Способ получения анатоксинвакцины против стафилококкоза птиц

(5)5 А 61 К 39/085 госудАРстг Р)тый КО;литетпО изОретения;л и Открйтия)лПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Курский сельскохозяйственный институт им. проф. И,И.Иванова(56) Бургасов Н.П. Руководство по вакцинному и сывороточному производству. - М 1978.Осидэе Д."), Ветеринарные препараты. - М 1981.Дзагуров С,Г Резепова 1 Л.И, Справочник по применению бактерийных и влрусных препаратов. - У.: Ыедицина, 1975,(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАТОКСИНВАКЦИНЫ ПРОТИВ СТАОИЛОКОККОЗАПТИЦ Изобретение относится к микробиологии, о частности к методу получения анатоксин-вакцины для специфической профилактики стафилококкоза птиц.Изоестены способы получения анатоксинов для профилактики столбняхэ, стафилококкооой инфекции, дифтерии, формолвакцины прэтио диплококкоаой септицемии телят, поросят, сальмонеллеза, основанные на детоксикации токсина и инактивзции бактерий, вирусов формалином 1; 2.Иэоестен способ получения стафилококко,"его энатоксина, предусматрив.-,ющил выра,:энне стафилококков но ээеио 2(57) Изобретение относится к микробиологии, в частности к получению анатоксин-вакцины для специфической профилактики стафилококкоэа птиц, Цель иэсбретения - упр цение технологии и повышение активности целевого продукта. Способ заключается в выращивании стафилохоккоа на питательной среде и инактивировании их с детоксикацией токсина в анатоксин с помощью формалина. Сущность лзобретения заключается в том, что суспенэию стафилококкоо, выделенных от больных стафилококкоэом птиц, после выращивания на жидкой питательной среде с 5-7; хлористого натрия и глицерином в течение 7-10 дней до концентрации 5 - 7 млр.микробных клеток з 1 мл стерилизуют при 85-1 С 0 С в течение 1,0 - 1,5 ч с детоксикацией экзо- и эндотоксинов 0,6-0,8-ным раствором формалина при экспозиции 45-55 С е течение 7-10 дней. Используют аэроэольно,Мдролиэатной среде с добавлением сыворотки крови и установками для подачи стерильной углекислоты, кислорода с последующей детоксикацией токсина и инактивацией стафилококков 0,4-0,6,4-ным раствором формалина 3. Недостатками способа являютс отсутствие стерилизации прогреоанием стафилококков, необходимость пода 1 и стерильных газов, длительность детоксикации, слабзл активность препэрата из-эа испльэовэния только продукта аутолизэ и биосинтеза стафилококков, т,е, экзотоксинэ, и его внутрико,кное применение.и 1 с:"."1 "с т з,Лч 1 ч"с,; ла .с;- кс(д птиц 1 г, , ;)г Г.;,;11;".", 11 т ". ,.а г рд, ,абст 1;и ,,т 11 но т у.;,.1 Г:1,ч 11 сотого и, л "ти-".,;Ого с ;С(сд 1 з ШГ;1 О:,Сс .:т.: ,.ЛСКО,КС, СЫ Ь(С;тИХ ЗДСслсод 1 и 1 у 11 т:.,Г,1.ль 11 г;.(,: тнил - ; (ро 1 ен 11-; т.х 1 О- l с.и и псов 1(.11 о дктсна ти целевогои ду 1 та.Согласна с,асссу за. лОчгОгцсмусл в сы".цлса 1;с;-111 лскокксс н. г(итдтельНой СРЕД 11:.".К :,С.1 РССДН,И 11 Х С ДЕТОКС 1 КДЦС ТОКСа О а 1(ДТО.С 11 С ПС(01 ЦЬ 10 1,арл(длина,спальзуют стд, 1 О:акки, выделенные от г;тиц, бальных стсфилсксккозсм, и обло,.дю,цие тс:.