Способ определения сульфгидрильных групп в крови

,ЯО 1228809 А 1 би 4 А 61 В 5 0 Фгр ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИДРИЛЬНЫХ ГРУПП В КРОВ смешивания аммиачного буферног вора, раствора азотно-кислого се исследуемой пробы с последующей рацией диффузионного тока, отлича тем, что, с целью повышения т способа и сокращения времени ис ния, пробу добавляют к буферном вору, затем приливают раствор кислого серебра при молярном соот с сульфгидрильными группами 1:(1, диффузионный ток измеряют одн 17аучно-производсвестника, Ю. А. Л ипко ич льство СССР/00, 1963. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Ленинградское нное объединение Буре(56) Авторское свидете167471, кл. А 61 В СУЛЬФИ путем о растребра и регистющийся очности следовау раст- азотноношении 5 - 2), а ократно,Изобретение относится к биохимии, в частности к способам физико-химического (электрохимического) анализа крови на солержание сульфгидрильных (ЬН)-групп.Цель изобретенияповышение точности способа и сокращение времени исследования за счет изменения последовательности добавления реагентов и определенного соотношения азотно-кислого серебра и сульфгидрильных групп.Способ осуществляется следующим образом.Вначале пробу крови приливают к буферному раствору, затем добавляют раствор азотно-кислого серебра в количестве, заведомо большем, чем необходимо для связывания сульфгидрильных групп в крови, в соотношении с сульфгидрильными группами 1: (1,5- - -2) и измеряют диффузионный ток, по величине которого с помощью номограммы опреде. ляют содержание сульфгидрильных групп.Г(ример. 0,1 мл исследуемой крови гемолизируют в бидистиллированной воде при разведении 1:20, 0,5 мл полученного гемолизата переносят в электролитическую ячейку,содержащую 20 мл буферного раствора МН 4 ОН и МН 1 х 10 з Затем добавляют 0,6 мл 0,001 М раствора азотно-кислого серебра. Далее измерякт диффузионный ток, характеризующий концентрацию избытка ионов серебра, оставшихся в исследуемом растворе, по величине которого определяют содержание Н-групп. При этом исследовательская установка снабжена номограммой, на которой отражена линейная зависимость диффузионного тока, измеряемого на последней стадии анализа, от концентрации избыточного азотно-кислого серебра. Для повышения точности определения указанная линейная зависимость (для данного комплекта аппаратуры) может быть выражена простейшей формулой. Сила тока зависит от концентрации электролитов в растворе и от величины потенциала. При амперометрических исследованиях разность потенциалов между двумя электролами электролитичес. кой ячейки подлерживают постоянной, что позволяет по силе тока судить о величине (и за изменением) концентрации электролитов в растворе.Учитывая, чтомл 0,001 М раствора азотно кислого серебра эквивалентен 1 мкМ сульфгидрильных групп, содержание которых обычно относят к 100 мл субстрата, формула имеет вид5 = )ОО - ;" - Ь - )О), - количество 5 Н-групп субстратана 100 мл крови, в мкМ 100 мл; - объем исслелуемого субстрата, мл;степень разбавления крови;- объем раствора 0,001 М азотнок)слого серебра, мл;- масштабный коэффициент, определяемый лля данного комплекта аппаратуры в холостом опыте, в м кМ/м кА;диффузионный ток, соответствуюирй избытку АО, мкА;- фоновой диффузионный ток, мкЛ,)ле 5Г 1)зи постоянн х условиях опыта (степеньразбавления, объемы используемых растворов) формула мс)жет упроститься:=-: с - Ь(1) 10), 20 гле с = 100 --Ч Ч,К анализируемому раствору (гемолизату,растворенному в буферном растворе 1 ЧН 4 ОН и 1 МН,ХО), не содержащему электроактивных компонентов, которые могли бы обусловить диффузионный ток более- 2 мкА, добавляют избыпгок раствора АдМОз. Последний взаимодействует с имеюгцимися 5 Н- групгами анализируемого раствора, в результате чего диффузионный ток, измеряемый после этой добавки, соответствует концентрации избыточной части введенного азотно- кислого серебра. Зная исходное количество Ад(1) ионов и величину их остатка, по израсходованному количествч определяютконцентрацию :Н-групп (СА = С,).Б описываемых условиях опыта Чя0,5 мл; а = 20; Ъ,А,. = 0,6 мл; - 40 мкМ/мкЛ; 1, = 32 мкЛ;4 О 1=- 1 мкЛ. Тогда 5 = 1160 мкМ/100 мл.При постоянных условиях опыта (постоянны степень разбавления, объемы исследуемого субстрата и раствора азотно-кислого серебра) С = 2400 мкМ/100 мл и 5 также равно 1160 мкМ/100 мл.В таблице приводятся дополнительныепримеры а средние и граничные значения соотношения количеств 5 Н-групп и АСМО при определении 5 Н-групп в 0,1 мл крови.1228809 ОтносительДлительность ананая погрешность опрелиза, мин+1,2 1:2 Составитель Н. Гуляева Редактор Г. Гербер Техред И. Верес Корректор В. Бутяга Заказ 2208/1 Тираж 660 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4