Способ антиоксидантной терапии

(5 ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) Е ИЗОБРЕТЕСВИДЕТЕЛЬСТВУ ИСАН АВТОРСКОМ осится к медицидантной терапиидля лечения ировождающихсно восстановзме. Цель - иффекта. Для этоании с аскорбини доэ (2,5-3,5):1 ине, в часи может атоломчея нарушеительных овышение, го испольовой кисОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНО(71) Ленинградский государственный институт усовершенствования врачей им. С.М.Кирова(56) Костюшов Е.В. Роль тиол-дисульфиднойи аскорбатной окислительно-восстановительных систем в патогенезе позднего токсикозабеременных./Авторефер,дисс.канд.мед.наук.- Минск, 1984, с,20. Изобретение относится к медицине, вчастности к проведению антиоксидантной терапии при состояниях, сопровождающихся нарушениями окислительно-восстановительных процессов в организме.Известно использование унитиола и ас корбиновой кислоты как в отдельности, таки в сочетании для антиоксидантной терапии.Наличие в молекуле унитола двух сульфгидрильных групп с ослабленнойсвязью Я-Н и подвижного атома водорода, наделяет его выраженными антиоксидантными свой, ствами. Препарат способствует повышению уровня восстановленных тиолов, концентрации эндогенных ниэкомолекулярных тиолов (регенерация глютатиона, через глютатион, а также и непосредственно, спо. собствует регенерации аскорбиновой кислоты (АК) (восстановление ДАК); активирует.глютатионредуктаэу; способен подвергать восстановительному расщеплению доступ(54) СПОСОБ АНТИОКСИДАНТНОЙ ТЕРАПИИ(57) Изобретение отнтности к антиоксбыть использованоских состояний, сопнием окислительпроцессов в органиантиоксидантного эзуют унитиол в сочетлотой в соотношени ,1 ил.а ные белковые ЯЯ-группы; по принципу хелатных связей или комплексообразования связывает избыток металлов с переменной- ф валентностью, каталиэирующих окисление СО (медь, железо); восстанавливает окисляю- О щие агенты; сдвигает редокс-потенциал в а сторону превалирования восстановленных д эквивалентов в небелковой тиол-дисуль- СО фидной и аскорбатной окислительно-восстановительных системах, что способствует стабилизации структур; обладает гидрофильными и гидрофобными свойствам, чем обеспечивается возможность проявления а антиоксидантной активности препарата как в водной, так и липидной фазах клетки,Выраженные антиоксидантные свойства аскорбиновой кислоты обусловлены наличием в ее молекуле диенольной группы (-СОН-СОН-). В частности, аскорбиновая кислота предохраняет гемоглобин от окисления и влияет на связывание гемоглобином кислорода, восстанавливаетадреналин, окисля 1 ощийся в процессе егодействия, а также увеличивает кислороднуюемкость крови, препятствует резкому падению уровня кислорода в тканях и органах,уменьшает суммарное потребление кислорода организмом, участвует в регуляциимембраной проницаемости,Вместе с тем следует особо подчеркнуть, что унитол и аскорбиновая кислота,являясь синергистами, свои антиоксидантные свойства наиболее проявляют при использовании их в. сочетании.Однако дозы и соотношение их в этомсочетании не разработаны,Цель изобретения - усиление антиоксидантного эффекта.Для этого, препараты вводят в соотно-.шении доз унитола и аскорбиновой кислоты2,5-3,5;1,20Выбор оптимальных соотношений и дозпрепаратов был определен экспериментально,При выборе оптимальных соотношенийунитола и АК изучалось их влияние на устойчивость липопротеиновых комплексов в сыворотке крови практически. здоровых лиц.