Способ определения фентоламина гидрохлорида

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 9) (11 4 С 01 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН Нф 36.М. Иванов,Е. Ермаковаственный медицинс 2. З.И.е фентолГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Курский государкий институт(56) Фармакопейная статья 42-656-7 фентоламина гидрохлорид.Поздняков Е.Г., Егорова Фотометрическое определени амина, фетанола и мезатона. - Фармация, 1982, У 2, с. 54.Авторское свидетельство СССР В 1078293, кл. С 01 Б 21/78, 1982.(54) (5) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕНТОЛАМИНА ГИДРОХЛОРИДА путем обработкианализируемой пробы химическимиреагентами в среде органическогорастворителя с последующим анализомполученного раствора, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюповьппения чувствительности и избирательности определения, обработкуведут последовательно уксусным ангидридом и ЗОХ-ной хлорной кислотойв качестве органического растворителя используют уксусную кислоту, ианализ проводят измерением относительной интенсивности флуоресцен 1182346Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам количественного определения фентоламцна гидрохлорида (гидрохлорид 2- Б-и-толил-И-(м-оксифенил) амино метил имидазолина), и может быть использовано в клинических лабораториях, контрольно-аналитических лабораториях аптекоуправлений, заводских и судебно-химических лабора ториях.Целью изобретения является повышение чувствительности и избирательности определения.Способ осуществляется следующим 15 образом.Качественное определение фентоламина гидрохлорида.К крупинке порошка или мелкоизмельченных таблеток фентоламина гид рохлорида прибавляют 1 мл уксусной кислоты, встряхивают, затем к полученному раствору прибавляют 1 мл. уксусного ангидрида, 0,1 мл 307- ной хлорной кислоты, в результате чего 25 при облучении ультрафиолетовым светом с длиной волны 365 нм появляется интенсивная зеленая флуоресценция.Количественное определение фентоламина гидрохлорида. 300,1 г (точная навеска) порошка фентоламина гидрохлорида переносят в мерную колбу на 100 мл, прибавляют 80-90 мл уксусной кислоты, растворяют фентоламин гидрохлорид и дово дят объем уксусной кислотой до метки, 5 мл полученного раствора переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем уксусной кислотой до метки. 40К 1 мл полученного раствора прибавляют 1,0 мл уксусного ангидрида,0,1 мл ЗОЖ-ной хлорной кислоты,встряхивают и добавляют 7,9 мл уксус 45ной кислоты. Раствор тщательно перемешивают и измеряют относительнуюинтенсивность флуоресценции. Параллельно проводят опыт со стандартнымраствором фентоламина гидрохлорида50и контрольный опыт. В.качестве стандартного берут раствор концентрацией 5 мкг/мл. Контрольный опыт проводят с чистой уксусной кислотой, уксусным ан гидридом и 30%-ной хлорной кислотой.Концентрацию измеряемого растворарассчить 1 вают по формулегде С - концентрация исследуемогораствора фентоламина гидрохлорида;С - концентрация стандартного1раствора фентоламина гидрохлорида;Н - показатель электрофлуори 1метра для исследуемого раствора;Н - показатель электрофлуориметра для контрольного опыта;Н - показатель электрофлуоримет 2ра для стандартного раствора.Результаты определения фентоламина гидрохлорида в порошке приведены в табл.1. Та блица 1 Пример Найдено, Х Метрологическиеданные 98,7 98,2 0,73 98,4 0,7 98,3 0,30 100 1 5 Б- = 0,770,9 99,0 98,7+0,77 98,3 Определение фентоламина гидрохлорида в таблетках по 0,025.0,1 г (точная навеска) мелко измельченных таблеток переносят в мерную колбу емкостью 100 мл, прибавляют 80-90 мл уксусной кислоты, растворяют,. доводят объем уксусной кислотой до метки и перемешивают. 50 мл данного раствора переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем до метки уксусной кислотой.К 1,0 мл исследуемого раствора препарата прибавляют 1,0 мл уксусного ангидрида и 0,1 мл 307-ной хлорной кислоты, встряхивают, прибавляют 7,9 мл уксусной кислоты и измеряют относительную флуоресценцию на электрофлуориметре.92,9 93,8 Приготовляют стандартный раствор 5,0 мкг/мл и измеряют относительную интенсивность флуоресценции,.