Способ иммунизации животных

СОЮЗ СО 8 ЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 1676629 9) (1) К 39/39, 39/12 5 Ц ЖИМЕ ЕНИ ЕТЕЛЬСТ ВТОРС КОМУ М еенный научноинарных препаев, В.В.Гуненова и С.В.Лас, кл. 424-88,1979. муномодулируюидов. Микология с. 345, 1985,ГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБ(71) Всесоюзный государстконтрольный институт ветератов(56) Патент США 3 Ф 3849551Кашкина М.А, и др, Имщая активность полисахари фитопатология, т. 19, в. 4 Изобретение относится к иммунологии и ветеринарной вирусологии.Цель изобретения - повышение иммуногенной активности противовирусных вакцин.П р и м е р 1. Для осуществления способа культуру грибов ТгсЬорЬутоп чеггосозов или ТгСЬорпутоп вептадгорЬутез выращивают на поверхности сусло агара, рН 6,4 - 6,8, в стеклянных колбах или матрах в течение 10-20 дней при 26 С, после чего ее смывают или снимают скребками с поверхности агара, измельчают в стерильном гомогенизаторе до получения суспензии микроконидий, и при необходимости лиофилизируют в ампулах, Концентрацию микроконидий в суспензии определяют подсчетом клеток гриба в камере Горяева, Жизнеспособность спор определяют по количеству выросших коло(54) СПОСОБ И МУНИЗАЦИИ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к иммунологии и ветеринарной вирусологии, Целью изобретения является повышение иммуногенности противовирусных вакцин. Для этого используют в качестве иммуностимулятора суспензии микроконидий грибов-дерматофитов, выбранных из группы ТгсйорЬутоп чеггосозов (ВГНКИ 1 Ф 130, 130 Л и 153) или Тг)спорЬутоп вептацгорутез (ВГНКИ М 135), При этом на одну прививочную дозу вакцины используют суспензию, содержащую 4,0-8,0 млн, живых спор. 4 табл. ний на сусло агаре в чашках Петри, засеянных культурой гриба.Иммунизацию крупного рогатого скота против парагриппа - 3(ПГ) проводятавей путем введения живой вакцины ПИ-З, ко торую предварительно ресуспендируютдо 4 рабочего разведения (доза 2 мл) и смеши- (Ь вают с микроконидиями штамма 0 с, Т.чеггосозов ВГНКИ М 130 Л из расчета 8 Я млн. живых грибных клеток в одной дозе Кр вирусвакцины.Трем(1, 2 и 3) группам телят(по 10 голов в группе) полученный биопрепарат вводят внутримышечно, двукратно с интервалом ф соответственно 10, 20 и 30 дней. Для контроля в те же сроки иммунизируют по 5 телят вакциной против ПГбез добавления микроконидий гриба. Титры антител к вирусу возбудителю ПГв сыворотках крови телят определяют в РТГАдо иммунизации и в раз 1676629ные сроки после второй инъекции антигено в. Резул ьтаты се рологическ их исследо ваний, представленные в табл. 1, показывают,что у телят, иммунизированных по предлагаемому способу, титры специфических антител в сроки от 10 сут. до 1 года послеиммунизации существенно выше (на 0,5 -1,5 о 92), чем у телят, иммунизированныхизвестным способом только вакциной против ПГ-З,П р и м е р 2, К вакцине против ПГ перед применением добавляют микроконидии штамма Т.неггцсоэигп ВГНКИ М 130 израсчета 6,0 млн живых спор в одной дозевирусвакцины.