Способ определения антиэритроцитарных антител в сыворотке крови животных

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ Н АВТО ическои химии 10.Л. Журав тогические 108-112. ме ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР. ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Институт биооргАН БССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИЭРИТРОЦИТАРНЫХ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКЕ КРОВИЖИВОТНЫХ ЯО 141861(57) Изобретение относится к иммунологии, 1 ель изобретения - повьппениечувствительности способа. Мышам вво"дят эритроциты барана. Затем внутрибрюшннно животным вводят растворН С-глицина. Через 24-60 ч у животных производят забор крови. Сывороку крови разводят и инактивируютЭритроциты барана добавляют в лункис сывороткой крови, инкубируют и центрифугируют. Радиоактивность антиэритроцитарных антител измеряют с помощью сцинтилляционного р -спектрометра.1418617 Формула, изобретения Составитель М. ВасильевТехред Л.Олийнык Корректор В. Романенко Редактор С. Пекарь Заказ 4 147/4 1 Тираж 847 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано дляопределения антиэритроцитарных антител в сыворотке крови животных,Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счетметки антител п ччто радиоактивнойаминокислотой С"глицином и подсчета радиоактивности комплекса меченыеантитела - эритроциты в сцинтилляционном счетчике.П р и м е р 1. Трехмесячных мышей линии СВА массой 20-22 г иммунизировали,внутрибрюшинно введением 152 10 эритроцитов барана в 0,2 мпраствора натрия хлорида. Через 72 чпосле иммунизации в хвостовую венуживотных вводили растворС-глицинаиз расчета 1 мкКи/г массы животного, 20Спустя 60 ч после введения радиоактивной аминокислоты из заднеорбитальногосинуса животного пастеровской пипеткой забирали 0,5 мл крови. Полученнуюсыворотку разводили в 4 раза 0,02 М 25Фосфатным буфером с рН 7,4 на 0,15 Мраствора натрия хлорида и инактивиро вали в течение 30 мин при 56 С. По0,1 мп приготовленной таким образомсыворотки вносили в лунку 96-ячеечного пластикового микротитратора дляиммунологических реакций с круглымдном. Затем в ту же лунку добавляли0,1 мл 53-ной взвеси эритроцитов барана и инкубировали 2 ч при 20 С,После инкубации эритроциты триждыотмывали центрифугированием (по 5 минпри 1500 об/мин на центрифуге ОПН)в 0,02 М фосфатном буфере с рН 7,4 на0,15 М растворе натрия хлорида и переносили в счетные флаконы, содержащие1 мп сцинтилляционной жидкости. Радиоактивность антиэритроцитарных антител,содержащихся в исследуемом образцесыворотки и присоединившихся к зритроцитам, измеряли с помощью сцинтилляционного р -спектрометра и выражалив имп./мин,В этих условиях среднее количество.антител (6 животных) составило25331,7 + 19,807 имп/мин.П р и м е р 2, Иммунизацию мышейи подсчет количества антител проводили,как описано в примере 1, но вводили" С-глицин в дозе 5 мкКи/г за 24 чдо взятия крови и испольэовали 103-нуювзвесь эритроцитов,В таких условиях количество антител составило (среднее из 6 животных)14002,4 + 19,946 имп/мин,П р и м е р 3. Иммунизацию мышейи подсчет количества антител проводили, как описано в примере 1, но вводили М С-глицин в дозе 2,5 мкКи/г за48 ч до взятия крови и использовали107-ную взвесь эритроцитов.В этих условиях количество антителсоставило (среднее из 6 животных)13162,5 + 62,0 имп/мин,Способ определения антиэритроцитарных антител в .сыворотке крови животных, включающий забор крови, выделение из нее сыворотки, термоактивацию и инкубацию сыворотки с эритроцитами, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности спо-, соба, перед забором крови за 24-60 чв вену вводят раствор аминокислоты 4 С-глицина в дозе 1 "5 мкКи/г массы тела, а инкубацию сыворотки осуществляют с равным объемом отмытых изотоническим раствором при рН 7,2-7,6. 5-103-ной взвесью эритроцитов, далее измеряют радиоактивность и по ее величине определяют количество антиэритроцитарных антител.