Способ качественного определения стероидных соединений спиростанового ряда

19) ЮО 11)51) 5 001531 2 САНИК ИЗОБРЕ И К ПАТЕН Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам(54) СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕРОИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ СПИРОСТАНОВОГО РЯДА(57) Изобретение относится к аналитической химии. Сущность изобретения: способ осуществляют путем нанесения исследуемой пробы на хроматографическую бумагу, опрыскивания 0,5%-ным спиртовым раствором ванипина, высушивания при 90 С в течение 3 мин, опрыскивания хлорной кислотой (42%), высушивания при 100 С в течение 3 мин и получения характерного желто-окрашенного пятна50 55 Изобрегение относится к медицине, вчастности к фармации, и может быть применено для качественного анализа спиростановых стероидов, их производных илекарственных препаратов.Известен способ качественного обнаружения стероидов, заключающийся в том, чтоисследуемое вещество предварительно растворяют в 0,5 мл этанола, добавляют 2 мл0,5%-ного раствора ванилина в концентрированной серной кислоте, при этом растворокрашивается, при последующем добавлении по каплям воды наблюдается изменение интенсивности и окраски раствора.Недостатками известного способа являются:неспецифичность и неселективность поотношению к спиростановым стероидам,так как способ является общей цветной реакцией на все известные группы стероидови тритерпеноидов;трудоемкий, выполнение анализа затягивается.Известен способ качественного обнаруженил стероидных соединений при тонкослойной хроматографии, заключающийся втом, что стероиды на хроматограмме проявляют опрыскиванием свежеприготовленным,0,5 оь-ным раствором ванилина в смесисерной кислоты и эталона (4;1). Стероидыпроявляются при комнатной температуреили в ряде случаев с нагреванием при 100 Св течение 5 мин (2),Недостатками способа являются:приготовление раствора требует большой осторожности с соблюдением техникибезопасности;раствор не стабилен при хранении, должен быть свежеприготовленным. Поэтомукаждый раз приходится готовить новую порцию реактива. зто занимает время и не выгодно с экономической точки зрения;использование спирта не вь годно; температурный режим не постоянен; значительноесодержание серной кислоты представляетсобой угрозу для исследователя.Известен способ качественного определения спиростановых стероидных сапогенинов с помощью реактива Санье,заключающийся в том, что исследуемуюпробу наносят на хроматографическую бумагу, высушивают на воздухе, опрыскивают1 О-ным спиртовым раствором ванилина,сушат в сушильном шкафу при 85 С в течение 3-5 мин и снова опрыскивают раствором серной кислоты в уксусном ангидриде(1:12), высушивают при 85 - 90 С. При наличии спиростановых стероидов через 3 минна бумаге появляется характерное желтоепятно (прототип). 5 10 15 20 25 30 35 Недостатками описанного способа являются;приготовление раствора серной кислоты в уксусном ангидриде занимает определенное время и требует большой осторожности с соблюдением требования техники безопасности;уксусный ангидрид, являющийся основной составной частью реактива Санье, обладает сильным раздражающим действием и в первую очередь на слизистые оболочки верхних дыхательных путей, вызывая аллергические реакции, сопровождающиеся 6 ронхоспазмами;раствор серной кислоты в уксусном ангидриде стабилен в течение 3-4 дней, после истечения данного срока вследствие взаимодействия компонентов раствор приобретает желтую, а затем красно-бурую окраску, тем самым окраски, накладываясь друг на друга, мешают точно выявить возникающую желтую окраску, характерую для спиростановых соединений, поэтому раствор готовится при необходимости на непродолжительный срок;предусмотренная концентрация вани- лина, дорогого и не всегда доступного реактива, не выгодна с экономической точки зрения;присутствие серной кислоты способствует обугливанию бумаги, тем самым невозможно четко заметить окраску пятна на бумаге,Целью изобретения является упрощение способа качественного определения стероидных соединений спиростанового ряда. Эта цель достигается тем, что в качестве химического реагента используют хлорную кислоту (42%) и высушивание после обработки кислотой ведут при 100 С.Сущность предлагаемого способа качественного определения спиростгновых стероидов,Каплю раствора исследуемого спиро- Станового стероида наносят на хроматографическую бумагу, высушивают на открытом воздухе при комнатной температуре, опрыскивают 0,5;4-ным спиртовым раствором ванилина, высушивают в сушильном шкафу при 90 С в течение 3 мин, а затем опрыскивают хлорной кислотой (42 О), высушивают при 100 ОС в течение 3 мин, На бумаге появляется характерное желтое пятно.Предлагаемый способ по сравнению с известными способами имеет следующие преимущества,Сокращается в 2-2,5 раза затрата времени, Предлагаемый способ выполняется за 8-10 мин, а прототип за 20 мин. Приготов, ление раствора серной кислоты в уксусномангидриде (1:12) по прототипу занимает 10-12 мин (измерение составных частей, осторожное постепенное смешивание их с постоянным охлаждением под открытым краном и соблюдение техники безопасности).