Трем (1, 2 и 3) группам кроликов (по 5животных в каждой) вводят полученнуюсмесь внутримышечно, двукратно с интервалом 10, 20 и 30 сут, Кроликов трех контрольных групп (4, 5 и 6) в те же срокивакцинируют вакциной против ПГбез добавления микроконидий гриба, Кроликамеще трех групп (7, 8 и 9) дважды, соответственно через 10, 20 и ЗО сут, вводят толькомикроконидии в дозе 20 млн, кл.Титры антител к вирусу возбудителю парагриппа в сыворотках крови кроликов определяют в РТГА до вакцинации и в разныесроки после второй инъекции антигенов. Результаты представлены в табл, 2.Данные табл, 2 показывают, что у животных, иммунизированных по предлагаемому способу вакциной против ПГ-З,содержащей микроконидии штамма М 130,титры специфйческих антител, спустя 10 -ЗО дней после второй инъекции препаратана 1 - 2 о 92 выше, чем у кроликов, вакцинированных известным способом только вакциной против ПГ-З,П р и м е р 3, Для иммунизации кроликов против микосматоза вирус-вакцину изштамма Ввируса миксомы после ресуспендирования до рабочего разведения -10 ИДБол смешивают с микроконидиямилиофилизированного штамма Т,неггцсоэигпВГНКИ М 153 иэ расчета 4 млн, живых микроконидий в одной дозе вирусвакцины,Шесть кроликов иммуниэируют введением этой смеси внутримышечно однократно. Еще шести кроликам вводят такжевнутримышечно однократно вакцину против миксоматоза в дозе 10 ИД 5 омл без добавления микроконидий,До иммунизации в сыворотках кровивсех кроликов антитела к вирусу миксомы вреакции диффузионной преципитации невыявлялись.На 7-й, 14-й и 21-й дни после иммунизации по 2 кролика иэ каждой группы и двухконтрольных неиммуниэированных эаража ют вирусом миксомы с целью определения сроков формирования и напряженности противовирусного иммунитета,5 10 15 20 25 30 35 4045 50 55 Перед заражением у кроликов берут кровь для определения титра антител в И ФА (иммуноферментный анализ).Эффективность иммунизации оценивают по индексу защиты, представляющего собой степень снижения титра контрольного вируса миксомы на вакцинированных животных по .сравнению с титром того же вируса на неиммунизированных кроликах. Индекс защиты от 39 и выше свидетельствует о формировании напряженности иммунитета у иммунизированных кроликов,Результаты, представленные в табл. 3, показывают, что добавление к вакцине против миксоматоза кроликов микроконидий Т.неггосозот М 153 стимулирует антителообразование, ускоряет формирование иммунитета и усиливает его напряженность,П р и м е р 4. К живой вакцине против миксоматоза кроликов из штамма Вв рабочем разведении 31 ИД 5 о/мл добавляют микроконидии гриба Т.гпеща 9 горйутеэ ВГНКИ Ф 135 из расчета 8 млн. живых микроконидий в одной иммуниэирующей дозе,17 кроликов иммунизируют введением полученного препарата внутримышечно однократно, 17 других кроликов иммунизируют путем однократного внутримышечного введения вакцины против миксоматоза вдозе 31 ИД 5 о/мл без добавления микроконидий, Группу кроликов не вакцинируют (контроль). До иммунизации у кроликов антител в реакции диффузионной преципитации не выявлялось,На 7-й, 14-й, 21-й и 28-й дни после иммунизации по 4-5 вакцинированных кроликов из группы заражают вирусом миксомы с целью определения динамики формирования поствакцинального иммунитета, Перед заражением у кроликов берут кровь для определения титров антител в И ФА, Результаты и редставлен ы в табл.4. Как видно из полученных данных, добавление к вакцине против миксоматоза кроликов микроконидий Т.