Способ разделения аминокислот

,013 Гидроксипролин Аспарагиновая кислота 7 0,013,01 1,7 3крилатную матрицу. Матрица обладает повы. щенной гидрофильностью из.за наличия в ней гидроксильных групп, связанных с алифатическим углеродным скелетом. Наличие гидроксильных групп в матрице препятствует не- З ионным взаимодействям между матрицей и разделяемыми аминокислотами, расширешпо их полос в злюенте и смешиванию при 18 - 20 С.Предлагаемый способ осуществляется еле. дующим образом, 1 ОРазделяемую смесь 1 х 10- 1 я 10М аминокислот растворяют в буферном растворе 0,2 н, цитрата натрия (рН 2,2). Раствор элюируютс колонки размером 27 - 50 х 0,8 см, наполненной гликольметакрилатным катио питом сферономс диаметром частиц 10 - 63 мкм, водными буферными растворами цитрата натрия. Ло 25.ой мин от начала хроматографирования концентрацию иона нат. рия в элюенте поддерживают в пределах 0,1 - 0,2 и а рН 3,0 - 3,25. От 25.ой и до 60-ой мин от начала хроматотрафирования концентрация иона натрия в элюенте в пределах 0,1 - 0,2 н., а рН 4,2 - 4.3, от 60 до 130-ой мин от начала хроматографирования концентрация иона натрия в элюенте в пределах 1,0 - 1,2 и а рН 6,4 - 6,5, Все элюенты содержат также 0,01% каприловой кислоты, а элюент с рН 3,0 - 3,25 также 0,5% тиодигликоля и 4,0%, этилового спирта. Скорость элюирования 60 мл/ч при давлении 2 - 20 атм, ТемлератуП р и м е р 2. Аминокислоты: пролин глутаминовую кислоту, лейцин, фенилаланин, гистндин, артинин (10" М каждой) раство. ра в колонке в зависимости от температурыокружающей среды (18 - 20), Колонка ненагревается и не термостатируется.П р и м е р 1, Аминокислоты: гидроксипролин, аспарагиновую кислоту, валин, метионин, лейцин, фенилаланин, тирозин, гистидин,аргинин 110 М каждой) растворяют в буферном растворе 0,2 н. цитрата натрия,(рН 2,2), Раствор элюируют с колонки размером 27 х 0,8 см, наполненной гликольметакрилатным катионитом сферономс диаметром частиц 10 - 25 мкм, водными буферным растворами шгтрата натрия. До 25-оймин от начала хроматографирования концентрация иона натрия в элюенте 0,1 н., рН 3,0.От 25-ой мин концентрация иона натрия вэлюенте 0,1 н., рН 4,2, От 60.й до 100-ймин от начала хроматографирования концепт.рация иона натрия в элюенте 1,0 н рЯ6,4. Все элюенты содержат также 0,01% каприловой кислоты, а элюент с рН 3 также и0,5% тиодигликоля и 4,0% этилового спирта.Скорость элюирования 60 мл/ч при давлении 15 - 20 атм. Времена выхода аминокислот, мин: гидроксипропилина 19, аспарагино.вой кислоты 22, валина 30, метионина 35,лейцина 43, фенилаланнна 65, тирозина 76,гистидина 80, аргинина 92. Температура вколонке 18 С. Колонку не нагревают и нетермостатируют.Результаты анализа представлены в табл. 1. яют в буферном растворе 0,2 н. нитратаатрия (рН 2,2). Раствор элюируют с кодои размером 27 х 0,8 см, наполненной гли979991 6жат также 0,01% каприловой кислоты, аэлюент с рН 3,25 также и 0,5% тиодиглико.ля и 4,0% этилового спирта. Скорость элю.ирования 60 мл/ч при давлении 3 - 6 атм.5 Времена выхода аминокислот, мин: пролина28, глутаминовой кислоты 39, лейцина 48,фенилаланина 62, гистицина 77, аргинина92. Температура в колонке 18 С, Колонкуне нагревают и не термостатируют.14 Результаты анализа представлены в табл. 2 Таблица 2 Анализируемые аминокислоты Взято, мг Найдено, мг Относительная ошибка, %+0,0 Аргинин ЗЯ рН 4,3, От 60-ой до 130-ой мин концентрация иона натрия в элюенте 1,2 н., рН 6,5.Все элюенты содержат также 0,01% каприловой кислоты, а элюент с рН 3,25 такжеи 0,5% тиодигликоля и 4,0 этилового спир- И та. Скорость элюирования 60 мл/ч при давлении 2 - 4 атм. Времена выхода аминокислот, мин: аспарагйновой кислоты 31, глицина 36, изолейцина 44, тирозина 50, лизина73, аргинина 97. Температура в колонке 40 20 С. Колонку не нагревают и не термостатируют,Результаты анализа представлены в табл, 3.Таблица 3 Взято, мг Найдено, мг Относительная ошибка, %.1,7 Аргинин 5кольметакрилатным катионитом сфероном.8 ,с диаметром частиц 25 - 40 мкм, водными буферными растворами цитрата натрия, До 25.ой мин от начала хроматографирования концентрация иона натрия в элюенте 0,1 н рН 3,25, От 25-ой до 60.ой мин концентрация иона натрия в элюенте 0,1 н, рН 4,3, От 60.ой до 130-ой мин от начала хрома. тографирования концентрация иона натрия в элюенте 1,0 н рН 6,5. Все элюенты содерП р и м е р 3. Аминокислоты: аспарагиновую кислоту, глицин, изолейцин, тирозин, лизин, аргинин (10М каждой) растворяют в буферном растворе 0,2 н цитрата натрия (рН 2,2), Раствор элюируют с колонки размером 50 х 0,8 см, наполненной гликольметакрилатным катионитом сферономс диаметром частиц 40 - 63 мкм, водными буферным растворами цитрата натрия. До 26-ой мин от начала хроматографирова ния концентрация иона натрия в элюенте 0,2 н рН 3,25. От 25-ой до 60-ой мин концентрация иона натрия в элюенте 0,2 н.,0,0115 0,0147 0,0131 0,0165 0,0155 0,00133 0,00075 0,00131 0,00181 0,00146 0,00174 0,0116 0,0150 0,0129 0,0167 0,0156 0,0174 0,00131 0,00075 0,00129 0,001820,00144 0,00171Составитель В, Гладков Техред А.Ач Корректор Л. Бокшан Редактор В, Лазаренко Заказ 9349/33 Тираж 887 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 7 97999Технико-экономический эффект предлагаемого способа заключается в упрощении процесса, т.е, в отсутствии необходимости подогрева, термостатирования и другой регулиров.ки температуры колонки. Упрощается хрома. Зтографическая аппаратура и ее обслуживание,а также экономится электроэнергия,Формула изобретения 19 Способ разделения аминокислот путем растворения анализируемого вещества в цитратном буферном растворе, пропускания через колонку, заполненную катионообменным сорбентом, 3 1 8с последующим элюированием сорбированного вещества растворителем на основе цитрата натрия, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью упрощения способа, в качествекатионообменного сорбента используют гликольметакрилатный катионит с размером зерен 10-б 3 мкм и процесс разделения ведутпри температуре колонки 18 - 20 С,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Козаренко Т. Д, Ионообменная хроматография аминокислот, М., "Химия", 1975,с. 17 - 32.2. Авторское свидетельство ЧССР У 150094,кл. О 01 М 31/08, 29,09,72 (прототип).