Способ дифференциальной диагностики фибринолиза и фибриногенолиза

Изобретение относитак к медицине,а именно гематологии, и касаетсяспособа дифференциальной диагностики фибринолиэа и фибриногенолиза.Известны способы дифференциальной диагностики фибринолиза и Фибриногенолиза путем определения показателей свертывающей и противосвертывающей системы: определение концентрации фибриногена, числа и функции тромбоцитов; парциального тромбопластинового, тромбинового, протром,бинового и рептилазного времени, ан- .титромбина Я, этанолового и протамин-,сульфатного теста; , У 11, ХЦ и ХЩфакторов свертывания крови, степениФибринолитической активности крови,фглубины распада фибриногена и фибрина 1 Ц - 15),Однако определение перечисленныхпоказателей недостаточно для конкретной дифференциальной диагностики Фиб ринолиза. и фибриногенолиза, Крометого, необходимо отметить сложностьи трудоемкость выполнения требуемогокомплекса исследований, которые донастоящего времени мало доступны для 25повседневной гематологической практи-.ки.Известен способ дифференциальнойдиагностики фибринолиза и фибриногенолиэа путем иммунохимического иссле-З 0дования сыворотки крови 61.Недостатком способа является егодлительность и трудоемкость.Целью изобретения является ускорение и упрощение способа.Указанная цель достигается тем,что согласно способу дифференциальной диагностики фибринолиза и Фиб;риногенолиза путем иммунохимического исследования сыворотки кровиисследуемую пробу сыворотки крови де лят на две части, одну из них прогревают прр 55-570 С в теченйе 18-22 минудалее определяют в ней концентрациюР-фрагмента фибрина и при наличии егодиагносцируют фибринолиз, во второй 45пробе определяют концентрацию0-фрагментов фибрина и фибриногенаи при наличии П-фрагмента фибриногена В отсутствии Р-фрагмента фибрина,диагносцируют ФИбриногенолиз. 50Способ осуществляют следующим образом,Навеску агар-агара растворяют вверонал-ацетатном буфере, доводятдо полного набухания на кипящей водяной. бане, фильтруют и готовят плен 5ки агара. В застывшей пленке специальным перфоратором делают отверстия по 6 вокруг 1 центрального.В центральные отверстиявносят моноспецифическую сыворотку к 33 "фрагменту фибриногена АДС). В перифери"ческие отверстия по часовой стрелкевносят разведенную в геометрическойпрогрессии веронал"ацетатным буферомнепрогретую и прогретую сыворотку 15 исследуемОго больноГо, Пленки агара оставляют на 24 часа во влажной камере при комнатной температуре для образования осадка, который проявляется в виде линий преципитации, После Формирования дуг преципитации на основании чувствительности используемых АДС производят подсчет-расшифровку результатов исследования и осуществ-. ляют дифференциальную диагностику. (П р и м е р 1 Вольная 32 лет, обследована по поводу острого промиелоцитарного лейкоза.В крови больной определяют.содержание продуктов деградации фибрина и фибриногена, для чего 15 г агар" агара растворяют в 1 л веронал"ацетат-, ного буфера рН 8,6 ионной силой.0,5 на кипящей водяной бане. После полного набухания агара, его фильтруют и готовят пленки толщиной 1- 1,5 мм.После полного застывания в пленке агарового геля, специальным металлическим перфоратором делают 12 отверстий по 6 вокрг 2 центральных. Таким образом получается 2 звезДы, Диаметр всех отверстий и расстояние между ними равно 5 мм.В центральные отверстия 1 и 2. звезды вносят по 0,05 мл АДС. В периферические отверстия 1 звезды вносят непрогретую сыворотку крови больной, разведенную в геометрической прогрессии вероналацетатным буфером рН 8,6, ионной силой 0,3. Соотношение исследуемогОматериала и буфера следующеег 1 ф, 1:1; 1:2; 1:4 и т.д.В. периферические отверстия 2 звезды вносят разведенную укаэанным спо" собом прогретую сыворотку исследуемого больного. Прогревание сыворот" ки осуществляют 20 мин при 56 С. Через 24 ч инкубации агаровой Плен" ки во влажной камере при комнатной температуре в ней .образуется осадок, который выявляется в виде дуг пре". ципитации. На основании чувствитель" ности антисыворотки. наименьшая концентрация антигена, улавливаемая используемой АДС) производят подсчет ;,(мг.