Экономически выгодный;а) предлагаемый способ предусматривает использование 0,5 раствора вани- лина, а прототип - 1 о . Ванилин является дорогим и не всегда доступным реактивом.б) непригодную к использованию испорченную часть стабильного в течение 3 - 4 дней раствора серной кислоты в уксусном ангидриде выбрасывают(прототип). В предлагаемом способе применяется продажная хлорная кислота (42 о ), которая хранится в обычных условиях длительное время и используетсяя при необходимости.Совершенно безопасен и безвреден для организма, Уксусный ангидрид обладает сильным раздражающим действием на слизистые оболочки верхних дыхательных путей при опрыскивании, вызывая аллергические реакции, сопровождающиеся бронхоспазмами (прототип), Концентрированная серная кислота, как вещество, оказывающее местное разьедающее действие, также не лишена отрицательного побочного влияния (прототип). Хлорная кислота (42 ) не обладает побочным отрицательным действием (предлагаемый способ),Позволяет четка заметить окраску продукта реакции. Хлорная кислота (42) не вызывает обугливание хроматографической бумаги при нагревании (предлагаемый способ), а,серная кислота, входящая в состав раствора, способствует обугливанию хроматографической бумаги, вследствие чего нечетко наблюдается окраска продукта реакции (прототип).Примеры проведения способа с указанием стадий и результатов определения конкретных веществ.П р и м е р 1. Каплю 0,001 о -ного спиртового раствора диосгенина наносят на полоску хроматографической бумаги, высушивают на открытом воздухе при комнатной температуре, опрыскивают 0,5 -ным спиртовым раствором ванилина, высушивают в сушильном шкафу при 90 С в течение 3 мин, затем опрыскивают хлорной кислотой (42 о ), высушивают при 100 С в течение 3 мин, На бумаге появляется характерное желтое пятно, подобное яичному желтку, Чувствительность реакции 1:100 000. 5 10 15 20 25 30 35 45 50 55 П р и м е р 2. Каплю 0,001;4,-ного спиртового раствора рускагенина наносили нэ полоску хроматографической бумаги, высушивали на открытом воздухе при комнатной температуре, опрыскивали 0,5-ным спиртовым раствором ванилина, высушивали в сушильном шкафу при 90 С в течение 3 мин, затем опрыскивали хлорной кислотой (42 " ) высушивали при 100 С в течение 3 мин. На бумаге появлялось характерное желтое пятно, Чувствительность реакции 1:100 000.П р и м е р 3. Каплю 0,005;6,-ного спиртового раствора рускозида А наносили на полоску хроматографической бумаги, высушивали на открытом воздухе, опрыскивали 0,5-ным спиртовым раствором ванилина, высушивали в сушильном шкафу при 90 С в течение 3 мин, затем опрыскивали хлорной кислотой (42 ), высушивали при 100 С в течение 3 мин. На бумаге появлялось характерное желтое пятно, Чувствительность реакции 1:20 000.П р и м е р 4. Каплю 0,05 о -ного спиртового раствора полиспонина наносили на полоску хроматографической бумаги, высушивали на открытом воздухе, опрыскивали 0,5 о -ным спиртовым раствором ванилина, высушивали в сушильном шкафу при 90 С в течение 3 мин, затем о;рыскивали хлорной кислотой (42 ), высушивали при 100 С в течение 3 мин. На бумаге появлялось характерное желтое пятно. Чувствительность реакции 1:2000.П р и м е р 5. Каплю 0,001 о -ного спиртового раствора тигогенина наносили на полоску хроматографической бумаги, высушивали на открытом воздухе, опрыскивали 0,5 о -ным спиртовым раствором вани- лина, высушивали в сушильном шкафу при 90 С в течение 3 мин, затем опрыскивали хлорной кислотой (42%), высушивали при 100 С в течение 3 мин. На бумаге появлялось характерное желтое пятно. Чувствительность реакции 1:100 000.(56) Пономарев В.Д. Обнаружения стероидов и тритерпеноидов при помощи альдегидов. Журнал аналитической химии. 1963, т.18, выпуск 1, с.137 - 140.МаийеазТозерЬ ВсегоОз ССХХ. Соог геадейт аког Ясегойз п тЬп - ачег сйгоаатодгарйу, Восбегп е 1 Ьормузс ас(а 1963, 69, М 1, 163-165.Мадаева О.С., Серова Н.А., Четверикова Л.С. и др.: Труды Всесоюзного научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений, Выпуск Х, 1959, М,: Медицина, стр. 229-236.Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента Заказ 3395 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 Формула изобретенияСПОСОБ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕРОИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ СПИРОСТАНОВОГО РЯДА путем нанесения анализируемой пробы на хроматографическую бумагу, обработки спиртовым раствором ванилина, высушивания и обработки кислотой с последующим высушиванием с образованием окрашенного соединения, отличающийся тем, что, с 5 целью упрощения способа, в качестве кислоты используют 42;-ную хлорную кислоту и высушивание после обработки кислотой ведут при 100 С,