Среда для изготовления постоянных микропрепаратов из биологических объектов

(51) 5 ТЕН ательск м. ака хник оМикро24 - 169Панцир8-90. ые врат ср ри ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАН Е ИЗОБР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) Ромейс Б. МикроскопическаяМ,: 1953, с.101-205.Раскин Г.ИЛевинсон Л.Б.пическая техника. - М 1957, с.1Буланова-Захваткина Е.М.клещи-орибатиды. - М 1967, с.8 Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для цветовой микроскопии. Цель изобретения - улучшение просветляющей способности и увеличение прочности препаратов,Для этого в состав среды, содержащей просветляющее и мацерирующее вещество - хлоралгидрат, вводят в качестве пластифи-, катора - триэтаноламин и в качестве формообразующей основы поливинилпирролидон при следующем соотношении компонентов, мас.%:Хлоралгидрат 50-65 Поливинилпирролидон 15 - 25 Триэтаноламин 5 - 7 Вода Остальное Среда с триэтаноламином предназначена для заключения неокрашенных объектов и окрашенных гематолсилином,2(54) СРЕДА ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПОСТОЯННЫХ МИКРОПРЕПАРАТОВ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ(57) Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для световой микроскопии. Целью изобретения является улучшение просветляющей способности и увеличение прочности препаратов, Для этого в состав среды вводят триэтаноламин при следующем соотношении компонентов, мас. :хлоралгидрат 50-65; поливинилпирролидон 15-25; триэтаноламин 5-7; вода - остальное. 5 табл,абл.1 представлены примеры соста вов среды с триэтаноламином (составы 1,2 - граничные, 3 - оптимальные значения компонентов),П р и м е р 1, Неокрашенные преп ы членистоногих.Куриных клещей (Оеггпапуззцз 9 аИпагцт), хранящихся в 700-ном спирте, непосредственно из фиксатора переносили в капле заключающей среды на предметном стекле. Монтировали препараты по 5 экземпляров клещей на каждом стекле.Результаты испытания заключающейеды с триэтаноламином на препаратах куных клещей представлены в табл,2.П р и м е р 2. Препараты нематод, окрашенных гематоксилином.Паразитических нематод Ме 1 азтгоп 9 у цз арг, собранных из легких свиней, фиксировали в жидкости Карнуа и окрашивали гематоксилином по Караччи, После промывки червей в течение 1 ч в воде их на 1 ч помещали в 700-ный спирт и затем заключали в среды.1725094 Таблица 1 Таблица 2МВремя затвердевания препаратов Визуальная оценка препаратов качества Время просветления Среда препаратов 4 (1) 9-7 дней 2-3 ч Хитиновые структуры проснвтриваются очень отчетливо. Мягкие ткани совер" женно не видны. форне тело и мелкие структуры хитинового скелета без из,менений 4 (2) 1-1,9 сут 1 сут Хитиновые структуры хороюо просматриваются. Видны контуры внутренних ор"ганов и слабо проступающие мягкиеткани, несколько снижена отчетливость мелких структур хитиноеогоскелета. Многие экземпляры клещейнемното сморщены. 4 (3) 2-3 дня 10-12 ч Хитиновые структуры просматриваются отчетливо. Нягкие ткани не видны.форне тела без изменений. То же7-9 дней То же 1 сут То же Хитиновые структуры просматриваютсяотчетливо, Мягкие ткани едва различимы. форма тела без изненений. Видкостьфора"Бероеве 45 Результаты применения заключающихся сред для окрашенных гематоксилином нематод представлены в табл.3.П р и м е р 3. Препараты растительных тканей, окрашенных гематоксилином.Кусочки листа бегонии обрабатывали и заключали в препараты так же, как и в примере 2,Результаты применения заключающих сред к окрашенным препаратам листа бегонии представлены в табл.4.П р и м е р 4. Препараты хромосом нематод.У живых нематод МетазтгопдШоз арг в физиологическом растворе препарировали гонады и подвергали их действию гипотонического раствора нитрата натрия в течение 10 мин при 37 С. Гонады фиксировали в метанол-уксусной (3:1) смеси и окрашивали ацетогематоксилином в течение 4 ч. Окрашенные половые трубки промывали 10 - 20 мин в 50 о)ь-ной уксусной кислоте, маленькие их кусочки, длиной около 1 мм помещали в каплю заключающей среды на предметном стекле, накрывали покровным стеклом и раздавливали.Результаты применения заключающих 5 сред к препаратам хромосом, окрашеннымацетогематоксилином представлены в табл.5.Формула изобретения Среда для изготовления постоянных 10 микропрепаратов из биологических объектов,вклющающая хлоралгидрат, воду, формообразующую основу и пластификатор, о т л ич а ю щ а я с я тем, что, с целью улучшения просветляющей способности и увеличения 15 прочности препаратов, в качестве формообразующей основы используют поливинилпирролидон, а в качестве пластификатора используют триэтаноламин при следующем соотношении компонентов, мас,о: 20 Хлоралгидрат 50-60Поливинилпирролидон 15-25 Триэтаноламин 5 - 7 Вода Остальное1725094 иуа Табл Время зат" вердевания препаратов Среда Визуальная оценка качества препаратов Время просветленияпрепаратов 4(1) 3-1 дней 2-3 ч Отчетливая, ясная синяя окраскаядер, железистых включений и др.базофильных структур на чистон,прозрачном фоне. Кожно-мускульныйневок и внутренние органы не деформированы,4(2) Окрашенные структуры видны недостаточно отчетливо из-за мутного фона.Тело нематод сиорщено. 1 сут 1 сут Окрашенные структуры видны отчетливо на чистом, прозрачнон фоне. Кожно-мускульный мешок и внутренниеорганы не деформированы. 4-з ч 4 (3) 2-3 дня 3Жидкостьфора"Берлезе Окраска полностью разрушена. То же Среда 4(1) 5-7 дней 1 сут 2-3 дня0,5-1 ч 5-6 ч 1-2 ч 30 4(2) 4(3)3 ЖидкостьФора- Берле- зе Визуальная оценкакачества препаратов Отчетливо видны интенсивно окрашенные в синий цвет ядра паренхимы и проводящих сосудов на чистом прозрачном фоне. Форма клеток и ядер ненарушенаТо же То же Окраска разрушается Окраска разрушается Время затвердевания препаратов1725094 Таблица 5 Время про-Время затсветления вердевания препаратов препаратов Визуальная оценка качествапрепаратов Среда 4 (1) Хороший разброс хромосом, структурыхромосом четкие. Фон прозрачный Во всех 4 (2) Плохой разброс хромосом, все хромосомы слипшиеся. Структуоа хромосомплохо различима. Фон прозрачный 4(3) Недостаточный разброс хромосом.Многие хромосомы налегают друг надругаСтруктура хромосом четкая.Фон прозрачный. Окраска хромосом сильно обесцвечена ЖидкостьФораБерлезе То же 40 45 50 Составитель И.ТарееваРедактор В.Бугренкова Техред М,Моргентал Корректор Т.Малец Заказ 1170 Тираж Подписное ВНИИПИ Госудаоственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 случаях просветления препаратов составляло не более 5 мин Время затвердевания препаратов аналогично времениотносительно среды для всех примеров 1-3