Способ моделирования немедленной аллергии

ОЮЗ СОВЕТСКИХОЦИАЛИСТИЧЕСКИХЕСПУБЛИК 3/2 А 61 К 31/715,ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ В ь Ы ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР РСКОУУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ НЕМЕДЛЕННОЙ АЛЛЕРГИИ(57) Изобретение относится к области биологии и медицины и может быть использовано для отбора и апробациипротивоаллергических средств и разработки новых способов профилактики и леченияаллергических заболеваний, а также дляизучения механизмов формирования аллерИзобретение относится к области медицины, в частности к аллергологии и может быть использовано для отбора и апробации противоаллергических средств и разработки новых способов профилактики и лечения аллергических заболеваний.Известны способы моделирования немедленной аллергии,Указанные способы длительны в осуществлении, т.к, предусматривают длительную иммунизацию и сложные манипуляции при введении антигенов.Наиболее близок к заявленному способ моделирования немедленной аллергии, включающий последовательное введение в дыхательные пути 0,1 С/о раствора гистамина и аллергена амброзии. гического процесса. Цель - повышение адекватности модели за счет стимуляции 9 Е - энтителообразовэния, Для этого аллерген закапывают в носовые ходы на фоне предварительного введения 0,1 -ного раствора полиглюкина, являющегося дегранулятором тканевых безофилов и вызывающего выделение из них большого количества биологически активных веществ, что приводит к достоверному повышению образования 9 Е - антител в трахее и легких. Это позволяет получить модель немедленной аллергии, адекватной адлергическому процессу, развивающемуся у больных аллергическими заболеваниями, которую возможно использовать для тестирования эффективности и дозозависимости противоаллергических средств,У) Недостатком указанного способа является получение низкихтитров реагинов(9 Е- антител) в гомогенатах трахеи и легких, что затрудняет оценку влияния различных противоаллергических средств на развитие немедленной аллергии, не позволяет выявить дозозависимость эфФекта,Целью изобретения является повышение адекватности модели за счет стимуляции 19 Е-антителообразования.Поставленная цель достигается тем, что вместо одного медиатора немедленной аллергии - гистамина перед введением аллергена вводят полиглюкин (декстран мол.м.60000+ 10000 Д), вызывающий массивную дегрануляцию тканевых безофилов в большом количестве расплагающихся по ходу15 20 ния закапывали в оба носовых хода в количестве0,03-0,5 мл на фоне предварительного (за 25 30 тестирования эффективности и дозозависимости противоаллергических средств и изучать конкретные механизмы их действия, 45 50 55 дыхательного тракта и способствующий т.о. высвобождению из них помимо гистамина большого количества различных биологически активных веществ.(серотонин, гепарин, прастагландины и др,) разносторонние действия которых индуцируют выраженные проявления немедленной аллергии, Такое техническое решение позволяет получить модель немедленной аллергии, аналогичной аллергическому процессу, развиваощемуся у больных аллергическими заболеваниями, что дает возможность изучать механизмы формирования различных форм аллергии немедленного типа в эксперименте и на основе этого разрабатывать физиологически адекватные способы на-.правленнои коррекции этого патологичеСКОГО СОСТОЯНИЯ,Способ поясняется примером выполнеКрыс линии Вистар обоего пола, массой150 - 250 г., 3-4-х месячного возраста иммунизировали аллергеном амброзии, который 30-50 мин) закапывания 0,1, раствора полилюкина. Контрольным крысам аллерген вводили на фоне закапывания 0,1 О раствора гистамина. Содержание ОЕ-антител в гомогенатах трахеи и легких определяли через.48 ч после введения антигена в реакции непрямой дегрануляции тучных клеток. Показано, что (табл.1) предшествующее введение антигена закапывание 0,1раствора полиглокина вызывает достоверно более выраженное образование сЕ-антител в трахее и легких, чем закапывание 0,10/ раствора гистамина.