Способ определения возраста у самцов крыс

ЯО 026777 А СОКИ СОВЕТСНИХ ОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 3 ША 61 В 1ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ОПИСАНИ К АВТОРСКОМУ(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ у. САМЦОВ КРЫС по морфометрич .пеказателям животных, о т щ и й с я тем, что, с цель ния точности, дополйительно определение концентрации те на в плазме крови и определ ности поглощения Н -тестос клетками кожи гепитальной о а отношение,.этих величин исп ,.для установления возраста. Панченколедова-:логииВ -ис рин Лабора-с.15.,197 330539230-1502.03.8107.07 83. Вюл.925Л.Ю. Сергиенко и ЛХарьковский научнокий институт энйокии горионов599.323.4 (088.8)55 Определение активности поглощения НЗ -тестостерона анйрогенизависимой тканью - кожей проводят сле 60 дующим образом. Обездвижив животное с помощью эфирного наркоза, удаляют евротяной покров на ограничениои участке кожи мошонки. Кожу обра батиВжют спиртому протирают насухо 65 Изобретение относится к экспериментальной медицине и может бытьиспользовано при проведении любыхмедикобиологических экспериментовСовременная экспериментальнаямедицина.и биология требуют четкогоуказания возраста или возрастногопериода лабораторных. животных, накоторых проведен тот или иной эксперимент, так как у животных различныхвозрастаных групп одни и те же воздействия вызывают не толжко количественно, но и качественно неоднотипные реакции. Отсутствие в научныхпубликациях указаний на возраст .экспериментальных животных лишает 15исследователей возможности сопоставлять результаты, полученные в разныхлабораториях.Наиболее точным способом определения возраста, а значит и Возрастногопериода, является их паспортизация.Однако при массовом разведении животных в питомниках эта работа по темили иным причинам не проводится, инаучно-исследовательские институтыи лаборатории часто снабжаются не. паспортизированными животными,Известен способ установления возраста животных по весу и длине ту.ловища Я .. 30Однако эти эоометрические параметры могут служить лишь ориентировочными показателями, так как в большей мере зависят не только от возраста, но -и условий содержания, кормления, от индивидуальных особенностей, линии и породы животного. Известный способ не обеспечивает точ. ного определения возраста, а зна,чит и возрастного периОда лабора"торных животных. 40Целью изобретения является повышение точности при определении возраста, у самцов крыс,Цель достигается тем, что согласно способу определения возраста усамцов крыс по морфометрическим показателям животных, дополнительнопроводят определение концентрациитестостерона в плазме крови и определение активности поглощения,Нз-тестостерона клетками кожи гепитальной области, а отношение этихвеличин используют для установления .возраста.П р и м е р. Тестостерон плазмыкрови крыс линии Вистар определяютспектрофлоуриметрическим.методом . стерильным тампоном и, захватив браншами стерильного пинцета, срезают еестерильной бритвой, Захват кожинеобходимо производить таким образом, чтобы после срезания выступили.мелкие капли крови, что свидетельствует о проникновении в глубокие слоикожи. Ранку зашивают 2-3 швами, акусочек кожи, взвесив на торсионныхвесах, помещают во флакон со средойИгла, содержащей 0,5 мкк НЭ. -тестостерона в 1 мл среды. Флаконы находятся в термостате при 37 цС. Нафлаконах отмечают номер животногои время йачала инкубации, Продолжительность инкубации биопсий - 1 ч.После этого их извлекают, промываютв 3-х порциях подогретого до 37 Сраствора Хэнкса и гомогенизяруютв концентрированной мураввиной кислоте. Объем гомогената 1,5 мл. Гомогенат переносят во флаконы, зали-вают 15 мл диоксанового сцинтиллятора и радиоактивность проб считываютна жидкостном сцинтилляционномсчетчике СБС.-2 или на другом аналогичном приборе. Величину активностипоглощения НЭ -Тестостерона биопсиямкожи выражают в имп/мин/мг ткани.