Способ обработки спермы

О П И С А Н И Е (и 673275ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз Советскмк Социалистических Республик(51) М. Кл. А 61 Э 7/02 ГавударатвванвФ каматвт аа делам мввбрвтвнвк я вткрмткк) Авторы изобрет Всесоюзный научно-исследовательс институт коневодства(71) Заявител ОСОБ ОБРАБОТКИ СПЕРМЫ Изобретение относится к области искусственного осеменения животных, а более конкретно к методам искусственного осеменения лошадей спермой, сохораненной при -196 С.Известны способы обработки спермы, , животных, включающие разбавление крио,протектораМи, эквилибрацию, а также инактивацию спермы в анаэробных условиях до замораживания и последующей оксигенацией ( 1 3.Известные способы обработки спермы для повышения живучести и оплодотворяющей способности разработаны применительно к определенному виду сельскохозяйственных животных с учетом физиологических особенностей, физического и биохимического состава спермы производителей. В коневодстве, где острота отбора очень высока, а объект селекции слишкоМ дорог, повышение оплодотворяющей способности спермы отдельных жеребцов после оттаивания имеет особо важное значение. Вся работа строится на использовании особо ценных жеребцов,выдающихся по своим резвостным качествам. В практике много примеров, когдачем выше резвостной класс жеребца, тем,ближе качественные показатели его спер-мы (американский рысак Лоу Гановер1,59; жеребец орловской породы Пион2,00; арабский жеребец Мускат и др.).Целью изобретения является повышение сохранности биологической активнос- вВ ти сперматозоидов после замораживания.Предложенный способ предусматриваетприведение сперматозоидов в обратимонеактивное состояние при переходе вглубокий анабиоз (замораживание доо-196 С), исключающее нарушение структуры клетки и последующую активациюоттаянной спермы.Инактивация спермы заключается вгом, что свежеполученную сперму разбавляют известным способом 11)средой(криопротектором)и быстро (в течение,1 мин) помещают в барокамеру, содержащую гипоксическую смесь с 93-967 о,Ю и 5% ф. В барокамере создаетсядавление 2-3 атм для ускорения диффузии газов через мембрану клетки. Приуказанных гипоксических и гипербарических условиях сперму выдерживают 2030 мин. Оксигенацию спермы проводятв газовой смеси, состоящей из 60-90%0 в течение 8-10 мин,Влияние гипоксического воздействияна сперматозоиды достоверно снижаетподвижность "перед замораживанием",однако после оттаивания подвижностьсперматозоидов в опытной партии спермыдостоверно выше, чем в контрольной.Вдияние гипоксической обработки наподвижность сперматозоидов в баллахприведено в табл. 1.Изменение биохимических показателейприведено в табл. 2.Исследования проводят на сперме жеребцов, каждый овулят делится на 2 час"ти: опытную и контрольную. Данные, приведенные в табл. 2, показывают, что со.держание аденозинополифосфатов послеоттаивания достоверно уменьшилось вконтрольной партии, тогда как в опытныхобразцах этот показатель остается без,изменений.Аденоэиноподифосфаты в основном синтезируются в цитещазматической оболочке сперматозоидов и в мембранах мито.хондрий, Нарушения механизма синтезаАТФ связаны со структурными изменениями и этих органеллах. Об этом можно судить йо данным увеличения содержаниянеорганического фосфора после замораживания, которое происходит не только засчет расщепления АТФ+АДФ, но и за счетпоступдения его в погибшие и поврежденные сперматозоиды,из внешней среды приразрушении их оболочки и изменении ее,й 1 оницательности.Таким образом, оценка спермы по содержанию аденозинополифосфатов, неорга 4нического фосфора и активности "щелочной фосфатаэы" дает точную картину биологической "полноценности" оттаянной сп ермы,5Активизация оттаянной спермы проводится.ся путем обработки газовой смесью, содержащей 60-90% О в барокамере придавлении 2-3 атм в течение 8-10 мин.1 О ТТаким образом, активизация спермы достигается путем оксигенирования при избыточном давлении, Проведенные сравни-:тельные исследования на сперме жеребцов показывают повышение подвижности 15 сперматозоидов после оксигенации.Влияние кратковременной оксигенацииспермы в гипербарических условиях наподвижность сперматозоидов приведено втабл, 3,20 Насыщение оттаянной спермы кислоро-.дом увеличивает. подвижность спермато- .зоидов. Данные этой таблицы по переживаемости снимают сомнения относительно того, что кислород, повышая;окислитедьные процессы, вызывает быстроерас-.ходование питательных веществ половыхклеток и ускоряет их гибель. Образцыспермы, подвергнутые оксигенированиюпосле оттаивания, имеют более высокуюпереживаемость. Особый интерес представляет вопрос о влиянии на оплодотворяющую способ.- ность спермы.Зажеребляемость подопытных кобыл приведена в табл. 4. Результаты таблицы убедительно показывают, что оплодотворяемость кобыл 40опытной группы значительно выше, чем в контрольной, причем эта разница получена в 2-х разных заводах. Преимущество опытной группы по сравнению с контрольной в 50,3% оказалось вполне 45 достоверным, ( Р0,99) .,0 Контрольная Опьп ная (обработка гипоксией в барокамере)4 5 контр вод пыт 6 8 2 2 ь к ботка гипоксиИ в барокамере) ю 4310 ф 3 1,380,2 3,6+0,4 2,2810,3 . 2,21+0,8 0,1 32 1 01 Таблица 2 50 25673275 Продолжение табл, 4 Опытный конный завод Лоу Гановеропыт 2 2 3 . 3 100 3 33,3 контроль Колчедан опыт100 О контроль 3 Прологопыт 1. 100 1 100 контроль По заводу опыт100 контроль 28,5 Всего 17 13 1915 10 76,9 4 266 опытконтроль Составитель А. МакаровРедактор Л. Новожилова Техред М. Петко Корректор Е. Лукач Заказ 3956/4 Тираж 671Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж 35, Раушская набд, 4/5Филиал ППП фйатентф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Формула изобретения1, Способ обработки спермы, преимущественно жеребцов, включарщий разбавление, инактивацию в газовой среде, замораживание-оттаивание и оксигенацию, отличающийся тем,что, с целью повьпцения сохранности биологи ческой"активнбсти сперматозоидов после замораживаний, инактивацию проводят в барокамере гипоксической смесью, состоящей из 93-96% Ь и 4-7% О, при давлении 2-3 атм в течение 20-30 мин 45 2. Способ по и, 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что оксигенацию спермыпроводят в газовой смеси, состоящей из60-90% О в течение 8-1 0 мин,Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе 1. Кундьипев П, П. Значение анабио за и аэробиоза в технологии замораживания семени быка. "Животноводство % 4, 1973, с. 79.