С 1(го,ными и ПЛДЗЛ 10 КОДГ".эОЦИ.4 И СесйС 1 ЗЗМИ, КОТО- р е сыраьц"л-, на жидкой сред о течение10 днеи пс 11-.3-4 О Со 5 7 1"д микро бных клетс . 1 л с послг,." с 1. й стер 11 лизацей м;":к:Оо"ган,1 змов при 85 - 100 С в течение 1 0-1,5 ч и дзтоксикац ".ей токсина О,б - 0,8%-ны ,армглинсл 1 пр,1 45 - 55 з течение 7 - 10 дней, а готовый препарат при меняют двукратно с и .тер,алом 7-10 дней путем аэрозальнаго ргспыленля о течение 40 мин для цы 1 ят 10-20-дневного оозрастаз расчета 1 11-12 л д 1(атскслн-вакцины 1 га один птичник с обьемом 5000 м ..зВ связи с;стой 1 иоость 1 о стдфилскоккосого токсина к киплцени 1 О д:тсксикацию токсина 1 ор:;длина прсссдят пр;1 45 - 55 ОС после пред.1 дртельной стерилизации микроорганизмов при 85 - 100 С в 1 ечение 1,0- 1, 5 ч д л .". и о л н О Г ы и н -" .к т и с д ц и и стафилскс ксьс 1:1 долаг,ия андаксина при сод 1 О-те,11 ческол 1 гирсл,1 зе культур.Ре .11 л; ст;рилсции стгфи;1 скоккоо спс" обста ет удел 11;.;,1 ю коплакса тикси- НД-ПРОТЕИНА О 11 сс.кз 111;.С Д КЛЬУД.Ь- нсй ждкс до О,3 - 0,7 мг/мл вместо О,0-0,25 л а"тс "дсс дния и псовОн:.ю биологч".скОЙ дснасти препарата.Отл. 11(т 1:1 дя о:або(ость и-иготоол 1 я и д."рс:аль.Кй сп;са,) 1,;1 мснзн,;я д;(атоксиндкцлны ом. сто т;дд,"ц 1 оннсга подкожноговнутрикажного сведения предоторд 1 гст 95-97 Я пс;сг 1 овья цыплят 1 О - 30-дневного оозрзс" д ст:дсалевдния ст; ис ;:;аз;.;.П О ИЕ 1 1 Орпръюл 11гф 4 гl Ет ли ссдз,:., .рс.";.здт:-(".О с(1 те 1 "- суа сс,",1 с д,. Клостого. О 1 я огс в,л; с",ч с 1 . г,:а",зз 1, .О з 1:е;1 с О мл ГБ 1, :., с"411 с с д уста(гсливлли дм 1 щ.;. са о:сх с-,1.(х ло 7,7 - 7 Я;.,Зд(ОХЛ-Оа;.,., а-,., П С.:; ;. ПИгат;Ь.ую к,. Л ., ау рд, - ,111(.,х штдлл(сдстд11 сь оккрс 5.д 11 гелс 51,ерДега", вы- Г);".,Ч(1( , С 1. С ( Л Л К С 11 Д Х.Рост стаф",локсккоо оо всех среда, прсхср 11 гурне в теч 1(11 е 5-7 дней: 1 л средах с сах:1 г д;"и о сснсс 1 см прекрд 1 цается, а с глице;",1 нол 1 продслждзтся до ко 11 центрдции 10- 5 л;лрд. в 1 мл. Реакция культурдльной 11 ДКОСТИ С ОЗВЕСЬЮ СтфИЛОКОККОВ Г 1 ОСЛЕ семиднес 11 О; о инкубирооания состэвляет о средах с сахарами 6,2, д с глицерлном - 6,8.П р и м е р 2. Выраженные о течение 510 7 - 10 дней стдфилскскки нд жидко 1 питдтельной среде падосргнуты прогреванию при 85-100 С втечение одного часа с последетоксикации токсина о анатоксин при 45 - 55"С о течение 7 дней. Перед аэроэольным рдспь 1 лением к сб 1 цсму сбьему стафилококковой анатоксин-вакцины добавлен глицерин, Аэроэольное распыление дндтоксин-вакцины проведено доукратно с интервалом 7 дней по 1 л препарата на одну обработку в течение 40 мин. Заболевания цыплят стафилококкоэом не отмечено.Сохранность птицы, оакцинирооднной стафилококкооой анатоксин-вакциной, составляет 97% при уоеличенил привесов на 15%. Однако при комиссионной проверке и убое вырдгценнсй птицы выявлено 15 голоо 20 25 30 с пдткартиной, характерной для стафилококкоза.П р и м е р 3, После семидневного инкубироодния стдфилококков на мясокдэеиногидролиздтнсй среде с глицерином 35 суспенэио микроорганизмов подвергают сте 1 млизации при 10 ООС о течение одного часа и детоксикации 0,7;-ным фор.1 длином при 55 С в течение 7 дней.