57) Изобр зяйству, а Цель изоб Капанадзе и В1 (088,8)1, Во 1, 1978, 6СОБ ИДЕНТЫХ И ГИБРУСОВ ЫХетение относитсяименно к селекцретения - уско идентификации и повышение точности. Берут образцы листьев 2-3-месячных проростков, экстрагируют из них белки, проводят электрофорез и получают электрофореграммц листьев. Анализу подвер ают электрофореграммы изоферментов аспартатаминотрансферазы при анализе сеянцев, полученных в результате скрещивания грейпфрут х трифолиата и гексокиназы дтя сеянцев мандарин х апельсин. Нуцеллярные сеянцы имеют только аллель материнского растения, гибридные сеянцы-аллели обоих родителей, при этом электрофореграммы гексокиназы и аспартатаминотрансферазы не различаются у плодоносящих побегов и 2-3-месячных сеянцев.1376989 Формула изобретения Составитель Е, ШкрадюкРедактор Н. Киштулинец Техред И. Верее Корректор В. БутягаЗаказ 506/2 Тираж 661 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 1Изобретение относится к селекции цитрусовых и может быть использовано в сельском хозяйстве.В цитрусоводстве широко используются межвидовые гибриды, например мандарин х х апельсин, грейпфрут х трифолиата, грейпфрут х лимон и др применение которых в промышленных посадках позволяет избежать инбредного вырождения, Кроме того, такие гибриды, как правило, сочетают соединенные свойства принимающих учстие в гибридизации исходных форм. Идентификация на ранних стадиях развития гибридных форм среди сеянцев, полученных от скрещивания, и выбраковка нуцеллярных сеянцев, имеющих место в большом количестве при таких скрещиваниях, является важной практической задачей.Цель изобретения - ускорение процесса индентификации и повышение ее точности.Пример, У исследуемых образцов берется лист весом около 50 мг. Образец помещают в ступку, добавляют песок, заливают жидким азотом, добавляют 0,2 - 0,25 мл 0,05 М трис-НС (рН 8,3) буфера, растирают пестиком, центрифугируют в течение 20 мин при 15000 об/мин в рефрижераторной центрифуге, сливают надосадочную жидкость, содержащую белки данной ткани, и проводят электрофорез в блоке 7,5 Я-ного полиакриламидного геля (рН 8,3) в трис-боратной системе при напряжении 300 В в течение 1 ч 30 мин, После окончания электрофореза гель извлекают из электрофоретической камеры и помещают в кювету для окраски. В случае излучения образцов гибридов мандарин х апельсин гели заливают красящей смесью, содержащей 90 мг декстрозы, 20 мг МдС 1 25 мг АТФ, 25 мг НАДФ, 20 мг НСТ, 3 мг ФМС, 80 ед (0,035 мл) глюкозо-фосфат-дегидрогеназы, 10 мл 0,5 М трис-НО буфера (рН 8,0), 90 мл воды, выявляющей полосы активности фермента гексокиназы, а в случае анализа гибридов грейпфрут х трифолиата - красящей смесью, содержащей 160 мг аспартата, 40 мг а-кетоглутаровой кислоты, 60 мг прочной синей РР соли, 50 мл 0, М трис-НС буфе 2ра (рН 8,8), выявляющей полосы активности фермента аспартатаминотрансферазы.Изученные сорта в пределах вида не отличались друг от друга по электрофореграммам проанализировано 8 сортов манда рина, 6 сортов апельсина, 4 сорта грейпфрута и 1 трифолиата. Имеются аллельные отличия в спектрах изоферментов между различными видами, что и позволяет однозначно идентифицировать гибриды между видами.10 Нуцеллярные сеянцы имеют толькоаллель материнского растения, гибридные сеянцы - аллели обоих родителей, при этом электрофореграммы гексокиназы и аспартатаминотрансферазы не различаются у плодоносящих деревьев и 2-3-месячных сеянцев.15 Для установления достоверности идентификации гибридных и нуцеллярных сеянцев с помощью изоферментов были взяты в анализ 148 плодоносящих деревьев, среди 20 которых 70 по морфологическим и вкусовым показателям были идентифицированы как гибридные, а 58 - как нуцеллярные.Результаты, полученные с использованием метода электрофореза, полностью совпали с результатами идентификации деревьев по морфологическим и вкусовым показателям. Способ идентификации нуцеллярных игибридных растений цитрусовых, включающий взятие образцов листьев, экстракцию из них белков, их электрофорез, получение электрофореграмм и их анализ на присутствие характерных полос-маркеров отцовского компонента для гибридных растений и по присутствию электрофоретических вариантов материнских растений для нуцеллярных растений, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса идентификации и повышения ее точности, получают электрофореграммы листьев 2-3-месячных проростков, а 40 анализу подвергают электрофореграммы изоферментов аспартатаминотрансферазы при анализе сеянцев, полученных в результате скрещивания грейпфрут х трифолиата и гексокиназы для сеянцев мандарин х апельсин.