Способ получения биостимулятора

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ 2(76) Зеленков Валерий Николаевич(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОС(57) Использование: кормопроизводсдля ускорения технологического пршения качества целевого продукта вчения биостимулятора путем гомоге И МУЛЯ ТОРА тво, Сущность: цесса и повыспособе полунизации тимуса(51) 5 А 23 К 1 16 химическом растворе, отделения осадка, обраотки надосадочной жидкости с последующим отделением осадка в качестве химического раствора спользуют 0,85 - 0,996-ный раствор хлорида натия, гомогенизацию проводят в течение 14 - 18 ч ри температуре 2 - 10 ОС, а обработку надосадочной жидкости проводят при температуре 78 -2 С,1 табл,1 ил.Предлагаемое изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности - к кормопроиэводству для стимуляции прироста живой массы,Известен способ получения биостимулятора путем гомогенизации измельченной железы тимуса в химическом растворе, отделения осадка, обработки надосадочной жидкости с последующим отделением осадка,Однако, известный способ получения биостимулятора длителен, качество целевого продукта невысокое.Цель предлагемого изобретения - ускорение технологического процесса, повышение качества целевого продукта, увеличение сохранности поголовья.Предложенный способ получения биостимулятора прост, промышленно применим.В научно-технической и патентной лите- ратуре не известны технические решения, содержащие признаки аналогично предлагаемым, т,е, предложение соответствует критериям изобретения "новиз, а" и "изобретательский уровень",П р и м е р 1. 0,6 кг замороженного тимуса телят (-40 С) измельчают на мясорубке. К полученному фаршу добавляют 3 л 0,856 раствора йаС 1, Экстракцию биоактивных веществ проводят в течение 14 ч при температуре 2 С при периодическом перемешивании.По окончании экстракции субстрат отфильтровывают от жмыха через капроновое сито. Фильтрат подвергают термообработке на водяной бане при температуре 80 С в течение 15 мин, Раствор охлаждают до 2- 4 С и отделяют осадок фильтрацией через 6-слойную марлю, Полученный раствор доводят до объема 6 л 0,9 раствором МаС 1. Определение концентрации полипептидов проводят.при 275 нм спектрофотометрически. В результате конечный препарат содержит 12 мг продукта в 1 мл раствора,Выход препарата составляет 120000 мг (120 г) из 1 кг тимуса.П р и м е р 2. 0,4 кг замороженного тимуса телят (-40 С) измельчают на мясорубке, К полученному фаршу добавляют 2 л 0,9 раствора йаС, Автолиз субстрата проводят в течение 18 ч при температуре 10 С при периодическом перемешивании. По окончании экстракции отделяют жмых от раствора фильтрацией через капроновое сито. Фильтрат подвергают термообработке при 80 С на водяной бане в течение 10 мин, Раствор охлаждают. Осадок отфильтровывают через 6-слойную марлю. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Полученный раствор доводят до объема 4 л 0.9 О раствором КаС 1. В результате конечный раствор содержит 11 мг продукта в 1 мл. Выход биоактивных веществ полипептидной природы составляет 110000 мг (110 мг) из 1 кг тимуса,П р и м е р 3, 2 кг замороженного тимуса телят (-40 С) измельчают на мясорубке, К полученному фаршу добавляют 10 л 0,97 ь раствора МаС 1. Автолиз субстрата проводят при периодическом перемещивании при температуре 2-6 С. По окончании экстракции отделяют жмых от раствора фильтрацией через капроновое сито. Фильтрат подвергают термообработке на водяной бане при 80 С в течение 10 мин, Раствор охлаждают до 6 С. Осадок фильтруют через 6-слойную марлю, Отфил ьтро ванн ый раствор доводят до объема 20 л 0,9раствором МаС 1. В результате конечный раствор содержит 12 мг продукта в 1 мл, Выход биоактивных веществ полипептидной природы составляет 120000 мг (120 г) из 1 кг тимуса.Растворы полипептидов, полученные в соответствии с примерами 1 - 3, стерилизуют с использованием стандартного фильтрационного оборудования,Испытания полученных образцов на токсичность и пирогенность по стандартным методикам на животных показали безвредность и апирогенность полученных предложенным способом препаратов,Для проверки полученных образцов на количественное содержание в них пептидов различных молекулярных весов проведен хроматографический анализ препаратов в геле Сефадекса Г - 50 с измерением оптической плотности фракций препарата при 260 нм,Для сравнения в тех же условиях был испытан коммерческий препарат Тималин (ВФС- 1571 - 85) производства Мясоконсероного комбината "Новосибирский",Хроматографические профили препаратов приведены на чертеже, на котором обозначено: 0 - хроматограмма препарата "Тимарис"; 1,2,3 - хроматограммы препарата "Тимарис", полученного по предложенному способу.Как видно иэ чертежа препарат Тимарис, полученный предложенным способом, существенно отличается от препарата Тималин прототип) своей гомогенностью и отсутствием высокомолекулярных фракций с м.в.60000 дальтон. В препарате Тимарис содержится до 99,5 О полипептидов с м,в, меньше 12000 дальтон, а в прототипе только.80.Как видно из чертежа способ позволяет получать препараты полипептидной приро2004159 ды с хорошей воспроизводимостью по содержанию пептидов.По своим характеристикам препарат Тимарис близок к пептидным препаратам под названием Т-активины.Изучение биологической активности полипептидного препарата Тимарис проведено в реакции "активного" розеткообразования /аЕ - РОК/ обработанных трипсином тимоцитов морской свинки с эритроцитами кролика по стандарту определения биоактивности для тималина.(См. В ф С 42-1571 - 85 Тималин).Данные испытаний приведены в таблице,В соответствии с ВФС 42 - 1571 - 85 препарат считают биологически активным, если при снижении среднеарифметического числа РОК при воздействии трипсина по сравнению с нормой препарат восстанавливает количество РОК не менее чем на 40 по сравнению с контролем. формула изобретения СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОСТИМУЛЯТОРА путем измельчения исходного сырья, фильтрации, термооб работки, отличающийся тем, что в качестве исходного сырья используют ткань железы - тимуса, измельчение ведут в присутствии 0,85)ь-ного расКак видно из таблицы препараты Тимарис, полученные по предлагаемому способу,являются биоактивными по единому критерию с прототипом.5 Таким образом, предложенный способпо сравнению с прототипом менее трудоемок, исключает стадии использованияЛ ВЖ, сокращает время реализации, отличается простотой, содержит меньшее количе 10 ство операций,Наряду с этим препарат Тимарис не уступает по основным показателям прототипу(биоактивность, токсичность, пирогенность), превосходя Тималин по достигаемо 15 му качеству очистки,Препарат Тимарис, полученный предложенным способом, может использоваться вветеринарной практике как иммуномодулятор и биостимулятор.20(56) Авторское свидетельство СССРМ. 1695869, кл. А 23 К 1/00, 1991. твора хлористого натрия, перед фильтрацией измельченного сырья проводят экстракцию биоактивных веществ в течение 14 - 18 ч при 2 - 10 С, причем термообработку фильтрата ведут при 80 С в течение 10 - 15 мин, затем его охлаждают, дополнительно фильтруют и разбавляют раствором хлористого натрия,, ул.Гагарина, 1 Редактор Заказ 33 мл опт цмоз фло тмосгь Тираж Подписно НПО "Поиск" Роспатента13035, Москва, Ж, Раущская наб., 4/5