Способ определения степени иммуногенности авирулентных штаммов чумного микроба

/00 Р 4 С ЗОБРЕТЕ ВУ ВИДЕТЕЛ РСК ри ЬР тамм генный. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ(56) Бургасов П.Н., Анисимова Т.И.,Кузнецова О.Р. и др. Основные критерии отбора вакуумных штаммов чум,ного микроба. Методические указанияСаратов, 1976, с. 34 (прототип).(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИИМИУНОГЕННОСТИ АВИРУЛЕНТ 1 ЗХ ШТАММОВЧУМНОГО ИИКРОБА путем подкожного заражения белых мышей культурами ис- пытуемого и вирулентного штаммов чумного микроба, о т л и ч а ю щ и й - с я тем, что, с целью ускорения способа, культуры испытуемого и виру-. лентного штаммов вводят совместно, при этом культуру вирулентного штамма используют в дозе 10-10 ф Рс 1 и иммуногенность штаммов определяют по показателю 1.Р , выраженному числом Рс 1 вирулентного штамма, при этом при ЬРр равном 200 Рс 1 и выше - штамм иммуногенный, при ЬР менее 200 Рс 1 и более 10 Рс 1 - штамм с ослабленной нммуногенностью, ас п , равном 10 Рс 1 и меньшеЖ1100Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для первичного изученияиммуногенности авирулентных штаммовчумного микроба.5Известен способ определения степени иммуногенности авирулентных .штаммов чумного микроба путем подкожного заражения белых мьппей культурой испытуемого штамма, через 21 10день - культурой вирулентного штамма и через 21 день после последнегозаражения определяют иммуногенностьпо показателю ЕР ,, Однако известный способ длителен, 15так как ответ получают через 42 дня.Целью изобретения является ускорение способа.Цель достигается тем, что культуры испытуемого и вирулентного штаммов вводят совместно, при этомкультуру вирулентного,штамма используют в дозе 1 ОЭс 1 и иммуноген-ность штаммов определяют по показателю ЬР , выраженному числом Рс 2 вирулентного штамма, при этом при ЬРп,равном 200 Рс 2 и выше - штамм иммуногенный, при ЬР менее 200 Рсй иболее 10 Рсй - штамм с ослабленнойиммуногенностью, а при,ЬР , равном ,3010 РсУ и меньше, - штамм неиммуногенный.Способ осуществляют следующим образом.Готовят разведение испытуемогоавирулентного штамма в концентрации2 10 м.к./мл и серийные разведениядвухсуточной агаровой культуры вирулентного штамма чумного микроба(Рс 1 не более 10 м.к,) в концентрациях 210 ь 2 10 2 10 Ч и210 ф м.к./мл. Перед заражением ехйешроге смешивают девять частей суспензии авирулентного штамма с однойчастью каждой их четырех суспензийвирулунтного штамма. Полученными смесями в объеме 0,5 мл заражают подкожно во внутреннюю поверхность бедрапо пять белых мышей на дозу. Такимобразом, каждой мьппи вводится по5010 м.к. авирулентного штамма и микробы вирулентного штамма в одной из. следующих доз, 10 ф 10, 10 и10 м.к. Животные погибают в обычныедля заболеваний чумой сроки. По ре 1эультатам опыта определяют показа 304 2тель 1.Р вирулентного штамма и выражают его числом Рс 1,П р и м е р 1. Готовят суспензиюдвухсуточной агаровой культуры штамма Уегзп 1 а резг 1 з ЕЧ в концентрации2 ф 10 м,к./мл и суспензии вирулент-ного штамма У.реэйдз 1300 (Рс 71 О м.к.) в концентрациях 2 10 , 2 ф10 ф, 210 , 2 10 м.к./мл. В бокседля заражения животных смешивают по0,5 мл каждой взвеси штамма 1300 с4,5 мл суспензии штамма ЕЧ. По 0,5 мл. каждой смеси вводят подкожно пятибеспородным белым мьппам. Инфицирующие дозы штаммов ЕЧ и 1300 соответственно составляют 1 О и 10 ф; 1 О и10,. 