После проверки нд стерильность. отсутствие аллергенных и аллергизируюьцих свойств на морских свинках суспензию дндтокс 1111-вакцины используют для доукратного с интервалом 7 дней дэроэольного распыл:н:;я в течснио 4 С мин из расчета 1,0 - ,2 л на птичник с 40 тысячами цыплят 15-дневного возраста. Заболеваел 1 ость птиц стдфилокскксзс 1 и падеж от него в средне 1 состаоляет 50-75 голоо по каждому птичнику.П р и и е р 4, Культив 11 ровдние стафилококксз проводят нд жидкой питательной сде с глицерином о Тече(11 е 7 дней до к;нцочтрдции 5 1 млрд. микробных клеток в 1 мл, Для получе 1,( дндтоксин-озкцины сусг 1 ензию стафилскоккоо инактиоируют при 85 С о течение 1,5 ч, д затем проводят детскс 11 дцию 0,5",:-1111 раствором фсрмдли- (3 при 15 ОС д тече 1 ио 10 дней,10 50 15 дую им доб" олением формалина до 0,7%- ной конце 11 трации формальдегида дляПосле про и и;. .: 1 льос 1 ь, ток. с ин с с т ь1,:.) т Гз. д ;,;.; с л ьм р пыленем разводят ч,зрдстдс,;см с 5-ным глицгри;О в с.)с, свнии 1;5, Азроэольнсе рдспыленис .)О,одят в течеве 40 мин из р;счета 1 О л Лтигс, Исходной дндтскс.н-гкц 11 ны нсдн птични обьемом"Г 0 и с 40 т;, Г л.и цыплят 15. дневного еозр; сэ д,Повторус обрдботк) роводят через 10 дней, ЗгбслагдИе и отход цыплят от стафилокскксзд после р 1;)лзнен,я стдфилсксккОдс)1 дндтскси 4-ед):ц,составляет 1,7,. При иИ)лене ии аидтоксин-егкцины ОтрицдтельнсГО Гляния препдрэтд О Отме чено, цыплята г;.1 бздляот в ".нз 12 - 16, больше по срдв.ению с кстрольными.П р и м е р 5, Стафилокгкковую культуру выращиваОт нд жидко питтельной среде с глицерином в течение 10 д,ей до 7 млрд. микробных кле 1 ок в 1 мл подвергают стерилизации при 1 ОО"С в течение одного часа, для детоксигдци дсбавл ют формалин до 0,7 Д-ной конечной концентрации, Детскси. кацию проводят при 55"С е те.ание 7 дней, После проверки на стерильность, отсутствие переход:гндтоксина сновь в токсин, препарат использован для двукратного с интервалом 10 дней азрозсльного распыления из рас Ота ,5 л на один птиц. их обьсмом 5000 гл с 40 тысячали цыплят 20-днееногс возраста, перед распыле,ием препарат разводят физрдстеором с 5";, глицерина в соотношении 1:5, Здщитны 1 эффект от стафилококкоза днатоксин-вакцины составляет 97,57П р и и е р б, Для вырдщивдния стафилококков используют мясо);аздиногидролизатную и синтетическус среды с глицеринс)л беэ гсддци углекислоты и кислорода, Ст; .;Лскокки культивируют при 38 С в те Он О 10 дней, су-пензию стерилизуют при 1".ОС в течение одного часа, К инактиеирГ данной суспензии стгфилококксв добавляют фср лальдегид до О,о,ЬО 1 КОНЦЕНТР.)Ц) И ВЬДЕРжИВгют В тЕР)ИССтДТЕ при 55"С в течение 7 дней при пер.Одичаском полешиедн 1 и. Здте;. Прсдзрэют на стерильность и полноту икт 1 ддции,Анатоксин-здкцину ргспляют аэрсэольно д.джд 4 с интерэдлсл, есс .ль дней при эхспоз 1 и) 40 мин, Здбс евднид Гтицы ста+илокс ;.с.: зи в течен 2,5,;гс, нг отмечено. Конг,.