Способ количественного определения продуктов деградации фибриногена и фибрина в моче

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик(22) Заявлено с присоедиие 59/13 05.74 21) 20 Ю 33/16 м заявкиГосударственный комитет Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий(46) Дата опубликоваиия опи С. Н. Цынкаловская,Белицкая 72) Авторы изобрет Царюк,А. Бел ер, Т. В. Варе Я. М. Ена и Г ГРАДАЦИИ ФИБРИНОГЕНА И ФИБРИН О) ополнительиое к авт Изобретение относится к медицине и ме-жет быть использовано при диагностике заболеваний почек.Известен способ определения продуктовдеградации фибрина и фибриногена в моче,включающий выделение белков и добввлние их к высокоактивным специфическимиммунным сывороткам, после чего опреЭделяют задержку агглютинации эритроцитов, 1 Осексибилизированных фибриногеном,Недостатком известного способа является введение высокоактивных специфических антисывороток к фибриногену, процессполучения которых трудоемок, 15С целью упрощения диагностики почечных заболеваний в предлагаемом способеполученной белковой фракцией воздействуют;на мономерный фибрин в присутствии фосфвтного буфера, соевого ингибитора трипси- она и хлористого кальция, а количествопродуктов деградации фибриногена и фибрина определяют по увеличению времени полимериэации мономерного фибринв.Способ осуществляют следующим образом.аб К 1 мл мочи из взятых для анализа около 110 мл прибавляют 0,2 мл 30%-ной трихлоруксусной кислоты (проба на присут-. ствие белков). При положительной реакции происходит помутяение. Проводят пробу на присутствие белковой фракции, содержащей ПДФ. Для этого к 1 мл мочи прибавляют 0,7 мл насыщенного раствора сернокисло- . го аммония - появляетса помутнение. Такую мочу подвергают дальнейшему анализу. К 100 мл мочи прибавляют 10 мл 0,36 М раствора фосфатного буфера, рН 7,0, .затем вносят 68,5 мл насыщенного раствора сернокислого аммония, доведенного аммиаком до рН 7,0 и оставляют до следующего дня в холодильнике, Выпавший осадок отделяют центрифугированием и растворяют в минимальном количестве (около 2 мл) воды, диализируют против 0.15 М раствора хлористого натрия до исчезновения сульфата аммония (проба с хлористым барием), затем проводят повторный анализ против 0,063. М фосфатного буфера, рН 7,5, ионная сила 0,25 (достигается внесением хлористого натрия). После диализа раствор центрифуЗаказ 2809/223Тираж 1029 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5 Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Прое.тная, 4 гируют 15 мин при 2500 об/мин. Измеряют объем надосадочной жидкости и опре.деляют задержку полимеризации мономерного фибрина продуктами деградации полученной фракции белков мочи.ЬТаким образом из 100 мл мочи получают 2 мл белковой фракции. Для определения задержки полимеризации 0,1 мл 0,5%-ного раствора мономерного фибрина вносят в смесь, содержащую 1,6 мл 0 063 М фос-,фатного буфера рН 7,5 0 1 мл соевого ингибитора трипсина (8,5 мг растворяют в 5 мл этого же буфера), 0,1 мл белковой фракции и 0,1 мл 1,810 М хлористого . кальция. Регистрируют время полимериэации секундомером, и, если время полимери 16 зации выше 15 мин, то выделенную ПДФ-фракцию белков перед внесением разбавляют. / Перед этимопределяют время полимеризации в контроле (вместо белковой фракции вносят буфер), которое в атом примере 93 сек. После внесения в опытную смесь 0,1 мл разбавленной в 4 раза фракции белков время полимеризации мономерного фибрина 372 сек.Из этих данных рассчитывают эффект тор- Мможения по формуле:а=фогде: т - время полимеризации мономерного фибрина в исследуемой пробе:. о - в контроле; 36и - эффект торможения полимеризации. В приведенном примерей= =ъ.ПоЗТ 2. -95 калибровочной кривой зависимости эффекта торможения полимеризации мономегного фибрина от концентрации продуктов деградации фибриногена (фибрина) определяют весовое количество ПДФ в пробе, Расчет проводят по формуле: а У ВЧгде: С - количество продуктов деградации в исследуемой моче, мг/100 мл;а - количество продуктов деградации в пробе, определенное по калибровочной кривой, мг/мл;Ч - объем выделенной белковой фракции, мл;В - разведение белковой фракции для внесения в пробу;Ч - обьем белковой фракцйи, внесенной в пробу мономерного фибрина, мл,Формула изобретения Способ количественного определения продуктов деградации фибриногена и фибрина в моче, включающий выделение белков и их последующую обработку, о т л и ч а ю - ш и й с я тем, что, с целью упрощения диагностики почечных заболеваний, получен- ной белковой фракцией воздействуют на мономерный фибрин в присутствии фосфатного буфера, соевого .ингибитора. трипсина и хло. ристого кальция, а количество продуктов деградации фибриногена и фибрина опреде. ляют по увеличению. времени полимериэации мономерного фибрина.