Способ определения -глобулинов сыворотки крови

О П И С А Н И Е ,953562ИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советски кСоциалистическиеРеспубликав делам изобретений н открытий(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ б -П 10 БУЛИНОВСЫВОРОТКИ КРОВИ 1Изобретение относится к лабораторным исследованиям, в частностиспособам исследования крови и люминесцентному анализу,Известен способ определения ф-глобулинов в сыворотке крови путем раз 5деления белков на фракции. Для этихцелей используют методы электрофореза, фракционирование через слойгеля сефадекса, а также осаждениебелков растворами солей. Затем определяют количество белка в каждойфракции отдельно, предварительно определив количество общего белка,содержащегося в сыворотке крови, пооптической плотности, коэффициентурефракции, специфической окраскебелков красителями 1,Известен также способ определениябелков в биологических жидкостях опо флуоресценции триптофана и тирозина, который заключается в том,что флуоресценцию возбуждают ультра;фиолетовыми лучами в области спектров поглощения ароматических аминокислот и измеряют суммарное их излучение Я ,Тирозин и триптофан входят в состав альбуминов и глобулинов, поотому этим способом измеряют только об"щую концентрацию белков в сыворотке.,Разделение же их на фракции для определения б -глобулинов требует срав"нительно длительного времени, большого количества сыворотки и дорогостоящих химических реактивов.Цель изоЬретения - ускорение процесса определения -глобулинов.Поставленная цель достигается тем,что интенсивность флуоресценции три"птофана измеряют в 14-16-ном раство",ре иодистого калия, при длине волны возбуждения 286-306 нм и длиневолны эмиссии 340-370 нм.При выЬранных условиях измеренийфлуоресцируют в основном тольковнутренние остатки триптофана, которых много вЗ-глобулинах и нет в3 95альбуминах, поэтому альбумины и другие белковые фракции не мешают апре"делению-глобулинов,П р и м вр 1. С целью определитьпогрешность метода, влияние другихбелковых Фракций на флуоресценцию-глобулинов отбирают 17 сыворотоккрови норок, у которых содержаниебелковых фракций, определенных методом электрофореза, колеблется вшироких пределах: альбуминов от218 до 3,85 г 3,3 -глобулинов от0,63 до 2,49 г 3,-глобулинов от1,35 до 2,63 г 3, " -глобулинов от0,29 до 4,25 г 4. Сыворотку кровиразводят в 15-ном растворе иодистого калия.Результаты определения "-глобулина представлены в табл. 1,установлено, что в присутствиитушителя поверхностных остатков триптофана (К) -глобулины корректируют в высокой степени с Флуоресценцией сывороток (г =0,98, Р ( 0,001).Другие белковые фракции не влияютна интенсивность Флуоресценции, начто указывают их низкие коэффициенты корреляции (г ), которые не до"стоверны и близки к коэффициентамкорреляции белковых фракций с у-глобулинами, определенных методом электрофореза (г.).Результаты испытаний позволяютсчитать возможным определение -глобулинов по Флуоресценции внутреннихостатков триптофана при выбранныхусловиях измерения, которые указаны 3562 4в заявке со средней относительнойошибкой 93.П р и м е р 2. Количество-глобулинов в сыворотках крови 17 норок з определяют предлагаемым способом поуравнению; у=0,065, х=4,51, где уконцентрация "-глобулинов, г 3,х - интенсивность флуоресценции сыворотки крови, в 154-ном. растворе 1 о иодистого калия ( разведение 1:400измеренной в относительных единицахна спектрофлуориметре ИРГпри чувствительности 1 и полуширине щелей10 нм, длине волны возбуждения 296 нм 15 длине волны эмиссии 350 нм.Результаты определения -глобулинов сывороток крови предлагаемымспособом в сравнении с известнымметодом - зональным электрофорезом 2 о представлены в табл. 2.Средняя относительная ошибка+3=8,6 при колебании белковых фракций в сыворотке крови: альбуминовот 2,18 до 3,85 г 3, Я"-гЪобулинов 25 от 0,63 до 2,49 г /, г"глобулиновот 1,35 до 2,63 г .По сравнению с известными лабораторными методами определения у-глобулинов Флуорометрический способ отз личается экспрессностью экономиейдорогостоящих реактивов, минимальными затратами труда, включающимиразведение сыворотки ( плазмы) раствором тушителя и Флуорометрию.Предлагаемый способ являетсяультрамикрометодом - для анализадостаточно. одного капилляра крови.Таблица 1,Флуорометрия 81 0,76 0,86 0,056129 3,88 4,2 Б 0,18 формула изобретения Составитель М. Белоусова Редактор А.Козориз Техред И, Рейвес Корректор Н. КорольЗаказ 2 9 73 Тираж 7 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ЛПП Патент , г, Ужгород, ул, Проектная,1. Способ определенияT -глобулинов сыворотки крови, включающий измерение интенсивности Флуоресценции триптоФана, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью уско" рения процесса определения, интенсивность Флуоресценции триптофана измеряют в 14- 16 рвстворе иодистого калия.2, Способ-по и. 1, о т л и ч а щ и й с я тем, что интенсивность флуоресценции триптофана измеряютпри длине волны возбуждения 286306 нм и длине волны эмиссии 340370 нм,Источники инФормации,принятые во внимание при экспертизего1. Биохимические методы исследования в клинике. Под ред. А.А.Покровского, 1969, с. 58-762. Авторское свидетельство СССРЮ 122339, кл, С 01 й 33/04, 1959.