Способ количественного определения рибонуклеозидов

Своз Советских Социапистичвсаих республик(6 Ц Дополнительное к авт. сннд-ву(22) Заявлено 07. 12.76 (23) 2428028/2 54).И. Кл Сч ОХИ 31/1 В Государственный квмнтвт СССР ов делам язобрвтвння н отнрытяйюллетеиь Ж 1 писания 08,01,7 Пата опубликованн 72) Авторы изобретени Микстайс си У,Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам количественного,определения рибонуклеозндов,Известен способ количественного определения рибонуклеозндов, заключающийся в том, что анализируемую пробу окисляют избытком подвой. кислоты с последующим потенциометрическим тнтрованнем в водной среде раствором щелочи.Недостатками способа являются невысокая точность и ограниченность примене. ния, т, е. невозможность анализировать рибонуклеозиды в смеси ЦПо технической сущности и достигаемому результату к предлагаемому способу наиболее близок способ количественного онре.деления рнбонуклеоэидов путем окисленият 5 анализируемой пробы избытком иодной кислоты, восстановления полученного раствора йодидом калия с последующим титрованием тиосульфатом 2.Недостаткам способа является невозмож ность определения рибонуклеоэидов в смеси с дезоксинуклеозидами, замешенными нуклеозидами и основаниями нуклеиновых кислот. Целью изобретения является возможность определения рибонуклеозидов в смеси с деэоксинуклеозидамн, замещеннымн нуклеозндами н основаниями нуклеиновых кислот.Цель достигается опиемваемым способомколичественного определении рибонуклеозидов, заключающимся в окислении анализируемой пробы избытком йодной кислоты, восстановлении полученного раствора глюкозой с последующим добавлением к образовавшемуся раствору органического растворителя - диметилформамида или диметилсульфоксида, нлн формальдегида, илн метилцеллозольва до объемного соотношения вода:органический растворитель ):т - 5 соот ветственно и титрованнем щелочью,Отличительными признаками способа являются восстановление глюкозой, добавление к восстановленному раствору органического растворителя - днметилформамида или диметилсульфоксида, или формальдегида, или метилцеллоэольва до объемного соотношения вода:органический растворитель 1:) - 5 соответственно н титроваиие щелочью.(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕВЕПЕНИЯ РИБОНУКЛЕОЗИЙОВПоложительный эффект достигается прибавлением глюкозы именно после окисленияе -гликолевцх групп анаЛизируемой пробыизбытком йодной кислоты, Глюкоза взаимодействует с остатком йодной кислоты, восстанавливает ее избыток до йодноватой кис.лоти и выделяет при этом. муравьиную кис.лоту.Введение глюкозы обеспечивает выделение муравьиной кислоты в количестве, соот.ветствующем количеству йодиой кислоты.Найдено, что муравьиная кислота количест.веино выделяется при повышенной темпера.туре, причем оптимальной является температура 50 - 60 С.Органические растворители значительно щувеличивают днффереицирующее действиеводы и обеспечивают дифференцированноетитрование йодноватой и муравьиной кислот н кислотных групп рибонуклеозидов. Раздельное титрование осуществляют при объемном соотношении вода;органический раст 2воритель 1:1 - о, Прн более низких соотно.шеннях дифференцирование не достигается,.а при более высоких выпадает осадок, Вкачестве органических растворителей используют метилцеллозольв, диметилформамид,диметилсульфокснд и др, Прибавление ихпосле обработки раствори анализируемойпробы йодной кислотой не Йриводит к положительному эффекту, так как восстановление йодной кислоты в водно-органическихрастворах протекает медленно,Предлагаемым способом содержание рибонуклеозидов определяют одновременно подвум группам - а -гликолевой группе пуринового или пирнмидннового гетероцнкла.Это позволяет раздельно анализировать смеси рибовуклеоэидов с соединениями, которыесодержат только гляколевую или только кислотную группу, т. е. с дезоксинуклеозидамн,замещеинцми нуклеоэидами, основанияминуклеиновых кислот и другими пуринами ипиримидинами.Таким образом, предлагаемый способ заключается в следующем.Иавеску анализируемого вещества (0,050,30 г) растворяет в 2 мл води нли водногораствора формальдегида, точно измеряюти к раствору навески прибавляют 1 - 5 мл0,2 - 1 М водного раствора йодной кислоты.