С этой целью первоначально в сыворотке кроьи определяли исходные показатели. (ЛПК), Затем в 10 сериях исследований сь 1- 30вороточные ллпопротеиды инкубировали втечение 10 мин при 37 + 0,1 С в среде,содержацей унитол и АК в различных соотношениях концентраций: 1-ая серия - 1:1;2-ая серия - 1,5;1; 3-я - 2;1; 4-я - 2,5:1; 5-я - 353:1; б-я - 3,5:1; 7-я - 4:1; Я-ая - 4,5;1; 9-ая -5;1 и 10-ая 5,5:1.Динамика изменения прочности ЛПК всыворотке крови в зависимости от соотношений концентраций антиоксидантных препаратов в инкубационной среде графическиизображена на чертеке.Устойчивость ЛПК в сыворотке кровивыражали в условных единицах оптическойплотности ДИ, причем, чем выше величина 45ДИ, тем выраженней дестабилизация ЛПК.Полученные данные свидетельствуют,что присутствие в инкубационной Средеунитола с АК в соотношении от 1;1 до 2:1 иот 4 1 до 5,5:1 приводят к дестабилизации 50ЛПК по сравнению сисходными показателями устойчивости ЛПК до инкубации.с указанными антиоксидантами. Тогда как.инкубация препаратов в соотношении от2,5;1 до 3,5:1 напротив, повышает прочность ЛПК, Именно, при таком соотношенииунитола и АК препараты взаимно предохраняют друг друга от окисления, При этом,обеспечивается стабильность окислительно-восстановительного гомеостаза препаратов, что исключает накопление избыточных концентраций их оксипроизводных.Вместе с тем, при меньших или большихсоотношениях антиоксидантов возникаетдебаланс в окислительно-восстановительном равновесии препаратов, что приводит кзначительному увеличению уровня их оксипроиэводных - низкомолекулярных дисульфидов идегидроаскорбиновой кислоты(ДАК). Последние, как известно, обладая тиолопривным действием, окисляют сульфогидрильные группы апопротеиновой части,ЛПК, что приводит к дестабилизации ЛПК.Кроме того, дисульфиды и ДАК, окисляя ЗНгруппы глобулиновой части гемоглобина,снижают способность связывания гемоглобином кислорода и уменьшают его способность диффундировать в ткани.Для выбора оптимальных доз использовали консервированную кровь циркулирующую в замкнутом контуре с мембраннымоксигенатором. Кровь донора насыщаликислородом до Ро; = 300 мм рт.ст, при различных длительностях экспозиции. Затемповторяли то же на фоне вводимого в кровьунитола и АК в различных дозах и соотношениях. До и в процессе оксигенации определяли оксигемоглобин (НЬО 2), РО 2, а такжепроводили биохимический анализ следую- .щих параметров: в цельной крови определяли содержание небелковых, белковых иобщих сульфгидрильных (ЯН) и дисульфидных (БЗ,ЯН) групп, а в сыворотке крови -концентрацию АК и сумму ее окисленныхформ (ОФ), устойчивость ЛПК и уровень одного из конечных продуктов ПОЛ - малонового диальдегида (МДА),Оптимальная доза вводимых антиоксидантов соответствует для раствора унитолаиэ расчета 5,0-7,0 мгкг массы циркулирующей крови,В эксперименте на животных установлено, что продолжительность действия препаратов составляет до 4 часов, Вместе с тем,при добавлении животным половинной дозы унитола и АК каждые 2-3 часа позволяетподдерживать антиоксидантный фон в организме на стабильном уровне.Таким образом, экспериментально были определены оптимальные соотношения идозц препаратов, а также тактика их введения. Полученные результатц подтвердилиполучение выраженного защитного эффектадля крови при гипероксии, а также существенного от 25 до 406 увеличения газотранс-портной функции крови при использованиизаявляемого способа,П ри ме р 1, Больной М., 63 лет. Историяболезни М 2584. Поступил в Ленинградскуюгородскую больницу М 17 14,02.90, в тяжелом состоянии с диагнозом: острый холеци- генатор 0,75-1,0 л в мин, Длительность эксстит. По срочным показаниям была произ- тракорпоральной.