Ъ) количества суммарной концентрации продуктов деградации фибриногена (фибрина) 1 звезда), количество дубль- О -фрагмента фибрйна (2 звезда) по формулеА=В хСгде А - количество исследуемогопараметра, мг.Ъ;В - чувствительность иммунной сы-,воротки,С - количество линий иммунопреципитации в пленке агара(разведение).При лабораторном обследовании выявлено наличие фрагмента Э -фибриногена 12,5 мг) при отсутствии0 фрагмента фибрина. Йа основании мента Фибриногена - отсутствует). полученных данных был диагностирован Состояние больного улучшилось. Фибриногенолиз. Клинически Отмечались,единичные геморрагии на коже конеч- П р и м е р 3. Больная перенес ностей. В связи с лабораторными приз- ла операцию кесарева сечения на оснаками дВС больная получала цитоста-новании следующих клинических дантическую терапию и гепарин, который ных: узкий таз 1-й степени, рубец назначали внутривенно капельно мед- на матке, пиелонефрит. до операции ленно в дозе 2-5 000 ед,по схеме. иммунологические исследования конКонтролем лечения служили данные . статировали фибриногенолиэ (конценткоагулограммы и иммунохимическйе тесрация фибриногена 300 мгЪ, 0-фрагты, которые позволили регулировать мент Фибриногена - 25 мгЪ, П-фрагдозировку препарата и показали в кон- мент Фибрина отсутствует) после леце лечения отсутствие .распада как чения И операции отмечали Фибрннолиэ фнбриногена, так и фибрина. Больная количество фибриногена - 300 мгЪ, после лечения находилась в состоянии 15 б-фрагмента фибрина - 25 мгЪ, 0-фрагремиссии. мент.фибриногена отсутствует), У беПример 2. Больной 46 лет поступил ременных во время операции кесарева с диагнозом остры тромбоз глубоких ,сечения нередко .возникают серьезные веи левой нижнейконечности. Клини- нарушения свертывания.крови, прочески отмечалось покраснение, отек .ц являющиеся в виде .послеоперационных и резкая боль в пораженной конечнос- тромбоэов магистральных сосудов или ти. Первичное лабораторное обследо- массивных кровотечений. С целью ванне подтвердило клинический диаг- .предотвращения этих осложнений, ноэ острого тромбоза ( увеличение . которые подтверждались иммунологическонцентрации фибриногена до 400 мгВ, 25 кими. тестами, в конце операции внут- П-фрагменты фибрина и Фибриногеиа от-ривенно одноразово введено 5 000 ед, сутствовалиЛечение проводили уро- гепарина. После проведенного лечения кинином бдноразово внутривенно ка- и операции у беременной по всем ис.пельно в дозе 20000 ед. с добавле- следуемым показателям констатиронием гепарина по схеме. В процессе вана конечная стадия фибринолиэа лечения больного с помощью иммунохи- (концентрация фибриногена - 300 мгВ, мических тестов выявлена активная ,0-фрагмент фибрина - 25 мгЪ, Р-фраГ.- фибриногенолиза количество фибрино- .мент Фибриногена отсутствовал). Кро гена 150 мгВ, 0-фрагмент фибриногена - вотечения и тромбоза не наблюдали.100.мгВ, 0-фрагмент фибрина - от- , В таблице представлены результаты .сутствует ), а в конце лечения заре- "35:исследования фибринолиза и фибриногегистрировали фибринолиз (концентра-. : нолиза в крови здоровых лиц и больных ция фибриногена - 100 май%, П-абраг" различными заболеваниями.я. О Цх.11 ХОИВХ.а1 1 ь в 11 1 1 сХ Оххх аои 1. оаЕ фО в й 1р аида х о.хххмвххоо 1оа х.1026778 Составитель Е.ЖитниковаТехред С, Мигунова Корректор,Г. Огар Редактор М.Товтин м вЗаказ 4609/6 Тираж 713ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб , д. 4/5 Филиал ППП "Патентф, г. Ужгород, ул., Проектная, 4 Таким образом, используя предлагаемый иммунохимический тест можно осуществить одновременное исследование и с, высокой степенью достоверности ; проводить дифференциальную диагности, ку мещду фибринолизом и фибриногенолизом Использование предлагаемого иссле дования исключает из практики.лаборато" рии комплекс длительных и трудоемких- методов,что дает возможность с наименьшей затратой времени, материалов и аппа ратуры получить достоверную информацию о фибринолизе и фибриногенолизе.