Питательная среда для получения -маннаназы

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоввтсиикСфциапистнчвсиик Республик и 943277(53)М. Кл. с присоединением заявки ЭВ(23) Приоритет С 12 Х 1/20 йвудврстюай виктвт СССР вв яелаи изобретений и етерыткй(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ 3 -ИАННАНАЗЫ 0,24-0,28 1Изобретение относится к микробиологической промцшленности и можетбыть использовано при получении ферментного препарата 1 з -маннаназы.Известна питательная среда для получения р-маннаназы на Вас 111 ця ьцЬ 5Ш 1 ь 6-78, содержащая картофельныйкрахмал, кукурузный экстракт, пивныедрожжи и минеральные компоненты:аммоний Фосфорнокислый двухзамещенный,магний сернокислый, марганец сернокислый, калий сернокислый, хлористый кальций и воду 13.Недостатком данной среды являетсянизкая продуктивность в отношениифермента ф-маннаназы, активность которого 3,5-4,0 Е/мл при продолжительности культивирования 20-24 ч.Цель изобретения - увеличение активности выхода целевого продукта и оснижение его себестоимости,Поставленная цель достигается тем,что среда, содержащая картофельныйкрахмал, жидкий кукурузный экстракт,2двухзамещенный Фосфорнокислый натрий; сернокислый аммоний, сернокислый марганец пятиводный, сернокислый магний, сернокислый калий, хлористый кальций, гидроокись натрия и воду, дополнительно содержит муку из семян люцерны или муку из корней эремуруса в, качестве индуктора при следующем соотношении компонентов, мас.КартоФельный крахмал 5,5-5,7Жидкий кукурузныйэкстракт 3,4-3,6 ДвухзамещенныйФосфорнокислыйнатрий 0,45-0,50Сернокислый аммонийСернокислый марганец пятиводныйСернокислый магнийСернокислый калийХлористый кальцийГидроокись натрия94320,9-1,1 3Люцерновая мукаили мука из корнейэремуруса 0,4-0,6Вода ОстальноеПитательную среду для получения гманнаназы предлагаемого состава получают путем последовательной оптимизации исходнои питательной среды с применением математических методов планирования эксперимента. На послед в 77 4немэтапе оптимизации питательнойсреды, равно как и в начале работы,изучается индукция образования маннаназы бактериями Вас 111 ць юЪС 111 яСпутем включения в питательнуюсреду субстрата галактоманнана илиглюкоманнана),Результаты опытов представлены втабл. 1,Т а б л и ц а 1 3-манна 1Питатель- Индуктор Концентраная среда ция индуктора, 4 Биомасса,условныеединицы Опыт назная, активность,Е/мл,х +Бх сходная известн 38+0(известная) юкоманнан 0,25 5121 7+4, 1 Предлагаемая алактоман Глюкома нан+5,0 семян люцерны 8+ ука изорней эремуруса е еОпыты 1, 6 и 7 проводят вной повторности, опыты 2,проводят в трехкратной повХ - среднее арифметическоесреднеквадратическая ошибк Примеча ятикрат 4 и 5 орности-78 в феркоэффицие т объясняется тем,что амма ВассИ 1 ця мЪС 1- тся индуцируемым ферав полученной среды индуцирующий эффект и глюкоманнана.,5. Такой эффе3-маннаназа ш1 Ы 6-78 являментом, а сособуславливаетгалактоманнан р 1. Приготавливают среду для получения из Вас 11 ц ылЬй 1 ентерах объемом 1,5 том наполнения5 9432В ферментер заливают 300 л подогретой до 600 С водопроводной воды, при перемешивании последовательно ,загружают 42 кг осахаренного картофельного крахмала, 7,5 кг муки из се- з мян люцерны, 1,95 кг (ИН 4)504, 2,25 кг Кф 04 075 кг Й 15 О 45 НО и 0,15 кг МдЯО 4 . Стерилизуют 30 мин при 130 С, После стерилизации охлаждают до 45 ОС. Отдельно в приготовленный чан залива ют 120 л подогретой до 60 С воды и при перемешивании добавляют 26 кг жидкого кукурузного экстракта и 0,15 кг СаС 1 , перекачивают в сателлит и сте77 6 наназная активность культуральной жидкости 550 Е/мл.