Раствор выдерживают при комнатной температуре 15 - 20 мин. Затем к анализируемому раствору нрибввляют 1 - 2 мл насыщенного раствора глюкозы, нагревают полученную смесь до 50 - 60 С я выдерживают15 - 20 мнн. После этого добавляют 10 -50 мл органического растворителя, нагружают стеклянный я каломельнцй электродыи проводят потенциометрическое титрованиеводным раствором щелочи. Параллельно приготавливают, выдерживают и тнтруют раствор беэ навесик проби, т. е, проводят холостой опыт, Нв кривой тнтроввния аналиэнруемого,австворв появляются двв илн три скачка потенциала: первый соответствует оттитрованию йодноватой кислоты, второй муравьиной кислоты, а третий - кислотнойгруппы пуринового или пиримидинового цикла. Иа кривой титрования холостого раствора два скачка потенциала - первый соот.ветствует оттитрованию йодноватой кислотц, второй - муравьиной кислоты.На чертеже изображены кривые потенциометрического титрования, где:1 - кривая титрования в холостом опыте;2 - кривая титрования при определенииаденозина (пример 1);3 - кривая титрования при определенииинозина (пример .2);4 - кривая титрования при определениисмеси аденозин + инозин (пример 3);5 - кривая титрования при определениисмеси 5-бромуридин + 5-бромурацил (пример 4).0 Пример 1,.Определение аденозина.Навеску аденозина (0,0983 г) растворя- ют в 2 мл воды. К раствору приливают 5 мл0,2 М раствора йодной кислоты. растворостаМяют при комнатной температуре на15 мин. Затем к анализируемому растворуприбавляют 1 мл насыщенного раствора глюкозы, полученнуо смесь нагревают до 50 -60 С и оставляют на 20 мин. После этогодобавляют 30 мл метил целлозольва, приэтом достигается объемное соотношение вода:метилцеллозольв 1:3,7. Далее потенциометрически титруют 0,1014 н, раствором гидроокиси натрия в воде. Параллельно проводят холостой опыт. По кривой титрованияанализируемого раствора (кривая 2,на чертеже) находят, что иа тнтрование муравьиной кислоты расходуется 6,05 мл щелочи,а в. холостом опыте - 9,65 мл. Разностьсоставляет 3,6 мл,Содержание аденозина в образце состав 4 в ляет- .-100 Ф 990/4 в л нет: ц 098 ЗСтандартное отклонение + 0,8 й.Иример 2, Определение инозииа,Навеску инозина (0,1256 г) растворяютв 2 мл воды, к раствору прибавляют 5 мл0,2 М раствора йодной кислоты и смесьоставляют на 15 мнн, Затем прибавляют 2 млнасыщенного раствора глюкозы, полученнуюсмесь нагревают до 50 - 60;С и выдерживают 20 мин. После этого добавляют 50 млдиметилсульфоксида, при этом достигаетсяобъемное соотношение вода;днметилсульфок.сид 1:5. Далее проводят потенциометрическое титрование 0,1123 н, водным растворомгидроокиси тетрабутиламмония, На кривойтитрования появляются три скачка потенэз циала (кривая 3, см. чертеж). Параллельно проводят холостой опыт. По кривой 2находят, что на тнтрование муравьиной кислоты расходуется 5,35 мл титраита, а в холостом опыте - 9,4 мл. Используя разность+ 12-дезокснурнднн 112,1 69,3 69,0 6 Йромурнднн + + 5-бромурвцнп 116,7 91,6 152,8 92,6 Формула изобретения ЦИИИПИ Заказ 7502 а/3Тираж 089 . одписиоеФилиал ППП е Пз 1 ентз,Ужгород, ул.роектнан,5 Еромуриднн 67,7 Способ количественного определения рибоиуклеозидов путем окисления анализируемой пробы избытком йодной кислоты, вос. становления полученного раствора с последующим титрованием, отличающийся тем, что, с целью возможности определения рибонуклеозндов в смеси с дезоксниуклеозидами, замещеннымн нуклеозидами и основаниями нуклеиновых кивот, восстановление ведут глюкозой с последующим добавлением к полученному раствору органического растворителя - днметнлформамида или диметилсульфокснда, или формальдегида, или метилцеллозольва до объемного соотношения вода:органический растворитель 1: 1 - 5 соответственно и титруют полученный раст вор целочью.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:1. Зшворт М. Р. Титрометрические методь анализа органических соединений, М., 1972, ч, 2, с, 800 - ВОЗ2, Гусев А, И Закаранс В. Я. Новые методы определения рибонуклеоз ядов н пуклеозид-фосфатов в их препаратах.3, Всесоюзная конференция по аналитической химии.органических соединений, М,.1976, с. 261.