оксигенации 4,5 ч.ведена холецистэктомия. Выявлен, За 10-15 мин до процедуры введен 5;6- флегмонозно-калькулезный холецистит, ный раствор унитола (из расчета 1 мл/10 кг) .разлитой перитонит. 5 и 50 ь-ый раствор АК (из расчета 0,4 мл/10 кгВ ближайшем послеоперационном пе- массы тела). В процессе экстракорпоральриоде состояние крайне тяжелое. больнойной оксигенации через каждые 2 ч в/венно адинамичен, кожные покровы бледные, су- вводилось 1/2 первоначально рассчитанной хие, отмечается цианоз видимых слизистых, дозы унитола и витамина "С",небольшойдистальный акроцианоз. Пульс К концу процедуры состояние больного 124 удара в 1 мин, ритмичен, слабо напол- значительно улучшилось. Одышкауменьшиненный, АД/50 мм рт.ст. Дыхание час- ласьдо 24 дыхания в 1 мин,улучшился цвет тое, поверхностное, 32 в 1 мин, при кожных покровов, АД поднялосьдо 115/70 аускультации ослабленное в нижнебоковых мм рт.ст., частота пульса снизилась до 108 в отделах, Р-грамме усиление легочного рис., 15 1 мин. Исследования антиоксидантной, ти"шоковое" легкое. Язык сухой, обложен жел- олдисульфидной и аскорбатной окислительтоватым налетом. Живот вздут, болезнен но-восстановительных систем показало при пальпации, перистальтика кишечника увеличениесниженныхнебелковыхибелкоотсутствует, Лабораторные даннь 1 е: гемог- вых ЯН-групп (небелковых - до 1034,2 лобин 106 г/л, эритроциты 3,2 х 10 л, лей мкмоль/л, белковых - до 7695 мкмоль/л) и12коциты 11,6 х 109 л, гематокрит 34, уменьшение увеличенных ЯЯ-групп (небелпалочкоядерных нейтрофилов 180, сегмен- ковых - до 380 мкмоль/л, белковых - до 2814 тоядерных 73%, лимфоцитов 5;, билиру- мкмоль/л), При этом небелковый коэффицибин 120,3 ммоль/л, .ент ЯН/ЯЯ повысился до 2,72, а белковый -Исследование антиоксидантной, тиол до 2,73.дисульфидной и аскорбатной окислительно- Экстракорпоральная мембранная оксивосстановительных систем выявило . генация проводилась ежедневно. Общее снижение небелковых Н-групп на 51,6% от число процедур 4, Через 12 дней после опенормы (при нормальном содержании 251,3 рациибольнойвудовлетворительномсостомкмоль/л), повышение ЯН-групп в 3 раза по 30, янии переведен в хирургическое отделение, сравнению с нормой 316,2 мкмоль/л, коэф- Выздоровление.фициент ЯН/ЯЯ уменьшился до 0,64 (при П р и м е р 2. Больной К., 68 лет. История норме 3,96). Одновременно, снизился и бел- болезни М 14718. Поступил в Ленинградкавый коэффициентЯН/ЯЯдо 1,71(при нор- скую городскую больницу М 17 22,07,90, с . ме 2,63) за счет уменьшения белковых 35 диагнозом: острый панкреатит, абсцесс ЯН-групп и возрастания белковых ЯЯ-групп, брюшной полости, разлитой гнойный пери- Аналогичные изменения претерпела и ас- тонит. В день поступления. произведена лакорбатная окислительно-восстановитель- поратомия, дренирование полости абсцесса .ная система. Так, уровень АК снизился до и брюшной полости. Состояние в послеопе,045 мг/л (при норме 0,063 мг/л) и уровень 40 рацион ном периоде крайне тяжелое, СознаОф увеличился до 0,090 мг/л (при нормение спутанное, кожные покровы серого 0,066 мг/л). цвета, сухие, видимые слизистые бледные,. Таким образом, у больного отмечалось пульс 140 в 1 мин, ритмичен, малого наполснижение сульфогидрильных групп и АК и нения. Тоны сердца глухие, АД/50 мм преобладание дисульфидных групп и окис рт.