Данные сравнительной характеристики ф-маннаназной активности культуры Вас 111 ц 5 5 цЬС 1115 6-78 на известной и предлагаемой питательной среде, приведены в табл. 2. Т а б л и ц а 21Питательная среда Показатели Известная Предлагаемаярилизуют в сателлите 45 мин при 15 135 оС. После стерилизации охлаждают до 45 оС и стерильным воздухом передавливают в ферментер. Отдельно в приготовительный цан заливают 120 л подогретой до 60 оС водопроводной воды 20 и в ней растворяют 3,6 кг ИаНР 04 и 0,5 кг ИаОН, перекачивают в сателлит и стерилизуют 30 мин при 130 С.После стерилизации охлаждают до 45 ОС и стерильным воздухом передавливают в фер ь ментер. Стерильную питательную среду охлаждают до 40 оС и засевают культурой Вас 111 ц 5 5 цЬ 11115 6-78, рн при посеве 6,8-7,2. В течение первых двух часов температура падает до 37 ОС и ,поддерживается постоянной во времявсей ферментации. Расход воздуха 55 м/ч до конца ферментации. Продолжительность ферментации 15 ч, Об окончании ферментации судят по максималь 35 ному накоплению Фермента 3-маннаназы в культуральной жидкости. Для определения ф-маннаназной активности биомассу и остатки среды отделяют центрифугированием. В надосадоцной жидкости оп ределяют )Ь -маннаназную активность, которая составляет 550 Е/мл.1 Ь-маннаназную активность определяют по методу ВЛ.Ме 11 еагу, СагЬоЬус 1- га 1 е йе 5 еагсЬ, 67, 213-221, 1978.3 а 4 условную единицу активности принимают такое количество фермента, которое ,дает увеличение оптической плотности при длине волны 590 нм на 0,1 после инкубации реакционной смеси, состоящей из 1,5 мл 0,41-ного субстрата и 0,5 мл ферментного раствора, при 40 оС, рН 5, 8 за 30 мин.П р и м е р 2. Приготовление питательной среды и получение фермента ф-маннаназы производят как в примере 1, только вместо люцерновой муки в состав питательной среды включают 0,6 Ф муки из корней эремуруса. -йан Время культивирования, ч-маннаназыв 1 м Е 2,2 106 2,76,10 Как видно из табл. 2 на предлагаемой среде штамм ВаС 111 и 5 5 цЬ 1111 6-78 дает увеличение выхода фермента более, цем в 100 раз.Себестоимость целевого продукта в соответствии с увеличением выхода Фермента снижается на такую же величину, т.е. около 100 раз. По предварительным подсчетам годовая экономицеская эффективность при использоваНии предлагаемой среды, в производстве препаратов р -маннаназы в количестве, необходимом для удовлетворения потребностей винодельческой промышленности СССР (1 О усл. т.) 68 ф 5 тыс. руб. Формула изобретения Питательная среда для получения -маннаназы из Вас 11105 5 ОЬй 1115 С, ,содержащая картофельный крахмал,жидкий кукурузный экстракт, двухзамещенный фосфорнокислый натрий, сернокислый аммоний, сернокислый марганец пятиводный, сернокислый магний, серно- кислый калий, хлористый кальций, гидроокись натрия и воду, о т л и ч а ю3,4-3,6 Составитель И.Привалова Редактор Н.Киштулинец Техред Ж. Кастелевич ДЗаказ 5037/34 Тираж 505 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва) Ж, Раушская наб., д. 4/5Корректор " Муска Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 7 9432 щ а я с я тем, что," с целью увеличе" ния активности и выхода целевого .продукта и снижения его себестоимости, она дополнительно содержит муку из семян люцерны или муку из корней эрему-руса в качестве индуктора при следующем соотношении компонентов, мас. Ф:Картофельный крахмал 5)5-5)7Иидкий кукурузный зоэкстрактДвухзамещенный фос"форнокислый натрий 0,45-0,5Сернокислый аммоний 0,24-0,28 77 8Сернокислый марганецпятиводный 0,09-0,11Сернокислый магний 0)019-0,021Сернокислый калий 0,29-0,31.Хлористый кальций 0,019-0,021Гидроокись натрия 0,06-0,07Мука из семян лю,9- 1, 1церны или мука изкорней эремуруса 0,4-0,6Вода ОстальноеИсточники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССРй) 740830, кл. С 12 0 13/10,. 1978.