Таким образом, получена модель немедленной аллергии, отличающаяся высоким содерканием 9 Е-антител в органах дыхания, что позволяет использовать ее для Эксперименты проведены на 30 крысах (тридцати) л инии В иста р, 3-4-месячного возраста. Животным закапывали в оба носовых хода по 0,03-0,05 мл 0,1 О раствора полиглюкина. Через 30 - 40 мин после чего в носовые ходы инстиллировали аналогичное количество аллергена амброзии (Ставропольский НИИ вакцин и сывороток). Контрольным животным вместо полиглюкина аналогичным образом вводили 0,1 О раствор гистамина, через 48 ч определяли содержание ОЕ-антител в гомогенатах трахеи и легких опытных и контрольных животных,Показано, что образование ОЕ-антител у крыс, получивших 0,1 ОД раствор полиглю 510 35 40 кина, значительно и достоверно превышает таковое у контрольных животных. Выявленные антитела относились именно к ОЕ, поскольку прогревание гомогенатов при 56 С полностью снимало их способность вызывать дегрануляцию интактных тканевых базофилов при добавлении аллергена амброзия. Принадлежность полученных антител к цЕ подтверждена также в реакции пассивной кожной анафилаксии.С помощью прототипа возмокно определить подавляет ли исследуемое на наличие противоаллергической активности вещество образование ОЕ-антител в органах дыхания, а также обладает ли оно антигистаминным действием.С помощью предложснного способа возможно тестирование веществ, обладаощих не только антигистаминным действием, но и веществ, блокирующих эффект серота- нина, ингибиторов простагландинов, а также, что особенно важно вещество, стабилизирующих мембраны Гучных клеток, Как видно из данных, представленных в табл,2, гистаминовая модель аллергии для этой цели не приемлема.Кроме того, введение полиглюкина позволяет стимулировать Е-антителогенез в трахее и легких, индуцирул Образование достоверно более высокого уровня антител по сравнению с введением гистамина, что в своо очередь повышает точность исследования противоаллергической активности веществ и повышает порог определения возможной дозы препарата.В качестве примера приводим данные по влиянию левамизола на.образование ОЕ-антител в трахее и легких крыс при использовании гистаминовой и полиглюкиновой модели аллергии.Как видно из данных, представленных в табл,3, из-за недостаточно высокого исходного содержания сЕ-антител при "гистаминовой аллергии" удается выявить подавляющий эффект левамизола только при использовании его в дозе 500 мкгlмл. В то же время при использовании "полиглюкиновой модели аллергии" выявляется супрессорное в отношении сЕ-антител влияние левамизола уже в дозе 100 мкг/мл. Заявляемое изобретение мо:кет. быть использовано для скрининга противоаллергических средств, определения фармакологически адекватных дозировок для проявленич их действия, а также для изучения механизмов их противоаллергического эффекта и механизмов формирования немедленной аллергии,1771743 Формула изобретения Способ моделирования немедленной аллергии, включающий введение аллергена в носовые ходы, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,Таблица 1 Содержание д Е-антител в трахее и легких крыс, иммунизированных аллергеном амброзии на фоне предварительного введения 0,1 О/, раствора полиглюкина (опыт) или раствора гистамина (контроль)мембраны тучных клеток) ганах дыхания крыс образование 1 цЕ-антител в ор ияние интала (стабилиза Количество тучных клеток, дегранулировавших в результате взаимодейс оЕ-антител, содержащихся в гомогенатах трахей и легких и аллергена амзии Статистические показатели Гистаминовая модель алле ги ЕГКИ Контроль (закапывание изиологического астЗакапывание интала оде жащий 1 мг/мл р-р со 100 мк 15,8 15,7 12 - 260,0,0 алле гии юкиновая м Легкие Т ахея Трахе егки кие ахе Закапывание интал нтроль (закапыванфизиологическогораствора) 0 мкг/м мг м 12 10,4 0,4"- 0 Среднее значен. Пределыколебан, оличествокрыс Достовер- ность Среднее значен. Пределы колебан. оличествокры,с Достовер- ность с целью повышения адекватности модели за счет стимуляции д Е-антителообразования, за 30-60 мин до введения аллергена закапывают 0,1 о-ный раствор полиглюкина.51771743 Таблица 3 Влияние левамизола на образование 9 Е-антител в органах дыхания Количество тучных клеток (в ) дегранулироваваих в результате взаимоействия Г Е-антител,со е жа ихся в гомогенатах,и алле генаамб озии Статистические показатели Гистаминовая мо ель алле гии Левамизол Физ. р-р 500 мкг/мл 100 мкг/мл т ахея легкие т ахея легкие т ахея легкие 19;8 20,5 14 - 296,1 7,1 18,9 20,7 3 - 1512 - 25 4" 12 14 - 25 15-28 10 10 10 0,05 0,05 0,050,05 Полиглюкиновая мо ель алле гии Левамизол Физ. р-р 500 мкг/мл 100 мкг/мл т ахея легкие т ахея легкие легкие 17,7 19,9 10,4 32,4 9,2 4 - 18 15- 65 2 - 15 9-23 19 - 230,05 0.01 0,010,05 Редактор Заказ 3794 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета.по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 Среднее значение Пределы колебаний Количество животных Достовер- ность Среднее значение Пределы колебаний Количество животных Достовер- ность т ахея 35.8 18- 54