Среда для изготовления постоянных микропрепаратов из биологических объектов

(51) 5 ГОСУДАР СТВЕ ННЫЙПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИ ГКНТ СССР ОМИТЕТОТКРЫТИЯМ САНИЕ ИЗОБРЕТ(54) СРЕДА.ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПОСТОЯННЫХ МИКРОПРЕПАРАТОВ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЬЕКТОВ(57) Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для световой микроскопии. Целью изобретения является улучшение просветляющей способности и увеличение прочности препаратов. Для этого в состав сверху в качестве формообразующей основы вводят поливинилпирролидон при следующих соотношениях, мас, % хлоралгидрат 50-60; поливинилпирролидон 15-25; глицерин 5-7; вода - остальное. 5 табл. тельскийм. акад. я техника, Микроск124-169. Панцирн 88-90. вательности и оставляют на 24 ч до полих растворения и исчезновения пузырьГотовая среда хранится неограниченногое время в закрытой склянке из темстекла. При загустении в нее добавлявода или 70 О-ный спирт,П р и м е р 1. Неокрашенные препаратычленистоногих,Куриных клещей (Оеггпапуззиз даИ 1 пас),хранящихся в 70-ном спирте, непосредвенно из фиксатора переносят в каплюключающей среды, приготовленнойпрописям, приведенным в таблице, Монруют микропрепараты по 5 зкземпляклещей на каждом стекле,Результаты испытаний заключающейсреды на препаратах из куриного клещапредставлены в табл.2.П р и м е р 2. Препараты нематод, окрашенных кармином,Паразитическихарг из легких свинеКарнуа и окрашиваю ст- запо ти- ров 15 - 255 - 7Остальноеполнения сресреды указанныев любой последо-ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Ромейс Б. МикроскопическМ., 1953, с.101 - 205.Роскин Г.И., Левинсон Л,пическая техника. - М., 1957, сБуланова-Захваткина Е.Мклещи-орибатиды. - М 1967, с Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для световой микроскопии.Цель изобретения - улуляющей способности и увести препаратов,Для этого в состав среды, содержащей просветляющее и мацерирующее вещество - хлоралгидрат, пластификатор-глицерин и воду, в качестве формообразующей основы вводят поливинилпирролидон при следующем соотношении компонентов, мас.%:Хлоралгидрат 50-65 ПоливинилпирролидонГлицеринВодаПримеры конкретного выды представлены в табл,1.Для приготовлениякомпоненты смешивают нематод Ме 1 азсгопдуоз й фиксируют в жидкости т в течение суток ацето1725093 Таблица 1 Состав, мас,Ф Свойства Сохраняетокраску 65 15 5 Быстро,проникает в ткани,хооошо просветляет ислабо дееормирует обьект,Плохо и долго затвердевает,.Достаточно прочно затвердевает (за 2-5 дня). Умеренно быстро проникает в ткани, хорошо сохраняет структуры объекта,н 16 60 18 То же Гематои- силином кармином. Из красителя червей переносят на 10 мин в 50 о-ную уксусную кислоту, после чего их заключают в микропрепараты с различными средами (так же, как в примере 1).Результаты испытания заключающих сред на окрашенных кармином препаратах нематод представлены в табл.3.Время затвердевания препаратов такое же, как и в примере 1.П р и м е р 3. Препараты растительных тканей, окрашенных кармином.Кусочек листа бегонии фиксируют жидкостью Карнуа и окрашивают в течение суток ацетокармином. Маленькие, около 1 ммокрашенные кусочки отмывают в 50- ной уксусной кислоте в течение 10 мин и заделывают в микропрепараты, используя указанные в примере 1 среды.Результаты испытания заключающих сред на окрашенных кармином препаратах листа бегонии представлены в табл, 4,П р и м е р 4. Препараты растительных тканей, окрашенных гематоксилином,Кусочки листа бегонии фиксируют как в примере 3 и окрашивают гематоксилином Караччи. Окрашенные кусочки промывают в воде в течение 1 ч и заделывают в препараты, как в примере 3.Результаты; в средах 1-3 и в жидкости Фора - Берлезе окраска полностью разрушилась. В среде 4 на препаратах отчетливо видны окрашенные в синий цвет ядра на чистом прозрачном фоне. Форма клеток и ядер не нару- щена.