сл;нсе запах:ение 60 голод кур (по десять 1;э кдыдсго Г 1-. яник.-.) с"спснз 11, й СтафИЛОКСККСВ Д;РСЗСЛЬНОЗ РЗСПЬГЕ.хо 1: ния и пд;,:,;д птицы,П р и . е р 7. Д;.СьрзЦдаия и приготовлен я стг, и; с,сх.;:. о О д д-с .с л аФормула изобретенияСпособ поггучси., андтскс 1-л=,кциы ПРОТИВ СТафилсхох хоза ПТ 1 Ц, ЛКЛ .)Ч) ЮБ. 11 Б 1 рд . здн 1 е культуры ст, 41,;сол : о- ГдтсЛЬсй Срз , стэрРЛ;Зэ,11 и,:1;.:1110 15 20 25 30 35 40 45 50 на С 1)нте)ическг) ср"де с глОргсмс- ГОЛЬЗСВЗН ШТДМК .ДГСПВ, ,;,Г.ЛЕН й О Г сольной стаилоксккозОСл п 1 цы.) пяты) деь культи. .Зхпн накоплг)ие бдктср- альной массы составляет 4 Гл;.д. микробных клеток а 1 мл, нд седьмой день - 5 в.:,лрд. лихробных клеток в 1 мл, д нд дссятьй день - 7 млрд,мхрсбных кл:с д 1 мл, Б пссле;1,ющие дни .Гльтивирогдня концентрдц 1 л )и,;рооргд)пзгОд не удел чь;ется.Автоклдвирсва 1 ие при 80 С выращенной культуры ст д ;."лскокхол не о.еспечивдет псг )Ло лнгктддцию микрсор гнизмов, а при режиме лвтоклгвирсвдн 1 я 85 С в течение 1,5 ч и стсоилизэции 100"С в течение одноо гаса происходит полная инэктигция микроорганизмов и максилдГь)Ье выделение ток" иков в культурдльную жидкость.Получение андтоксин-вакцины проводят с по)лощью О,ИЯ-НОГО рдствсра формалина при 50 С в течение 10 дней. Отсутствием токсичных свойств культурдльнсй жидкости прогеряют путем подкожного введения ее белым лышам по 0,2 - 0,5 мл и морским свинкам - 0,80 мл. Аэрозольнуо обработку проводят в соотеетствии с примерами 2-6.П р и м е р 8. Посев маточной суспензии штгммд 5 т.гогепз,выделенного от сельсксхоэяйственн 4 х животных, проводят ча мясоказеиногидролизгтной среде с глицерином. На пяты 11 день ндкопление бактериальной массы составляет 4,5 ллрд. микробных клеток в 1 мл, на седьмой день - 5,2 млрд, микробных клеток в 1 мл, нд десятый день - 7 млрд. микробны): клеток в 1 лл. Получение и применение анатоксина прово- ДЯТ ПО РсжИ МУ и Р: и Е О а 7.Таким образом, преимущестегми способа получения анатоксин-вакцины против стдфилококкоэа птиц являются испслъзовг" ние мясоказеиногидрсгпздтной или синтетической среды с глицерином без сахзров и подачи стерильной углахслсты, ермическая индктивац 11 я сусензии стдф 11 лскок код, детсксикация токсинов формэлином при 45 - 55 С и дэрсзольнс 6 Оасп:ление препгрэтд, Питдтельнье средь без сдхгров при подышеннсм режиме стерилизаци Обсспечивдют 1)ыстрь 1 рост стд 1 лскскксв, Д ПОСЛЕДУЮЦДЛ СТЕРИЛИЗЗЦЯ М 1 ОООГЛ низл;сд при 05 - 1 СС 1,0 - 1,5 ч СГсс-бствует дополнительному выделениО тсксил.1705 Г 31 Состзеитель Г.СООЛОилТ:.,".равд Л.Г,Горсен Гол Корректор С.Черни Редактор 1 Ж ллз Захзэ 220 Тиром ПОДПИСК 08 ВНВ.ПИ Госудзрст:."Кна: О ко.,;,тет," Оо ндОГ-:.Гснияч м открцтиям при ГХНТ СССР 11 "03 "М"Р цс 1 д чзб 4/5 чеП изйодстеенн:".5.айте. ьски кс, . ,; :.т : .;.т";нт, " ужГОрод, уй. ы,ринд,о ПОСЛОД/181 .:1,ОТОКСКЗН .:1 ТО;СИНО фо,Гзлином, 6 Г Г, и ч о д 3 Г . Д с т."4 что сЦЕЛЬГО УЛ, Р;,ОНИЧ ТЕКНОЛОГИ И П. Г,Ь 1 ЫОНИРОкТИВКОСТИ цс 8,АЛОГО Про,.71: ТО Г 1"-ос,Д Оьл )зциезкие 1 Гчу ДО 1 ГГ 1 т 1 ю 3, Глисъ 4рина, культ;. ру ецрвщиезхд а течение 7-10