Получив указанные величины, определяют отношение концентрации тесто"стерона в плазме крови у данногоживотного к активности поглощенияего меченого аналога кожей моШонкиэтого же животногоТ/Ап) Величинуотношения выражали в относительныхединицах.В таблице отражены результаты,полученные при подсчете отношенияуровня тестостерона и активностипоглощения Нъ -тестостерона кожейгенитальной области 150 крыс-самцов1-б дней жизни (период новорожденности или неонатальйый период),120 крыс 15-30 дней жизни (неполовозрелый период), 80 крыс 34-45дней жизни (период полового созревания, 52 крыс 70-90 дней жизниподслучный период), 100 крыс (120300 дней жизни) репродуктивныйпериод , 150 крыс 12-18 мес, зрелый возраст и 60 крыс 20-24 месЬериод престарческих изменений).Обнаружено, что несмотря на индивидуальные колебания уровня тестостерона.и активности кожной рецеп"ции его мечечного аналога величинаих отношения остается постоянной,прйсущей тому или иному возрастномупериоду, что и позволяет использовать эту величину в качестве критерия возрастного периода,Сохраняющееся внутри возрастногопериода постоянство отношения указанных величин связано с тем, чтоэти физиологические параметры составляют 2 звена. функциональной системы фгормон-рецепторф. Поскольку ф1026777 Возраст животных Отношение Т/Ап Возрастной период 1-6 дйеййдней 1,1 10 ф 6,0 10 5 1,310 3,010 2,010 1,510 . НеонатальныйНеполовозрелый .Половое созреваниеПодслучныйРепродуктивныйЗрелый возраст; 35-45 дней70-90 дней120-300 дней12-18 месяцев20-24 месяца Период предстарческихизменений вввюйвюввфюав вФ.Составитель А, МакаровРедактор М. Товтин Техред О,НецеКорректор Ы. Макаренко Заказ 4609/6 Тираж 713 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская иаб., д.4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 сам тестостерон принимает участиев регуляции синтеза специфическихрецепторных белков в тестостерончувствительных тканях, а активностьрецепции и метаболизма в тканяхявляется одним из факторов, определяющих .новообразование и секрециюгормона, между гормоном и активнос-в,тью его поглощения тканями постоян-.но поддерживаются определенные количественные соотношения, характерные 1для того или иного этапа развитияорганизма.В, виварий .института из питомника.поступила партия крыс-самцов, возраст которых неизвестен., Партия состоит из 120 животных, вес которых110-200 г, т.е, по весу животныемогут принадлежать как к неполово.зрелому, так и к репродуктивномувозрастному периоду. 2012 животных 4 шт.весом 110. 115. г, 4 - 150-170 г, и 4 - 190.200 г) Исследуют уровень тестостерона плазмы т), активность поглоще-ния Нэ -тестостерона Арф и определяют отношение указанных величин Т/Ап),Получены следующие результаты(приведены средние величины),Х группа: Т - 0,15 мкМ/л;Ап . 50,0 имп/мин/мг,Т/Ап - З,010-П группа: Т - 0,14 мкМ/л",Ап имп/мин/мгт Т/Ап - 3, 010Щ группа: Т - 0,17 мкм/л,Ап - 53,3 имп/мин/мгфТ/Ап - 3,110у всех 3-х групп животных величина отношения исследуемых нараметров одинаковая, характерная длярепродукт вного периода. Оопоставление полученных результатов и данныхрегистрации указанной партии живот,ныхв питомнике показало, что вывод.об одинаковом возрасте крыс верен,а разница в весе животных объясняет.ся тем, что в питомнике не выдерживаются нормы рассадки животных поклеткам.Преимущество предлагаемого спо,соба заключается в том,.что он основан на определении физиологическихпоказателей, имеющих четкую возрастную динамику и не зависящих отусловий содержания животного.. Способ позволяет объективизиро.вать процеса определения возрастныхпериодов крыс-самцов, т.е, повыситьточность проводимых йаучных экспе-:риментов, сделать сопоставимимирезультаты работ, проводящихся вразных лабораториях. После установления видовых уровней названныхвеличин способ может быть примененупя оцределения возрастных периодов у особ мужского пола другихЭндов животных и человека.