гпепта 9 горпутез стимулирует антителообразование и ускоряет формирование иммунитета у привитых животных.Таким образом, добавление к противовирусным вакцинам суспензии микроконидий грибов-дерматофитов иэ расчета 4-8 млн. спор в иммунизирующей дозе препарата стимулирует иммунный ответ, что выражается в усилении антигенной и иммуногенной активности биопрепаратов и, тем самым, повышении их эффективности.1676629 Формула изобретенияСпособ иммунизации животных, включающий введение биопрепарата с иммуностимулятором, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения иммуногенной активности в качестве иммуностимулятора используют суспензию микроконидий грибов-дерматофитов в концентрации 4 - 8 млн, живых спор в иммунизирующей дозе био препарата,Таблица 1 Тит ы антител после в хк атной вак ина ии че еэ, ней Вводимый,препарат Количество животных, гол,Интервал между вакцинациями, дни445 БО 20 О 7,4+ 0,ЗЗ 7,4 + 0,24 Б,О+О,ЗБ 7,8" 0,34 9.0+028 8.5+0,33 8.2 + 0,42 9,5 + 0,37 8 Б+029 89.029 4,0 + 0,27 8,4 + 0,33 5,4 + 0,6 8,2 + 0,26 5,20,34 7,90,2 О О 20 10 30 6,7 0,33 8,1 + 0,45 О 4,8 . 0,2 7 5 О 28 5,0 0,83 7,8 .0,58 5.60,5 7,2 ". 0,47 5 5 5 5,00,76,2 0,376,0 + 0,4 6,5 0,28 7,4 + 0,24 7.0 + 0,7 Б,7 + 0,25 9,0 + 0,44 8,7 + 0,74 7,5 . 0,287,4 " 0.48,0+0,4 10 20 30 П р и м е ч а н и е: П - парагрипп; Е - Тг. чеггцсоэцпз. Таблица 2 Тит ы антител после в хк атной вак ина ии че еэ, ней Интервал между вакцинациями, дни Вводимый препарат Количествоживотных,гол. Группа 10 30 20 П р и м е ч а н и е, П - парагрипп; Т - Тг, чеггцсоэца. Таблица 3 Рез льтаты иссле ований Дни исследования после им,мунизации Вводимый йрепарат Груп- Количество жипа вотных. гол. Титры антител в ИФАТитры вируса миксомы вИ эомл на к оликах81 П риме чан ие: М- вакцина против миксоматоза кроликов из штамма В. Т - суспензия микроконидия штамма Тг. чеггцсозцгп %153 1 2 3 4 5 6.7 8 9 5 5 5 5 5 5 5 5 5 В-на ПГ+ Тг. чег, в-на пг-з + Тг. чег. В-на ПГ+ Тг. чег. В-на ПГв-на пг-з В-на ПГМ+ТММ+Т ММ+ТМ П+Т П+Т П+Т П П П Т. Т. Т. 7 7 14 14 2121 10 20 30 10 20 30 10 20 30 3. 1.6 5,6 6,10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5.1 5,1 5.1 5,1 5,1 5,1 8,7 ф.0,227,4 + 0,49,9+0,286,9 + 0,678,3 +0.77809000 7,7 0,93 8,60,65 9,Б 0,28 6,5 +0,5873 0818,3+0,70 0 0 2,0 3,5 0 5,1 5,1 5,1 5,11676629 Таблица 4 Рез льтаты иссле ованил Дни исследованил после им- мунизации ВводимыР препарат Количество животных. гол,группаИндекс защиты Титры антител в .д в ИФА Титры вируса миксомы в 1 И мл на к ликах1 Ч 28 5,6 28 5,6 Составитель С.Светлышев Техред М.Моргентал Корректор О.Кравцова Редактор И,Сегляник Заказ 3062 Тираж 446 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 11 5,1 4,1 2,1 5,1 5,1 5.6 О, О. 6,1, О 2,2 2,1, О, О. П ри меч а ни е: М - вакцина против миксоматоза кроликов. Т - микроконидиидерматофитов штамма Тг, вептадгорьутез %135 5,6 5,6 5,603,5 3,5 5,65.65,6 5,6 5.6 5,6 5.6 5,63.52,5 5,6 5,62,0 2,5 3,55,6 1;12800 (все) 1:12800 (все) 1:12800 (все)