П р и м е р 5, Препараты хромосом нематод,Хлорал- Поливи- Глицерин Вода гидрат нилпир- ролидон У живых нематод Метаз 1 гопоуоз арг вфизиологическом растворе препаруюттонады и подвергают их действию гипертонического раствора цитрата натрия в течение 10 5 мин при 37 С, Гонады фиксируют в метанолуксусной (3:1) смеси окрашивают ацетокармином в течение суток. Окрашенные половые трубки промывают 5-10 мин в 50;- ной уксусной кислоте, маленькие их кусочки 10 длиной около 1 мм помещают в каплю, заключающей среды, накрывают покровным стеклом и раздавливают.Результаты испытания заключающихсред на препаратах хромосом, окрашенных 15 кармином, представлены в табл.5.Во всех случаях время просветления составляет не более 5 мин, благодаря чему препараты можно исследовать практически сразу после их изготовления.20 Формула изобретения Среда для изготовления постоянныхмикропрепаратов из биологических объектов, включающая хлоралгидрат, глицерин, 25 воду и формообразующую основу, о т л и ч а ющ а я с я тем, что, с целью повышения просветляющей способности и увеличения прочности препаратов, в качестве формообразующей основы используют поливинил пирролидон при следующем соотношенииКОМПОНЕНТОВ, МаС. АЗ,:Хлоралгидрат 50-60;Поливинилпирролидон 15 - 25;35 Глицерин 5 - 7;Вода Остальное.Среда 5-7 дней 2-3 ч 1-1,5 сут 1 сут 10-12 ч 2-3 дня 1 сут 7-9 дней 4 Жидкость фора- БерлеЭе Таблица 3 Среда Время просветленияобъектов Отчетливо видны электривно окрашенныекрасные ядра на чистом прозрачномфоне. Кожно-мускульный мешок и внутренние органы не деформируются 1-2 ч Окрашенные структуры (ядра) виднынедостаточно отчетливо из-за мутногофонаТело у всех нематод сморщивается. 1 сут 4-5 ч Окрашенные структуры видны отчетливона чистом прозрачном Фоне. Кожномускульный мешок и внутренние органыне деформируются. Жидкостьфора- Берлезе Окрашенные структуры видны нечеткоиз-за мутного фона. Большинствонематод сморщенные. 1 сут Визуальная оценка качествапрепаратов Хитиновые структуры просматриваютсяочень отчетливо. Мягкие ткани совершенно не видны. Форма тела и мелкиеструктуры хитинового скелета без изменений Хитиновые структуры хорошо просматриваются, Видны контуры внутреннихорганов и слабо проступающие мягкиеткани, несколько снижающие отчетливость мелких структур хитиновогоскелета. Многие экземпляры клещейнемного сморщены. Хитиновые структуры просматриваютсяотчетливо. Мягкие ткани не видны,форма тела без изменений. Хитиновые структуры просматриваютсяотчетливо. Мягкие ткани - едва заметно. Форма тела без изменений. Визуальная оценка качествапрепаратов Окраска полностью пропадает Время зат- . Время просвердевания ветленияпрепаратов препаратов1725093 Та бли ца 4 Визуальная оценка качества препаратов Время просветленияпрепаратов Среда 0,5-1 ч Отчетливо видны интенсивно окрашенные в красный цвет ядра паренхимыи проводящих сосудов на чистом, совершенно прозрачном фоне. Форма клеток и ядер не нарушена. 5-6 ч 1-2 ч То же То же Окраска разрушаетсяЖидкостьОкрашенные структуры (ядра) виднынедостаточно отчетливо из-за несколько мутноватого фона. форма клеток и ядер не нарушена. 4-5 ч Жидкостьфора- Берлезе Таблица 5 Сеа Виз альная о енка качества п епа атов Хороший разброс хромосом. Структуры хромосом четкие. Фон прозрачный. Плохой разброс хромосом. Все хромосомы слипшиеся. Структура хромосомплохо различима. Фон прозрачный.Недостаточный разброс хромосом. Многие хромосомы налегают друг на друга. Структуры хромосом четкие. Фон прозрачный.Окраска разрушена.Недостаточный разброс хромосом. Большинство хромосом налегают друг на друга. Структура хромосом просматривается плохо. Фон немного мутный. 4 Жидкость ФораБе лезе30 35 Составитель И.ТарееваРедактор В.Бугренкова Техред М.Моргентал Корректор Л.Бескид Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 Заказ 1170 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5