10 и 104; 10 и 10 м.к, Кроме того, заражают культурой штамма1300 в дозе 10 м.к. 5 белых мышей(контроль авирулентности штамма). Втечение 18-21 сут. следят эа гибельюживотных, вьпкивших к этому срокубелых мьппей убивают.Результаты заражения представлены в табл.,1.По результатам испытания культураштамма ЕЧ расценивается как иммуногенная Ь - Р равна 208,3 Рс 7.П р и м е р 2. Из вакционногоштамма ЕЧ получена субкультураЕЧР 1 , не продуцирующая,фракциючумного микроба. Определение иммуногенности проводят по методике, описанной в примере 1,В табл. 2 приведены данные поиммуногенности штаммаФПо результатам испытания. культураоценена неиммуногенной 1.Р равф пана 3,16 Рс 1.Определение иммуногенности прове-.дено у пяти авирулентных штаммовчумного микроба (см. табл. 3).Сравнительные данные по точностиопределения при наличии ускоренияспособа приведены в табл, 4,Использование предлагаемого способа позволяет сократить время изучения иммуногенности в два раза,тем самым создает экономию средствадля содержания зараженных животныхв специальных помещениях; совмеще.ние вакцинации и заражения в однойоперации цсключает двухэтапность исследования.1100304 Таблица 1 штамма,1300,мк Погибло Доза культуры штаммаФ Доза культуры штамма1300 10 0 10 208,3 20830 10 0 10 10 2 ф 10 10 10 10 0 Таблица 2 Погибло Доза культуры штамма 1300 Заражено белых мБппей 10 10 ф 10 3,16 316,3 10 10 10 10 п 10 0 Доза субкультурыЕЧР 1 Заражено белых мышей 11 по штамма, м.к. Ь 0штамма, Рс 1 Ы), штамма1300 Ос 11100304 Таблица ЕР , мк Степень Характеристикаштамма Культура иммуно- геннос ти 1 опыт 2 опыт Вакцинный 7,478 1 Оэ 233,8 208,3 Иммуногенный ЕЧ 256 237,1 1,994 103(Г - Реп Т.г ) То же ЕЧ 1300 Са+ 1,5 Таблица 4 ФФ ю Хультура 1 редлагаеюй способ тЬовнрулентного агама при введении с 1 О и.к. Кавнрулентного италиа и пределм колебаний этого кпокаэателя, Оса а такие Р (достоверность) поотноиенив к реэультатаи опмта с нсполъэованиемтаеа ВЮ ень нимунощ остаебаний,н.к. 1 о Нределм колебаний бани гзз ЬЕун 478 7-345 71,4-318,4 81,7-5 э 25 005 1 ЭОО 31,0,05 7-5934 То ке 28-38 926,о енмнуногенмй 4,О,8-5,О 1 350100 с 0,01 е 0,8-4,8 4,5-8 184000-6665 Получен из вирулентного штамма 1300 на среде Джексона-Берроуза Потерявший имму- ногенность Получен из вирулентноэ"о штамма 1300 на среде Хигучи-Смита ЬВ вирулентного штамма.прит введении 10 м.к. авирулентного штамма, Эс 2т 3,125 10, То же 68Продолжение табл.4. 1 00304 Лреллагаеиьв 1 способ Культура твирулентного нтаниа при введении с 1 О м.кнрулентного атвмма и пределы колебаний этогоаэателл, Рсэ, а такке Р (достоверность) пооаенюю к результатам опыта с нспольэованиеиатаесв ЕЧ КРе, пределыколебаний,опыт Пределы ко- Р лебаний 1300 Саф,5 3125000 с 0,01 с 0,0 1 "3,6 6 е показателей 1.0, , так квк по результатам опыта сравнение роводилн сравноэмонио.роводили сравн казателей ЬР 1 в нее показателей ЕР , твк квк по результатам сра нне показателей ЕР нев мокло;Э а,дактор Л. Пис Т.Хо орректор В,Б ич аказ 605 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проекты Тираж ВНИИПИ Государс по делам изо 3035, Москва, Ж 90 Подписноеенного комитета СССРетений и открытийРаушская наб., д. 4/5 ионе ни к ЕРэо еч