Способ индикации токсинов сlоsтridiuм perfringens

(51) 5 РЕТЕНИ У СВИДЕТЕЛЬСТВУ ВТО ность реакции коагглютинацмуспособу не превышает 0,0зывания антигена;Целью изобретения является повышение чувствительности и экономичности спо- а соба выявления токсинов С. реггпцепз при сохранении его специфичности. ДЦель достигается процессом изготовле- д ния специфически направленного стафилококкового реагента (антител ьного диагностикума) и новой технологией постановки реакции коагглютинации.00Сущность изобретения заключается в том, что в реакции коагглютинации в качестве специфически направленного стафило- ъ коккового реагента применяют взвесь стафилококков, сенсибилизированных антителами овечьей иммунной стандартной сыворотки, а реакцию ставят в среде раствора глицин-НС буфера, каждый из реагентов вносят при постановке реакции в равных объемных количествах. ии по известно единицы свяГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗ(56) Методические рекомендации по экспрессному способу выявления бактериальных токсинов и анатоксинов в реакциикоагглютинации с помощью специфическинаправленного стафилококкового реагента.Пермь. Пермский институт вакцин и сывороток; 1987. Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к выявлению в первичных посевах исследуемого материала токсигенных штаммов возбудителя инфекционной энтеротоксемии, может быть рекомендовано производственным ветеринарным лабораториям для ускоренного обнаружения токсина О. реггпцепз.Известен способ индикации токсинов с помощью реакции коагглютинации (РКОА) специфически направленного стафилококкового реагента (антительного диагностикума) и антигена исследуемого материала,Недостатком известного способа является необходимость использования для изготовления специфически направленного стафилококкового реагента антител кроличьей антитоксической сыворотки С. регГгпцепз, изготовление и контроль которой требуют дополнительного времени, повышают стоимость конечного продукта (антительного диагностикума). Чувствитель(54) СПОСОБ ИНДИКАЦИИ С.ОвтаООМ РЕВРВаОБСЗ (57) Использование: ветеринар ология, диагностика клострид ность изобретения: ставя коагглютинации со стафилоко гентом. В качестве антител бе лобулины овцы, Компоненты равных объемах в глицин-.Н растворе, Повышается чувст способа, упрощается изготовл та, 3 табл. ТОКСИНОВ ная микробииозов. Сущт реакцию кковым реарут иммуногреакции вС буферном вительность ение реагенСпособ осуществляют следующим образом.Чистые антитела С 1. регЮпдепз иэ соответствующих иммунных овечьих сыворотокизвлекают с помощью иммуйосорбции, Сыворотки диагностические антитоксическиеС 1. регг 1 пдепз типов А, С, О, Е, предназначенные для диагностики заболеваний животных, вызываемых микробами С 1.регг 1 пдепз. В качестве иммуносорбента используют цианбромированную агарозу 4 В,на которой иммобилизован токсин С.регтгпдепз, Чистые антитела, злюированные с иммуносорбента, фиксируют на 10 ной взвеси стафилококка (штамм СО АН-ТУ42.14) путем его сенсибилизации. Сенсибилизированный чистыми антителами стафилококк представляет собой специфическинаправленный стафилококковый реагент -СНСР - антительный диагностикумСтафилококковый реагент, содержащийбелок А, сухой, выпускается по ТУ 42.14, длясерологических исследований, Время изготовления диагностикума составляет 7 ч.Специфически направленный стафи.лококковый реагент, изготовленный описанным путем, обладает высокойчувствительностью и специфичндЬтьюпри использовании его в реакции агглютинации, проводимой по предлагаемой технологии.Предлагаемая технология постановкиреакции коагглютинации при выявлениитоксина С 1. рзгИпдепз в исследуемом материале заключается в следующем, На пред, метное стекло наносят 0,05 мл ( 1 каплю)исследуемого материала (например, копрофильтрата), затем добавляют 0,05 мл (1 каплю) СНСР и 0,05 мл глицин-НО буферногорастворе, Плавным покачиванием предметного стекла капли перемешивают. Реакциюучитывают в течение от 30 с до 3 мин. Приналичии токсинов О. ребг 1 пдепз в исследуемом материале на стекле наблюдается четкая агглютинация с полным просветлениемкапли. Реакцию оценивают по общепринятой четырехкрестовой шкале:- полная коагглютинация. полное просветление смеси - резко положительная;- хорошо выраженная коагглютинация,явное просветление смеси - положительная;- неполная коагглютинация с заметнымпросветлением смеси - слабо положительная;-- отсутствие коагглютинации - отрицательная,Заключение о принадлежности исследуемого антигена - токсина С 1, регг 1 пдепзделают на основании положительной реак ции коагглютинации не менее, чем на , при отсутствии спонтанной агглютинации в контроле, Предлагаемый способ индикации токсинов С. регЫпдепз позволяет выявлять 0,0007 летальной мышиной дозы (ДЛМ) этого токсина,П р и м е р 1, Чувствительность реакции коагглютинации по предлагаемому способу контролируют на последовательном ряде разведений глицеринизированнцх токсинов С 1. регГг 1 пдепз.Полученные данные приведены в табл, 1,Таким образом, предлагаемый способ позволяет выявлять токсин в количестве 0,0007 ДЛМ, т, е. чувствительность его значительно выше чувствительности известного способа.П р и м е р 2. Выявление токсинов О. регггпдепз в шестичасовых культурах-продуцентах токсинов С.регЫпдепз типов В, С, О. Данные приведены в табл. 2,Таким образом, при оценке токсигенных культур чувствительность предлагаемого способа значительно превышает чувствительность известного.П р и м е р 3. Специфичность нового антительного диагностикума, изготовленного по описанной технологии, контролируют в реакции коагглютинации по предлагаемому и известному способам с культурами Е.Со 1 и анатоксинами О. Восу 11 пцгп (типы В и Е).Полученные данные приведенц в табл. 3,Квк видно из приведенных в табл, 3 данных, антительный диагностикум, изготовленный по предлагаемой технологии, не вступает в реакцию агглютинации с гетерогенными антигенами (культура К. Со и анатоксин С 1. Воу 11 пов) при положительной реакции с антигенами О, рег 1 гпдепз, т, е. является специфическим,Использование предлагаемого способа выявления токсинов С 1. регйпдепз в биоло 5 10 15 20 ЗО 35 40 45 гическом материале позволяет (по сравнению с существующим) резко снизить затраты на изготовление специфически направленного стафилококкового реагента (антительного диагностикума), так как отпа 50 55 дает необходимость получения и контролясоответствующих кроличьих гипериммуннцх сывороток и делает возможным использование для сенсибилизации стафилококка стандартных овечьих иммуннцх сывороток,выпускаемых биологической промышленностью.Повышение чувствительности реакции коагглютинации при сохранении ее специфичности делает возможным выявление минимального количества токсинов С 1.1745768 Таблица 1 10 аблиц регГгпоепз в исследуемом биологическом материале, не выявляемых с помощью известного способа.Формула изобретения Способ индикации . токсинов Созтгбца реггпдепз путем постановки реакции коагглютинации исследуемых токсинов со стафилококковым реагентом, сенсибилиэированным специфическими анти- телами, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, в качестве специфических антител 5 используют иммуноглобулины овцы, а реакцию ставят в глицин-НО буферном растворе (рН 2,3-2,4), при этор компоненты реакции берут в равных обьемах.1745768 8в Таблица 3 Составитель В, Калмыков ехред М,Моргентал Корректор О. Ципл Редактор Н, Гуньк Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужго Гагарина. 10 аказ 2365 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5