ст. В легких дыхание жесткое, 38 дыха- ленных форм АК, тельных движений в 1 мин. На Р-граммеНа фоне безуспешной традиционной типичная картина "шокового" легкого, Житерапии на третьи сутки после операции вот вздут, перистальтика отсутствует. Лабо- проведено лечение предложенным спосо- рато 2 рные данные: умеренная анемия (35 х бом, Экстракорпоральную мембранную ок х 10" -л), выраженныйлейкоцитоз(16,7 х 10 -л) сигенацию осуществлялипо сосдвигомформулы влеводо появления юных веноэно-артериальному контуру через кате- форм нейтрофилов. Билирубин - 76 ммоль/л, теризированную подключенную вену и ка- креатинин - 1,31 ммоль/л, мочевина - 27,7 нюлизированную лучевую артерию. Забор ммоль-л/. Исследование тиолдисульфидной и крови производился иэ вены, возврат - в 55 аскорбатной окислительно-восстановительартерию, В качестве оксигинатора исполь- ных систем выявило резкое снижение ЯН- зовался диализатор ДИП-02. Скорость групп небелковой природы (до 421,5 мкмоль/л перфузии крови через оксигенатор 120 - 150 при норме 1251,3 мкммоль/л) и возрастание мл в мин, а скорость газотока 02 через окси- ЯЯ-групп в 6 раэ (по сравнению с нормой).Небелковый коэффициент ЯН-ЯЯ снйэился1801482 2 до 0,22 (при норме 3,96). Белковый коэффициент ЯН/38 снизился до 1,58 (при норме 2,63), в основном эа счет увеличения 88- групп до 4631 мкмоль/л (при норме 3005 мкмоль/л). Содержание АК составляло 0,026 5 мг/л (при норме 0,063 мг/л), а ОФ увеличилось до 0,161 мг/л (при норме 0,66 мг/л). Коэффициент АК/ОФ уменьшился до 0,16 (при норме 0,95). На фоне безуспешного традиционного лечения проведена ЭМО по 10 венозно-артериальному контуру, с забором крови из подключичной вены, и ее возвратом в лучевую артерию. В качестве оксигенатора использовался диализатор ДИП-02. Скорость перфузии крови через 15 оксигенатор - 120-150 мл в 1 мин, скорость газотока Оз через оксигенатор 0,5-1,0 л в 1 мин. Длительность ЭМО - 5 ч, За .15 мин до ЭМО в/венно были введены: 5-ный раствор унитола (иэ расчета. 1 мл/10 кг массы 20 тела) и 5-ный раствор АК из расчета 0,4 мл/10 кг массы тела). В процессе ЭМО через каждые 2 ч в/венно вводилось 1/2 первоначально рассчитанной дозы унитола и АК.К концу ЭМО состояние больного улуч шилось, пришел в сознание. Восстановился нормальный уровень АД (110/70 мм рт.ст.),. снизилась частота сердечных сокращений до 110 уд в 1 мин, число дыхательных движений уменьшилось до 26 в 1 мин, Небелковый коэффициент. ЯН/83 повысился до 1,16 за счет увеличения ЗН-групп и снижения 38-групп (728,4 и 627,2 мкмоль/л, соответственно). Белковый коэффициент после окончания ЭМО составил 2.18, в основном, за счет снижения 33-групп до 2986 мкммоль/л. Почти вдвое (до 0,057 мг/л) увеличилось ранее сниженное содержание АК и уменьшился уровень ее окисленных форм (0,089 мг/л). Ежедневное пятикратное применение ЭМО вывело. больного иэ крайне тяжелого состояния. Через 12 дней после операции в состоянии средней тяжести больной переведен из реанимации в хирургическое отделение. Выздоровление.Таким образом, как эксперименталь.ные, так и клинические данные демонстрируют высокий антиоксидантный эффект предлагаемого способа.Формула изобретения Способ антиоксидантной терапии, включающий введение унитиола в сочетании с аскорбиновой кислотой, о т л и ч а ющ и й с я тем; что с целью усиления антиоксидантного эффекта, препараты вводят в соотношении доз 2,5-3,5:1.