Среда для получения протеолитических ферментов

3 971 ферментов путем культивирования продуцента АСОООЮ 1 СЕ 6 "тпОЪцби микроорганизма - стимулятора АС 1 ИСпмчСЕЭ)ОВОСЕо 6 5 Г, содержащая источник углерода и минеральные соли, в том числеуглекислый кальций и двузамешенный фосфорнокислый калий и воду, согласно изобретению содержит в качестве источника углерода глицерин в количестве 1-1,2% и минеральные соли хлористый аммоний иазотнокислый натрий, при следующем соотношении, вес.%,Глицерин 1-1,2Хлористый аммоний 0,00.;-0003Азотнокислый нат- Брий 0,002-0, 02Двузамешенныйфосфорнокислыйкалий 0,011-0,02Углекислый кальций 0,3-04.Водопроводнаявода ОстальноеП р и м е р 1. В предлагаемую среду гр/л: глицерин - 11 М Н,С 1 - О, 02; КН Р 04 - 0,2; Ма МОЬ - 0,2; Са СО- 4 после стерилизации вносят для культивимонокультуры АСЛ ИОпМ Се 9 Г 1 тп 05 цб 5% двухсуточного жидкого посев- ного материала или для смешанного культивирования 5% по объему двухсуточного жидкого посевного материала АСтГтиОБо и 1,25% по обьему двухсуточного посевного материала ИС,ЧОйьСЕис, 5 Г, выращенных на среде, гр/л: соевая мука -ЗО; глюкоза - 40; КИРО, - 0,5; ЙОС 1 - 2,5; Со СО. Культивирование продуцента йротеаз. или смеси продуцента с ДсО 10 - пСЕ чащоба СЕоВ 5 Г осуществляют глубинным способом в колбах на 750 мл со 100 мл среды в качалках (220 об/мин)40 в течение 96 ч при 28 С. По истечении этого времени культуральная жидкость ДС 11 И 01 ПАСОВ Г 1 ИОЬМЬ соцержит 2268 усл.ед/мл фибринолитической активности, 42 каз. ед/мл казеинолитичес- ф кой активности, авсмеси - 4480 усл, ед/мл ед/мл фиЬринолитической активности и 68,4 каз. ед/мл казеинолитической активности. Йелевой продукт получают из культуральной жидкости после отделения 50 центрифугированием клеток методом высаливания сернокислым аммонием 0,8 насьпцения. Полученные результаты показывают, что 55 на предлагаемой среде происходит образование протеаэ фибринолитического и казеинолитического действия для подуцен 877 фта протеаз в 3 раза больше, чем в известном и для смеси актиномицетовв 2,4 раза. Специфичность к фибрину в предлагаемом способе возрастает в 2 раза, в то время как в известном она падаетП р и м е р 2. В предлагаемую среду следующего состава, гр/л; глицерин -1 О; ИН 4 СЕ -0,02;НОВО О,О 2; К НРС,11 СОСО после стерилизации вносят для культивирования монокультурыЬсОиовсев Мйо 5 це 5% двухсуточного:жидкого посевного материала или для смешанного культивирования 5% по объему двухсуточного жидкого посевного материала АС 1 юомСЕэ Ю 0 РОСЕь 5 Г, выращенных на среде, гр/л: соевая мука - 30; глюкоза - 40; КИа.РО, - О,э; ИОСГ -СО СО О. Культивирование продуцента протеаз в монокультуре и смеси продуцента с АсФлиоюсея юоСасеоь 5 Г осуществляют как указывалось выше. По истечении 96 ч ферментативная активность составляет 2073 усл, ед/мл по фибринолизу и 36,5 каз, ед/мл по казеинолизу. Целевой продукт получают из культуральной жидкости после отделения центрифугированием клеток методом высаливания сернокислым аммонием О,6 насыщения.Предлагаемая среда более экономична по сравнению с известной, таК как не содержит дефицитных пищевых компонентов. Процесс культивирования на предлагаемой среде занимает меньше времени, чем в известной, так как выращивание посевного материала требует 2 сут вместо 3 сут в известном.В таблице представлены преимушества предлагаемой средыИз данных, приведенных в таблице,видно, что на предлагаемой среде в моно-культуре актиномицета фибринолитическая активность в 3 раза, а казеинолитическая - в 2 раза выше, чем в известном. При смешанном культивировании на новой среде фибринолиз возрастает в 6 раз по сравнению с чистой культурой известного способа, а казеинолиз только - в 3,7 раза, что приводит к увеличению в 2 раза специфичности к фибрину. Специфичность к фибрину - важное свойство подобного рода ферментов, так какобеспечивает преимущественный гидролиз фибрина беэ воздействия на белки крови, играющие большую роль в гемостазе,Извести сОиощсе1 Ф 0505 8 100 18 10 4 АсОиои 1 сеьЧ 1060 СЕ 05 5 Г . Следы Следь Сл лед Аст.1 иОщСЕсГоиоаоь бфформула изобретенияСреда для получения протеолитических ферментов культивирования продуцента Аслиовзсея готнсьоъ и микроорганизма-стимулятора Ас+1 иотмусее мобасеов 5 Г, содержащая источник углерода и ми неральные соли, в том числе и двузамешенный фосфорнокислый калий и воду, уг-. лекислый кальций, о т л и ч а ю ш а я с я тем, что, с целью упрощения состава среды, снижения ее себестоимости и Ю увеличения выхода протеаз с повышенной специфичностью к фибрину, среда содержит в качестве источника углерода глицерин в количестве 1-1,2% и минеральныесоли - хлористый аммоний и азотнокислый И натрий при следующем соотношении, вес.%:.ВНИИПИ Заказ 8479/9 ГлицеринХлористыйАзотно кис льрийДвузамешефосфорно ки,0 ммоний й нат 0 0 нны слый 0,0 0,0110,3 Ост калийУглекислый кальций Водопроводная вода льное рмацие претел2 М 1 Источники инфо принятые во вниман 1. Авторское свиди экспертизе ьство СССР /20, 1977.тво СССР /48 1972 етельс2 Й 9 сное4 филиал ППП фПатентф, г. Ужгород, ул. Прое 5 971877 4 Таким образом,реализация изобретения себестоимость и увеличить выход протеазпозвмяетупроститьсоставсреды,снизить с повышенной специфичностью к фибрину.