Концентрацию фентоламина гидрохлорида определяют по указанной формуле.Определение фентоламина гидрохлорида в моче (искусственная смесь).К 2 мл мочи, содержащей 100 мкг/мл препарата, добавляют 2,0 мл 0,2 М 1 О универсального буфера (РН 11,0) и экстрагируют 8 мл хлороформа три раза в течение 5 мин. Хлороформный слой сливают в выпарительную чашку и выпаривают на водяной бане до 0,05- 1 0,1 мл. Полученный раствор наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол" УФ.На пластинку наносят раствор фентоламина в метаноле в концентрации 20 50 мкг/мл ("свидетель"). Пластинку с нанесенными пятнами высушивают в воздухе в течение 5 мин и помещают в хроматографическую камеру со смесью растворителей гексан:ацетон:аммиак 25 25% в соотношении 5:20:2 и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителей пройдет 10 см, пластинку вынимают из камеры и сушат на воздухе в течение 5 мин. Локализацию пятен определяют в УФ свете с длиной волны 254 нм по гашению флуоресцентного индикатора. Н = 0,32.Пятно препарата количественно переносят в центрифужную пробирку, прибавляют 1 мл уксусной кислоты, 1,0 мл уксусного ангидрида и 0,1 мл 30%-ной хлорной кислоты. Встряхивают, прибавляют 7,9 мл уксусной кислоты, центрифугируют при 3000 об/мин В те 40 чение 10,мин.Прозрачный раствор сливают в кювету и измеряют относительную флуоресценцию стандартного раствора концентрацией 20 мкг/мл и контрольного раствора.Концентрацию фентоламина гидрохлорида определяют по указанной формуле. Результаты определения фентоламина гидрохлорида в моче (искусственная смесь) приведены в табл. 2.Таблица 2 Определение фентоламина гидрохлорида в крови.2,0 мл крови, содержащей 500 мкг/мл (искусственная смесь), переносят в мерную колбу на 25 мл и доводят объем до метки универсальным буфером (РН 11). Аликвотную часть полученного раствора (5 мл) экстрагируют двойным объемом этилацетата. Этилацетатный слой сливают в выпарительную чашку и выпаривают на водяной бане до 0,05- 0,1 мл, хроматографируют и определяют концентрацию аналогично предыдущей методике.Результаты определения фентоламина гидрохлорида в крови (искусственная смесь) приведены в табл.З. Пример Найдено, % Метрологические характеристикик 92,0 96,0 х = 94,0 Б = 1,33 Результаты поиск центрации кислоты и а также количества представлены в табл оптимально ее количест уксусного ан 4.1182346 Таблица 4 Опыт Х Примечание у Симплекс 20 0,5 0,5 1,0 10 0,1 Оптим,40 1,0 0,1 30 1,0 0,5 20 36 35 0,1 0,1 32 2,0 30 2,0 0,1 0,1 25 1,2 0,2 30 2,0 50 П р и м е ч а н и е. Х- концентрация хлорной кислоты, %;Х - количество хлорной кислоты, мл;Х - количество уксусного ангидрида, мл;эУ - флуоресценция, %. Продолжение табл.5 Таблица 5 40е 80 10 80 Время с начала проведения реакции, ч ная инь флу 1, %45 15 4 8.2 0 5 81 (1,2,3,4,5)8 .(3,4,5,6)Я (3,5,6,7)84 (3,5,6,7)Я (3,5,6,9) Интенсивность флуоресценции не изменяется в течение 24 ч. Зависимость интенсивности флуоресценции от времени (С = 5 мкг/мл) приведена в табл.5. Линейная зависимость между концентй фентоламина гидрохлорида и сивностью флуоресценции соблюя в растворах с концентрациями100 мкг/мл. Зависимость инвности флуоресценции от концентраствора фентоламина гидрохлоприведена в табл.6. раци инте дает 0,01 теис раци рида1182346 Таблица 6 Относительная интенсивность флуоресценции,Х 23 10,0 0,08 29 20,0 0,09 30,0 0,10 О, 20 46 40,0 58 0,30 50 50,0 63 60,0 70 0,40 70,0 73 0,50 72 80,0 78 0,60 90,0 80 82 0,70 85 0,80 85 93 0,90 85 22 1,0 31 2,0 40 3,0 48 4,0 56 5,0 62 6,0 70 7,0 78 8,0 9,086 Предлагаемый способ определения фентоламина гидрохлорида по сравнению с известным более чувствителен (0,1 мкг/мл и 80 мкг/мл соответственно), избирательность его также высока, так как определению фентолКонцентрацияфентоламинагидрохлорида,мкг/мл Относительная интенсивность флуоресценции,3 Концентрацияфентоламинагидрохлорида,мкг/мл 100,0 110,0 120,0 амина гидрохлорида не мешают фенкпгидразин, тиоурацил, фенилтиомочевина, тиомочевина, ароматические альдегиды, тропафен, пирроксан и Ряд других соедине- нийа